蛹、米虫草多糖含量及抗氧化活性比较研究

旨在研究不同来源北虫草子实体多糖的含量差异以及分级醇沉各组分的抗氧化活性差异。通过热水浸提、分级醇沉法分别获得蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)、米虫草多糖(Cordyceps oryzae polysaccharide,COP);以DPPH自由基清除率、羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力法(ferric reducing antioxidant power,FRAP)评价两种多糖的体外抗氧化活性;构建H_2O_2致PC12细胞氧化损伤模型,比较两种虫草多糖对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。不同乙醇浓度沉淀获得的虫草多糖中,米虫草多糖提取率及含量高于蛹虫草多糖;米虫草多糖对DPPH自由基、·OH清除率分别可达66.43%、69.22%,蛹虫草多糖可达73.69%、73.50%;FRAP法测得蛹虫草多糖抗氧化能力较强。细胞试验结果表明,氧化损伤的PC12细胞经两种多糖处理后细胞存活率皆有不同程度的提升,呈浓度依赖性,蛹虫草多糖组细胞存活率最高可达90.45%,米虫草多糖组细胞存活率最高可达82.62%。以蚕蛹为培养基的蛹虫草在多糖提取率及含量方面低于以大米为培养基的米虫草,但其多糖对自由基清除能力及PC12细胞保护作用优于米虫草多糖,具有较好的抗氧化能力。     

铁皮石斛多糖不同级分的制备、性质分析及免疫调节活性比较

目的:制备铁皮石斛多糖(DOP)的不同分级组分,比较其理化性质及体外免疫调节活性的差异,并对多糖结构特征与活性的关系进行初探。方法:采用分级醇沉的方法获得铁皮石斛多糖不同分级组分,并对各组分的糖、糖醛酸、蛋白质含量、单糖组成、分子量进行分析。以巨噬细胞RAW264.7为研究模型,比较DOP不同分级组分的体外免疫调节活性。结果:DOP和四个组分(F30、F40、F50和F50S)均为中性糖,各组分糖醛酸含量较DOP均有所降低,F50S蛋白质含量最高。DOP、F30、F40、F50和F50S的平均分子量分别为262.4、314.5、248.3、202.9和136.2 kDa。DOP、F30、F40、F50和F50S均主要由甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为5.16:1、3.67:1、4.16:1、5.62:1和5.86:1。DOP和各分级组分均可显著(p<0.05)增强RAW264.7巨噬细胞的增殖能力、NO的释放以及TNF-α和IL-1β的分泌。结论:铁皮石斛多糖及其分级组分均有免疫调节活性,且分子量较小的免疫调节活性较强。     

茶多糖的分离纯化及其抗凝血活性

为了研究茶多糖不同组分对抗凝血活性的影响,通过水提醇沉的方法对茶多糖进行提取,经聚酰胺柱脱色、脱蛋白,采用离子交换柱DEAE Sepharose CL-6B对多糖进行分离纯化,用高效凝胶渗透色谱测定其分子量,并对多糖组分抗凝血活性进行了研究。结果表明:聚酰胺法脱色、脱蛋白效果较好,脱色率、蛋白去除率和多糖保留率分别为75.1%、91.2%和79.2%;经纯化后得到4个组分,分别为TPS-1、TPS-2、TPS-3和TPS-4;HPGPC法测定TPS-1、TPS-2和TPS-3分子量分别为20760、24230和250643,为均一多糖,TPS-4含两个组分,其分子量分别为689 113和4 150,为非均一多糖。体外抗凝血实验显示TPS-4能延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT),说明是通过内源性途径来影响凝血的。     

灰树花多糖的超滤分离及免疫活性研究

目的：从灰树花子实体中提取分离灰树花多糖并进行免疫活性检测。方法：热水和稀碱提取灰树花子实体多糖后,利用乙醇沉淀法和超滤法获取灰树花水溶性及碱溶性子实体多糖,通过小鼠脾淋巴细胞转化增殖实验检测免疫活性。结果：利用乙醇沉淀法获得水溶性及碱溶性多糖两个组分,得率分别为6．67％和5．88％,利用超滤法获得分子量范围分别为大于1000kD、100～1000kD以及10～100kD的共六个灰树花子实体多糖组分,其中水溶性多糖组分GFP100、GFP10和GFP1的得率分别为3．99％、0．51％和3．94％,碱溶性多糖组分GFAP100、GFAP10和GFAP1的得率分别为2．42％、2．32％和3．04％,利用超滤法获得的六个多糖组分均显示了显著的促进小鼠脾淋巴细胞转化增殖作用。结论：超滤法应用于灰树花子实体多糖的分离要优于传统乙醇沉淀法,该法工艺简便,多糖得率更高,且不损害其活性。     

绣球菌低分子量多糖的制备工艺优化及其分子量的测定

为研究绣球菌低分子量多糖的制备工艺,本文考察硫酸浓度、反应时间和料液比对多糖水解度的影响,以绣球菌多糖水解度为响应值,通过二次项数学模型拟合出最优酸解工艺参数,并采用多角度激光光散射仪测定酸解前后多糖的分子量。结果表明:在硫酸浓度0.46 mol/L、反应时间85 min、液料比6:1 mL/,绣球菌多糖水解度为67.06%±0.77%,与预测值接近,模型拟合效果良好。绣球菌多糖含有3个组分,重均分子量分别为3.32×107、1.79×106和3.18×106 Da,酸解后得到一种低分子量绣球菌多糖,含两个组分,重均分子量分别为3.25×105、5.61×105 Da,表明该法成功制备了一种绣球菌低分子量多糖。为后续的绣球菌低分子量多糖分离纯化和分子量-生物活性关系的研究提供了理论基础。     

黄秋葵多糖组分对人体肿瘤细胞增殖的抑制作用

近年来多糖的抗肿瘤生物活性日益受到关注,本研究探讨黄秋葵多糖对人体卵巢癌细胞(OVCAR-3)、乳腺癌细胞(MCF-7)、宫颈癌细胞(Hela)、胃腺癌细胞(MCG-803)增殖的抑制作用。通过水提醇沉提取黄秋葵粗多糖(raw polysaccharide,RPS),经DEAE- 纤维素阴离子交换层析柱分离得到3 种多糖洗脱组分E1、E2 和E3;不同质量浓度黄秋葵多糖作用于人体肿瘤细胞72h,采用MTT 法对其抗癌活性进行分析。结果显示：RPS 和E1 组分可抑制OVCAR-3 细胞的生长,随质量浓度的增加细胞存活率降低,呈剂量依赖关系,最低可分别降至72.30% 和52.31%;E3 组分可抑制MCF-7、Hela 和MCG-803 细胞的生长,抑制作用呈剂量依赖关系,细胞的存活率最低可分别降至63.90%、63.51% 和67.71%。故而黄秋葵多糖组分可抑制多种肿瘤细胞生长,有开发成抗癌功能食品的前景。     

条斑紫菜多糖的分离纯化及Mark-Houwink方程参数测定

目的:获得均一性的条斑紫菜多糖,测定相应的Mark-Houwink方程参数。方法:条斑紫菜经超临界CO2脱脂、水提、醇沉、脱蛋白和DEAE-52柱层析分级分离,获得条斑紫菜多糖,凝胶渗透色谱法鉴定多糖的均一性并同时测定分子量,利用均一性的条斑紫菜多糖测定其Mark-Houwink方程参数,非均一性的条斑紫菜多糖进行验证。结果:分离到分子量分别为2.2×105、3.8×105和6.1×105的均一性条斑紫菜多糖的组分,确定了条斑紫菜多糖在水溶液中25℃下的Mark-Houwink方程的参数为:K=7.86×10-3,α=0.626。结论:经检验,测定的K和α的值可靠,可用于条斑紫菜多糖分子量的研究。     

芦根多糖的分离纯化和体外抗肿瘤研究

从芦根中提取和纯化了芦根多糖,并研究其体外抗肿瘤活性。采用热水浸提法从芦根中提取芦根多糖,经Sevag法脱蛋白,冷冻干燥后,葡聚糖凝胶柱层析分离纯化,得到纯化的芦根多糖,苯酚-硫酸法测定多糖样品中总糖含量,凝胶层析测定多糖分子量,细胞毒性实验研究其体外抗肿瘤作用。结果测得芦根多糖样品中总糖含量为0.872%,分离纯化得到三种芦根多糖组分R-PolyⅠ、R-PolyⅡ、R-PolyⅢ,三者的分子量分别为79781、29073、10605u,细胞毒性实验表明三种芦根多糖组分对Hela细胞和B16细胞均具有良好的抑制作用。这为芦根多糖在食品工业及医药保健等领域的应用奠定了基础。     

广东虫草多糖的醇沉及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

采用浓度为30%、50%、70%、90%的乙醇对广东虫草多糖(CGP)进行分级醇沉(GEP)和分步醇沉(SEP)处理.并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定各醇沉组分的保留时间1R、重均分子量Mw、多分散性PD以及各组分的相对含量,以表征不同醇沉方法所得多糖组分的分子量分布.结果表明:不同乙醇浓度醇沉得到的多糖组分的分子量大小有很大差异,且不同分子量范围的多糖在不同醇浓度下的含量也不一致;要获取更多的大分子量虫草多糖,宜采用分步醇沉法,乙醇浓度应从30%逐渐增大到70%;若采用分级醇沉法,则乙醇的浓度应选择在50%～70%.     

紫球藻胞外多糖抗氧化和保湿性能的研究

单细胞红藻紫球藻(Porphyridium cruentum)在生长过程中能够合成并向细胞外分泌多糖。本研究采用超声辅助H2O2-VC体系降解紫球藻胞外多糖,并经Sepherose6B分级纯化得到了3种分子量相对均一的多糖组份(EPS1、EPS2、EPS3),其后对多糖组份进行了理化性质、抗氧化及吸湿和保湿性能的研究。结果显示,采用超声辅助H2O2-VC体系、经纯化后测得3个组份的分子量分别为1 807.59、374.97和33.73 ku,不同分子量的多糖抗氧化能力呈现量效关系,且与其分子量大小呈负相关,其中EPS3的还原能力与对照组VC的还原能力接近。此外,紫球藻胞外多糖及降解产品的吸湿和保湿性能与分子量大小呈正相关,说明具有良好的吸湿和保湿性能。其中大分子量的ESPS0吸湿率和保湿率分别为29.00%和57.17%,小于甘油的吸湿率,保湿活性比甘油高48.35%。     

铁观音茶末多糖的分离纯化和抗氧化活性

为实现废弃茶叶资源的再利用以及探究铁观音茶叶末活性多糖的抗氧化活性,以水提醇沉法提取铁观音茶末粗多糖,然后通过DEAE-52纤维素和Sephadex-100葡聚糖凝胶分级两次纯化,并进行纯度鉴定、红外光谱分析、分子量的测定以及体外抗氧化活性的测定等。结果表明,90%的乙醇终浓度得率最高,为1.97%;两次分级纯化后得到TPS-1A和TPS-4C,纯度分别为96.2%、95.1%;红外光谱图谱表明两种多糖均为β-型糖苷键多糖;分子量分别为15792、21722 Da;两种多糖组分抗氧化活性均随着组分浓度的增加而逐渐增强,当质量浓度为1.2 mg/mL时TPS-1A和TPS-4C,对DPPH自由基的清除率分别为95.41%、97.71%,羟自由基清除率分别为93.39%、94.21%,总还原力测得吸光度值为0.699、0.712。由此说明铁观音茶末多糖具有较强的抗氧化活性,且TPS-4C强于TPS-1A。     

桑葚多糖对H_2O_2诱导PC-12细胞氧化损伤的保护作用

采用水提法和乙醇沉淀法制备得桑葚多糖T2,利用质量分数为4%的Zn SO4盐析法去除桑葚多糖T2中的蛋白质,从而得到桑葚多糖T3,蛋白去除率高达88.52%。然后采用DEAE-52纤维素离子交换层析法对桑葚多糖T3进行分离纯化,共收集到4个组分T3-1、T3-2、T3-3及T3-4,其中T3-1和T3-3为桑葚多糖T3的主要组分。进而,从对细胞氧化损伤保护作用的角度对桑葚多糖T3的4个组分的抗氧化性进行了检测。选用700μmol/L的H2O2诱导PC-12细胞损伤8 h为细胞氧化损伤模型,考察T3各组分对正常PC-12细胞增殖的影响,发现T3-3可使细胞存活率增大至41.81%。最后以T3-3为研究对象考察其对H2O2诱导的PC-12细胞氧化损伤的保护作用。结果显示,600μg/m L的T3-3对PC-12细胞氧化损伤具有最强保护作用,表明高浓度的T3-3具有非常强的细胞抗氧化作用。     

夏枯草水溶性多糖体外抗氧化活性研究

目的研究夏枯草水溶性多糖乙醇分级组分的抗氧化活性。方法采用水提醇沉法得到夏枯草水溶性粗多糖,再经不同体积分数(20%、30%、40%、50%、60%、70%,v/v)的乙醇溶液逐级沉淀,依次得到不同分子量的六个夏枯草多糖组分(依次记为PVLP-1、PVLP-2、PVLP-3、PVLP-4、PVLP-5、PVLP-6)。进一步测定了其中四个组分(PVLP-2、PVLP-3、PVLP-4、PVLP-5)对DPPH、O~(2-)·和·OH的清除效率。结果从夏枯草中得到的PVLP-2、PVLP-3、PVLP-4、PVLP-5四个多糖组分对DPPH自由基清除效果最明显,在质量浓度为3.2mg/mL时,清除率依次为98.09%、90.05%、88.56%和87.71%。各组分对O~(2-)·以及·OH自由基的清除作用相对较差些,除PVLP-4清除·OH自由基的EC_(50)值为13.24 mg/mL外,其余均小于10 mg/mL。四个多糖组分中,PVLP-2的总体抗氧化效果优于其他各个组分。结论乙醇分级可以作为一种简便易行的分离纯化方法,制备具有良好抗氧化效果的水溶性夏枯草多糖。     

不同醇沉竹荪多糖组分对青春双歧杆菌体外增殖作用的影响

本文以竹荪为原料提取多糖成分并以乙醇分级制备竹荪多糖(DPs)不同组分,通过青春双歧杆菌体外增殖试验初步评价竹荪多糖及其分级醇沉组分的益生元功效。结果显示在α-淀粉酶溶液中水解4 h后,20%、40%、50%、60%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为9.10%、8.02%、8.88%、11.67%,与对照组菊粉(水解度13.15%)相比差异显著(P<0.05);80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分与菊粉对照组相比差异不显著(P>0.05)。在模拟胃液中水解6 h后,20%、40%、50%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为17.30%、14.52%、9.61%,与对照组菊粉(水解度5.72%)相比差异显著(P<0.05);60%竹荪多糖醇沉组分、80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分水解度与对照组相比无显著差异(P>0.05)。随着竹荪多糖添加量的增加,青春双歧杆菌的菌体浓度呈现先增大而后不断减小的趋势。分级醇沉浓度达到80%的竹荪多糖组分和未分级的多糖组分,青春双歧杆菌体外增殖作用与pH下降显著且效果优于菊粉(P<0.05),并在20 h的发酵时间内两者表现出相似的效果。不同竹荪多糖醇沉组分对青春双歧杆菌均有增殖效果,且不同竹荪多糖醇沉组分的增殖效果和抗水解能力随乙醇浓度的增加而增强,未分级的多糖组分同样可以加强青春双歧杆菌增殖能力,具有益生元潜力。     

库尔勒香梨多糖基于抑制焦亡关键蛋白NLRP3、GSDMD的表达发挥抗炎作用

目的：筛选库尔勒香梨多糖抑制焦亡的活性组分及初步探索抑制细胞焦亡分子机制。方法：库尔勒香梨脱脂后从中提取分离获得库尔勒香梨粗多糖（Pyrus sinkiangensis Yu polysaccharide,PSP）、中性多糖（Pyrus sinkiangensis Yu neutral polysaccharide,PSN）、酸性多糖（Pyrus sinkiangensis Yu acid polysaccharide,PSA）；脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）及三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）刺激RAW264.7细胞，建立焦亡模型后进行PSP、PSA、PSN干预，检测细胞存活率、白介素-1β(IL-1β)及白介素-18(IL-18)的mRNA表达量、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)及消皮素D(GasderminD,GSDMD)蛋白的表达水平。结果：PSP、PSN、PSA的总多糖含量分别为7....     

虫草多糖醇沉和DEAE-32纤维素柱层析特性研究

分级醇沉、分步醇沉和DEAE-32纤维素柱层析法研究了虫草多糖的分子量和多糖组分分布.分级醇沉实验表明,各醇沉浓度对应的得率都随醇浓度的升高而呈增加趋势,多糖含量变化起伏较大,醇浓度为30%和70%时所得多糖含量较高,虫草胞内和胞外多糖分子量分布都很不均匀;分步醇沉测定了各部分多糖所占的比例.DEAE-32纤维素柱层析实验结果表明:冬虫夏草的胞外多糖和胞内多糖具有分子量相似的中性多糖峰,并且它们的含量较为接近;二者的酸性多糖组分也具有相似的规律.     

海带中褐藻糖胶分级纯化及结构分析

为了纯化海带褐藻糖胶及研究褐藻糖胶结构,利用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱分离海带褐藻糖胶粗品,得到LP-1、LP-2、LP-3和LP-4 4个组分,通过Sephadex G-150凝胶柱对硫酸根含量较高组分LP-2、LP-3和LP-4进行进一步分离纯化及分子量测定,最终LP-2获得两种均一多糖LP-21和LP-22,其分子量分别为123和105 k Da,LP-3和LP-4为均一多糖,分子量分别为74和32 k Da。通过高效液相色谱法分析得率较高的组分(LP-21、LP-22和LP-3)单糖组成,用红外色谱法分析其结构。高效液相色谱结果表明,分级纯化后的组分(LP-21、LP-22和LP-3)主要由L-岩藻糖、D-半乳糖组成,还有少量D-葡萄糖、D-甘露糖、D-氨基葡萄糖、L-鼠李糖、D-木糖和D-葡萄糖醛酸。红外光谱分析表明,LP-21和LP-22的硫酸根主要结合在岩藻糖C_4位,LP-3硫酸根主要结合在岩藻糖C_2或C_3位上。     

枸杞多糖的超滤分级及理化性质的研究

探究了超滤法分离对枸杞多糖理化性质的影响。采用截留分子量不同的超滤膜分离枸杞多糖,检测各个组分的分子量范围、多糖组成、多糖形貌和热力学性质,探究超滤分级对枸杞多糖理化性质的影响。超滤方法可以实现枸杞多糖的分级分离,得到分子量大小分别为2.03×106(LBP-8),3.62×106(LBP3-1),3.10×104(LBP1-4)的多糖组分,主要有岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,都不含有核糖,LBP1-4不含有鼠李糖,LBP-8不含鼠李糖和葡萄糖。其总糖含量、半乳糖醛酸含量、中性糖含量、蛋白质含量,多糖形貌和热力学性质均显示差异性。     

超声微波协同酶法提取黄精多糖与抗氧化特性分析

为探讨超声微波协同酶法提取黄精多糖的工艺条件,采用乙醇分级醇沉制备生黄精和制黄精多糖的不同醇沉组分,研究不同多糖组分的抗氧化特性。试验结果表明,以生黄精为原料时,最佳提取条件为:在超声微波处理下,以料液比1︰23 (g/mL)、纤维素酶添加量0.85%,在温度60℃下酶解20 min,黄精多糖提取率为17.53%。经用乙醇分级沉淀该条件下制备生黄精,获得多糖组分PPs-40, PPs-60和PPs-80,其得率分别为5.61%, 46.11%和48.28%,多糖含量分别为79.66%, 88.92%和99.28%;制备得到的制黄精多糖,获得多糖组分PPPs-40, PPPs-60和PPPs-80,其得率分别为21.08%, 21.08%和57.84%,多糖含量分别为57.94%, 70.18%和75.24%,生黄精和制黄精多糖几乎不含蛋白质和多酚。各多糖组分均具有较好的DPPH·和O_2~-·清除率,其中PPs-40对DPPH·清除能力最强,其IC50值为0.59 mg/m L; PPPs-40对O_2~-·的清除能力最强,其IC50值为0.64 mg/mL。试验结果为分离鉴定具有高抗氧化活性的生黄精和制黄精多糖组分提供科学依据。     

低分子量褐藻多糖的制备及其活性分析

利用抗坏血酸协同过氧化氢法降解褐藻多糖,以DPPH自由基清除率为指标,通过工艺优化得到最佳降解条件,然后用超滤技术将降解产物进行分级,获得不同分子量组分,并分析其DPPH自由基清除率、保湿效果,酪氨酸酶抑制率等活性。正交试验结果表明,最佳降解条件为H₂O₂-V_C浓度20 mmol/L、降解温度45 ℃、降解时间3 h,在此条件下获得的降解产物的DPPH自由基清除率达到61.23%,降解产物得率为73.16%。电泳结果表明,降解后的褐藻多糖的条带明显出现在低分子量区。利用超滤系统将降解产物分级为<5 kDa、5~10 kDa、10~30 kDa、>30 kDa四个不同分子量段的组分,研究发现各分子量段之间的活性存在显著差异（P<0.05）,尤其<5 kDa组分（其主要成分为2.140×103 Da,占比29.6%）的活性最好,其DPPH自由基清除率为59.27%,60 h后保湿率为75.75%,酪氨酸酶抑制率为65.28%。与褐藻多糖相比,其糖醛酸含量稍有下降。本研究结果可为褐藻多糖在功能性食品等领域的应用提供理论依据。