产果胶酶菌株——黑曲霉的复合诱变及产酶条件研究

以产果胶酶菌株——黑曲霉YQ-13为出发菌株,通过紫外与氯化锂复合诱变反复处理,最终获得1株能够稳定遗传的突变菌株YQY-36,其果胶酶活力为67.6 U/m L,比出发菌株提高了2.44倍。应用PlackettBurrman设计筛选主要影响因素,通过最陡爬坡试验确定中心点后用响应面法对突变菌株YQY-36的发酵培养基进行优化。优化后培养基成分(g/L)是:桔皮粉42.5,葡萄糖5.0,蛋白胨28.5,(NH_4)_2SO_415.0,Na_2HPO_4·12H_2O 1.7,KH_2PO_41.4,Zn SO_4·7H_2O 0.5。优化培养基后果胶酶活力达92.1 U/m L,比优化前提高了36.2%。     

常压室温等离子体快速诱变选育单宁酶高产黑曲霉菌株

利用常压室温等离子体快速诱变技术对产单宁酶黑曲霉菌株B0201进行诱变,通过溴酚蓝平板变色圈法初筛,液态发酵产酶测定法复筛获得突变株B1401,其诱变后的菌株在液态发酵中获得17.61 U/g酶活,提高2倍;并在固态发酵中进行验证,在固态培养中获得酶活27.68 U/g,提高1.64倍。通过因素优化,得出其液态培养产酶的条件为单宁酸浓度5%,葡萄糖浓度2.5%,最适培养时间3.5 d,最适产酶生长温度28℃。     

柚苷酶高产菌株的诱变选育及产酶条件的优化

从腐烂柚皮中分离筛选到能分解柚皮苷的产柚苷酶菌株,通过对菌株的形态和培养特征的观察,初步鉴定筛选到的菌株为曲霉属的黑曲霉(Aspergillus niger)。以活力较高的6号菌株为出发菌株进行紫外诱变处理,选育得到了一株酶活达933.3 U/m L的6-2号突变菌株,活力是其出发菌株的2.25倍。对该菌株进行连续5代遗传稳定性试验,结果表明该突变株具有良好的产柚苷酶遗传稳定性。同时,对选育出的6-2号突变株发酵产柚苷酶条件进行了优化研究,其最佳发酵产酶培养条件为:培养温度30℃,培养基p H值6.0,摇瓶添加小球数为4颗。采用此条件发酵产柚苷酶活力达1231.0 U/m L,是其出发菌株的2.97倍,可作为进一步诱变筛选的出发菌株。     

果蔬灰霉菌产保鲜果胶酶的培养条件优化研究

对果蔬灰霉菌产果胶酶的培养条件进行了研究。通过正交试验对发酵培养基和发酵条件优化分析,确定最佳发酵培养基为:麸皮2.5 g,苹果渣1.5 g,硫酸铵0.5 g,磷酸氢二钾0.05 g;最佳发酵条件为:发酵时间4 d,p H 5.0,接种量3个圆孔,装瓶量30 m L。在最佳培养基组成和最佳发酵条件下试验,果胶酶平均酶活力达4.918 U/m L,酶活力提高了2.698倍。     

β-葡萄糖苷酶产生菌的诱变育种

以无花果曲霉Y2为出发菌株，经过紫外、亚硝基胍和Co^60等诱变处理，获得一株产β-葡萄糖苷酶相对较高的菌株N-9；再通过对培养基组成条件和培养发酵条件进行优化，以优化后的条件进行液态发酵，产酶活力稳定在8．5U／mL左右，是原出发菌株的2．1倍。     

高产红色素及糖化酶红曲菌株的诱变选育

目的:通过诱变手段提高红曲菌株产色素能力和糖化酶活力。方法:采用平板稀释分离法从古田平湖红曲米中分离筛选到1株高产红色素和糖化酶的红曲霉菌株C26。以C26作为出发菌株,经紫外和紫外-Li Cl复合诱变两轮诱变,选育得到1株红色价和糖化酶活力明显提高的突变菌株183-3。结论:该突变株液态发酵红色价达138.30 U/m L,糖化酶活力达76.34 U/m L,分别比出发菌株提高了107%和51%;接种于大米中进行固态发酵,红色价和糖化酶活力分别达到7 512 U/g和1 337 U/g。结合形态学和ITS序列分析,鉴定183-3菌株为紫色红曲霉。     

高产果胶酶黑曲霉的复合诱变选育

以黑曲霉HY-D3为出发菌株,采用化学试剂—亚硝酸及物理诱变剂—紫外线进行诱变处理以获取果胶酶高产菌株,最终筛选出1株产果胶酶性能稳定且酶活力明显提高的突变株HY-LL3,其酶活力达到了3124 U/g,比出发菌株提高了3.59倍。     

海洋扩展青霉(Penicillium expansum)产耐盐型果胶酶的固态发酵优化

目的:提高海洋扩展青霉(Penicillium expansum)产耐盐型果胶酶的酶活力。方法:测定海洋扩展青霉所产果胶酶的耐盐性;通过单因素和正交实验,对海洋扩展青霉产耐盐型果胶酶进行固态发酵优化;利用SPSS 20.0分析实验结果。结果:该果胶酶在底物所含Na Cl浓度为30g/L时,酶活力最高,在Na Cl浓度为0~60g/L范围内较稳定。最优培养基为:麸皮7g,果胶粉0.42g,氯化铵0.28g,人工海水8.4m L;最优培养条件为:接种量3m L(107cfu/m L),培养温度28℃,250m L三角瓶中培养72h。此优化条件下酶活力可达到6639.79U/g。结论:该果胶酶耐盐性好;固态发酵优化后,酶活力达到6639.79U/g,为原来的酶活1239.80U/g的5.36倍。     

异甘露聚糖酶生产菌的诱变育种及固态发酵条件的优化

为了提高异甘露聚糖酶活性,对实验室保藏的一株分泌异甘露聚糖酶的枯草芽孢杆菌K-6(Bacillus subtilis K-6)进行紫外诱变育种,并优化一株正突变株的固态发酵条件。出发菌株枯草芽孢杆菌K-6的酶活力为206.0U/mL,经紫外线诱变处理后,挑选在培养基上透明水解圈较大的菌株进一步复筛,获得枯草芽孢杆菌K-6-9高产突变株,酶活力为349.3U/mL,高于出发菌株69.6%。连续5代发酵,K-6-9的酶活力范围为343.0～350.3U/mL,表明该突变菌株产酶性能稳定。以K-6-9为菌种,采用单因素试验和正交试验进行最佳固态发酵产酶条件的优化,结果表明：该突变株的固态发酵适宜发酵条件为：发酵时间72h、接种量3%、初始pH 7.5、装料量25g/250mL;培养基组成为：酵母细胞壁添加量8%、料液比1:1.2、麸皮添加量40%,此优化条件下固态发酵K-6-9菌株产酶酶活力最高达601.6U/mL。     

紫外线与微波复合诱变选育高产脂肪酶菌株的研究

研究选育高产脂肪酶菌株。采用紫外线诱变、微波诱变和紫外微波复合诱变出发菌株H3,测定比较酶活,确定最佳诱变效果。结果表明,出发菌株经紫外线和微波诱变后,所产脂肪酶的最高酶活分别为57.984 U/m L和57.1 U/m L,比出发菌株H3提高了38.3%和36.2%,经微波辐射40 s和紫外线照射80 s的复合诱变菌株M3产酶活力最高,达61.6 U/m L,比出发菌株H3提高了46.85%。     

一株产品纤维素酶细菌M7的紫外诱变选育

以细菌M7为出发菌株,通过紫外诱变处理,经刚果红培养基初筛及摇瓶发酵复筛获得突变株。经紫外诱变获得6株正突变株以第2株产酶活力最高,CMCase、FPA相对酶活力较原始菌株提高了6．06倍、6．88倍。紫外诱变可使细菌M7产纤维素酶活力提高。     

红曲霉(Monascus anka As 3.782)菌种的紫外诱变和产色素的条件优化

应用红曲霉Monascus anka As 3.782(CCTCC编号:AF93208)菌株,探索其固态发酵产红曲色素的最佳基质初始含水量,结果表明:含水量为约30%最好;通过正交试验优化其液态发酵产红曲色素的培养基,大米粉9%、NaNO33%、KH2PO40.3%、MgSO,0.1%,黄豆粉0.5%,pH4.0时的培养基配方产红曲色价最高,达77.3U/mL;在紫外诱变距离20cm诱导3min的条件下筛选优良菌株,其固态发酵产红曲色价可达1156.667U/mL,是原始出发株360.667U/mL的3倍多,其液态发酵产红曲色价比原始出发株提高了2倍.     

高产柚苷酶菌株米曲霉的诱变育种及发酵条件优化

以土样中筛选的1株产胞外柚苷酶菌株米曲霉11250为出发菌株,采用紫外诱变、亚硝酸钠化学诱变及紫外-亚硝酸钠复合诱变3种方法进行诱变育种,通过透明圈初筛以及液体摇瓶发酵复筛,最终选育出1株胞外柚苷酶产酶活力较高的突变菌株UN2,该菌株产胞外柚苷酶活力达147U/mL,为原始菌株的2.3倍,经5代传代,其产酶能力稳定在(147±0.8)U/mL。采用单因素试验和响应面设计Box-Behnken design试验相结合的方法进行产柚苷酶的摇瓶发酵培养基配方优化,对影响菌株UN2发酵产酶的碳源、氮源、培养基初始pH、温度等条件做单因素试验和响应面法试验。结果表明:该菌株的最佳产酶条件:麦芽糖2.0 g/100 mL,牛肉蛋白胨3.0g/100 mL,初始pH 5.7,培养温度30℃。在此条件下,柚苷酶活力达到251 U/mL,是未优化前的1.7倍。结论 :通过培养基优化,大幅度提高了米曲霉11250液体发酵产柚苷酶的酶活力。     

利用葡萄渣黑曲霉固态发酵产果胶酶的研究

对黑曲霉（Aspergillus niger）BB-6利用葡萄渣固态发酵产果胶酶的发酵条件进行研究。结果表明,在基础发酵培养基中添加葡萄糖4%、硫酸铵0.6%,含水量60%,培养温度30 ℃条件下培养72 h,果胶酶酶活达12.226 U/g。     

产纤维素酶霉菌筛选及发酵条件优化

从江苏淮安清江浦区柳树湾树林获取土样为菌种来源,以羧甲基纤维素钠（carboxymethyl cellulose sodium,CMC-Na）为唯一碳源,通过富集培养、初筛、复筛获得3株产纤维素酶能力较强的菌株（Strain-1、Strain-2、Strain-3,S-1、S-2、S-3）,其中S-2产纤维素酶能力最强,其滤纸酶（filter paper enzyme,FPA）酶活力可达0.21 U/mL。对 S-2菌株进行紫外（ultraviolet,UV）诱变,筛选获得菌株SUV2-1。通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行发酵培养基优化,得到该菌株产纤维素酶培养基配方：秸秆粉11.63 g/L,蛋白胨2.33 g/L、吐温-80 2.71 mL/L。利用上述培养基在摇瓶发酵条件下得到的FPA酶活力为0.45 U/mL,与优化前菌株的FPA酶活力相比,提高了51.15%;与诱变前的出发菌株相比,酶活力提高了113.00%。     

柚苷酶高产菌株的选育及培养基优化

为了获得高产稳定的柚苷酶产生菌,以分离纯化出的36株黑曲霉菌为材料,利用常规筛选方法从中选出黑曲霉菌株M53,采用紫外线和Li Cl复合诱变,选育出一株柚苷酶高产突变株M53-7,并通过正交实验对该菌株液态发酵产酶的培养基组成进行优化。实验结果表明,正交优化后的培养基组成为蔗糖0.5%、豆饼粉3.0%、NH_4NO_31.0%、K_2HPO_40.1%,无机盐Ca Cl_2、Mg SO_4·7H_2O、Zn SO4在发酵培养基中的添加量分别为0.1%、0.5%、0.1%;采用最佳发酵培养基对突变菌株M53-7进行摇床发酵,其发酵液中柚苷酶活力可达到906.28 U/m L,且产酶性能稳定。     

酯化型红曲菌复合诱变选育及其固态发酵条件优化

为了获得高酯化力红曲菌,采用紫外线结合常压室温等离子体复合诱变对实验室保藏的红曲菌进行诱变育种,并通过单因素实验及响应面分析法优化其固态发酵条件,提高菌株产酯化酶能力。出发菌株N3经过复合诱变,采用透明圈法初筛及酯化酶活力测定法复筛,得到1株产酯化酶活力高且遗传稳定性较好的诱变菌株Z14,其酶活稳定至34.44 U/g,较出发菌株提高了74%。通过响应面分析法得到优化的固态发酵条件为:接种量为5%、含水量为70%、培养时间为7 d。在该条件下Z14产酯化酶活力达到38.53 U/g,较出发菌株提高了95%。     

棘孢曲霉利用蚕沙发酵产果胶酶的条件优化研究

果胶酶是能够分解果胶物质的多种酶类的统称。本研究以前期选育所得高产果胶酶菌株棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)DW75作为实验菌株,通过蚕沙固体发酵,对产果胶酶的发酵条件进行了优化。通过单因素试验和正交试验得出了该菌株的最佳产酶条件为:发酵培养基初始p H值5.0,最佳氮源硫酸铵添加量0.1%,培养基料水比(W/V)1.8∶2,发酵温度25℃,发酵时间144h。在此优化发酵条件下菌株的产酶能力可达到19.146U/m L,是优化前酶活10.166U/m L的1.88倍。     

黑曲霉ZM-8菌株产纤维素酶的培养条件优化

在航天诱变黑曲霉ZM-8菌株产纤维素酶最佳培养基组分的基础上,确定了最佳培养方式后,对培养时间、培养温度和初始pH值3个因素利用正交试验进行了优化.结果表明,固态培养方式明显优于液态培养,其达到最高酶活的时间仅为液态培养方式的1/3,而酶活却是它的1.5～3倍;最佳产酶的培养条件组合为A3B3C1,即:培养时间为72h、培养温度为35℃、初始pH值为6.5.FPU酶活力为5.25 U/g、CMC酶活力为19.60 U/g,分别是未优化时的3倍和2.5倍.     

黑曲霉固态发酵橘皮生产纤维素酶及淀粉酶

以橘皮为原料,以黑曲霉AS3.3928为生产菌株,采用固态发酵法生产纤维素酶和淀粉酶。通过单因素试验考察固态发酵培养基中橘皮含量、培养基含水量、接种量及发酵时间4个因素对纤维素酶和淀粉酶活力的影响。在单因素试验基础上,通过正交试验最终确定最优产酶条件为：固态发酵培养基中添加16g橘皮,并加入5mL无菌水使培养基初始含水量为64mL/100g,黑曲霉接种量15%,发酵60h。在此发酵条件下所产纤维素酶活力可达1816U/g,淀粉酶活力达196U/g。结果表明,利用黑曲霉固态发酵橘皮,非常有利于纤维素酶和淀粉酶的生产。