酶解蚕蛹蛋白制备蚕蛹活性肽工艺条件优化

以经超临界CO2萃取除去大部分蚕蛹油的脱脂蚕蛹蛋白质为原料,研究不同酶种类制备蚕蛹活性肽的酶解效果,选用碱性内切蛋白酶水解蚕蛹蛋白质制备活性肽,研究水解温度、酶用量([E]/[S])、底物浓度([S])和pH值等因素变化时水解度DH随时间的变化规律,结果表明,以DH为考察指标得到该碱性内切蛋白酶水解蚕蛹蛋白质的适宜条件为:水解时间300 min,酶用量[E]/[S]为0.3%,[S]为8%,pH值9.5,水解温度50℃,此时DH为22.66%,酶解物主要由小肽分子组成.     

响应面法优化蚕蛹蛋白源α-葡萄糖苷酶抑制肽酶解条件

以蚕蛹蛋白为原料,使用中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对其进行酶解,以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标,筛选具有最佳α-葡萄糖苷酶抑制活性的酶品种。通过酶解温度、时间、p H值、酶底比和水底比来选出最佳单因素酶解条件,再通过部分因子试验和中心试验设计的响应面优化法进行酶解条件优化。结果最佳酶解工艺条件:酸性蛋白酶,酶解温度36.4℃,p H 3.79,酶解时间4.6 h,酶底比(质量分数)2%,水底比15 m L/g。验证试验的酶解产物质量浓度在5.0 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率为(65.4±1.3)%。预测值与实际验证值准确性达到97.9%,所得模型具有极好的准确性。     

复合酶水解蚕蛹蛋白制备功能性寡肽的工艺研究

为了制备分子量低、肽含量高的蚕蛹功能性寡肽,本文采用单素实验与响应面分析法,对不同蛋白酶及其不同组合、温度、pH值、底物浓度、酶的添加量等因素对蚕蛹分离蛋白水解工艺的影响进行了研究.研究结果表明,多酶复合水解可显著提高蚕蛹蛋白的水解度和寡肽得率,其中胰酶、风味蛋白酶与中性蛋白酶是最佳多酶组合,其最佳水解条件为底物浓度7.33％、酶添加量[E]/[S]3.62％、pH7.38、水解温度54.6℃、水解时间6h.在此条件下,蚕蛹蛋白的水解度高达29.2％,寡肽得率高达为81.14％.酶解后产品数均分子量为665.5 Da,重均分子量为726.9 Da,肽含量高达74.6％,而游离氨基酸含量仅为7.33％,表明复合酶解虽然提高了蚕蛹蛋白的水解度,但主要产物仍然是低分子寡肽,并没有大量生成游离氨基酸.     

基于响应面法的蚕蛹蛋白降血脂肽的酶解条件优化

基于响应面法对中性蛋白酶降解蚕蛹蛋白制备降血脂肽的酶解条件进行了优化。得到制备蚕蛹蛋白降血脂肽的最佳酶解条件为:酶量5.1%（w/w）,酶解时间5h,酶解温度52℃,酶解pH=7.0,底/水比（w/v）=3.9%。在此条件下,蚕蛹蛋白降血脂肽对3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）的抑制率为45.24%。建立了基于蚕蛹蛋白降血脂肽酶解条件的优化模型。验证实验结果表明该模型的预测准确率达97.31%。      

缫丝蚕蛹蛋白酶法水解条件优化

目的:利用酶水解缫丝蚕蛹蛋白,拟为其深度开发利用提供参考。方法:利用蛋白酶水解缫丝蚕蛹蛋白,并用分光光度法测定各指标。结果表明:单酶水解时,实验所用的8种酶中以蚕蛹蛋白水解专用酶的水解度最高,最佳水解条件是底物浓度7%,温度53℃,pH7.2,加酶量3%,水解度达到21.44%。     

酶法水解蚕蛹蛋白制备免疫活性肽工艺的研究

利用复合酶水解蚕蛹蛋白制备小分子多肽,通过正交实验得到水解工艺的优化组合为:木-Fla复合酶,酶用量为0.5%,底物含量为4%（1∶25）,酶解pH为7.0,反应温度为60℃,酶解时间为3h,在此条件下水解,小分子多肽得率为32.16%,同时建立了毛细管凝胶电泳测定蚕蛹多肽分子的检测方法。碳粒廓清实验表明:蚕蛹蛋白酶水解液中小分子多肽可增强小鼠网状内皮系统吞噬功能。      

蚕蛹蛋白的水解工艺研究

以蚕蛹蛋白为原料,采用酶一酸两步水解法水解蚕蛹蛋白。通过单因素试验探讨了底物浓度、水解温度、pH值、酶浓度、水解时间对水解度的影响,采用L16（4^5）正交试验设计对水解工艺条件进行优化,得到优化的酶解工艺条件：底物浓度1：7（g／g）,水解温度40℃,pH值8．0,酶浓度2．0％。水解时间8h：然后加入20mL 3mol／L的HCl进行酸水解,水解8h水解度70%-80％。试验结果表明,采用酶-酸两步水解法水解蚕蛹蛋白,具有酶水解条件温和,氨基酸不受破坏以及酸水解快速、彻底的优点。     

蚕蛹蛋白的酶法水解工艺及其口服液的制备

为了制得蚕蛹免疫活性蛋白肽口服液,对蚕蛹蛋白酶解工艺进行了优化。本文选用菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶这五种酶对脱脂蚕蛹蛋白进行酶解,以水解度和小鼠脾细胞的增殖为检测指标,得出碱性蛋白酶对脱脂蚕蛹蛋白的酶解效果最好,并通过单因素和响应面实验确定蚕蛹蛋白肽酶解的最佳工艺条件为:酶解温度55℃,加酶量6%,酶解时间2 h,pH8,水和底物比20:1,此条件下水解度为19.96%±1.02%,免疫活性OD₄₉₀为0.2512±0.0125。并进行蚕蛹蛋白肽免疫活性口服液的研制,通过感官评定得到最佳工艺为:蔗糖量8%,柠檬酸量1%。     

碱性蛋白酶水解蚕豆蛋白的条件优化

采用碱性蛋白酶酶解蚕豆分离蛋白,通过正交试验确定最佳酶解反应条件:反应温度为50℃,pH值为8.5,酶与底物比为16000 U/g,底物浓度为60g/L.在此条件下,水解度可以达到15.55%.     

酶法水解玉米蛋白工艺条件的优化

通过对中性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶来水解玉米蛋白粉制备多肽的工艺进行了研究，试验以水解度（DH%）为指标，确定了复合酶解的最佳工艺条件。结果表明：复合酶（中性蛋白酶和木瓜蛋白酶）比例为2：1，底物浓度为10％，pH为7.5，温度为45℃，在此条件下酶解2h，玉米蛋白的水解度达到15.36％。     

蚕蛹蛋白中性蛋白酶可控水解动力学模型

提出了同时考虑产物抑制、底物抑制、酶失活等因素的机理模型,并应用到蚕蛹蛋白中性蛋白酶水解体系中,证明了在该体系中底物抑制现象的存在,并推导出相关动力学和热力学常数分别为Km=4.02g.L-1,k2=130.9min-1,Ks=110.4g.L-1,kd=24.6min-1,C0=1.38×10-4,rmax=15.4g.L-1.min-1和Ea=44.5kJ.mol-1,并通过实验结果比较验证模型的可靠性,结果表明计算值与实验值较为吻合,相对误差只有3.80%,说明该模型具有较好的推算性。     

玉米蛋白水解条件的优化研究

本试验是以玉米黄粉为底物,采用碱性蛋白酶为水解酶进行水解。采用二次旋转回归设计,以温度、酶与底物浓度比和pH三因素进行水解,得出玉米黄粉的最佳水解条件是[S]=8%、[E]/[S]=3.3%、pH =9.85、T=45℃、水解时间(t)=4.5h。在这种水解条件下蛋白回收率>73%。     

蚕蛹蛋白水解前处理和水解产物鲜味增效的研究

研究超声波、亚硫酸钠、酸等前处理对蛋白酶解效率的影响,并探讨谷氨酸钠和氯化钠对酶解产物的滋味的影响。实验表明,低浓度的亚硫酸钠处理能改善对蚕蛹蛋白的水解效果,而酸和超声波处理能显著提高蚕蛹蛋白回收率和水解度,其中超声处理效果最佳,使蚕蛹蛋白回收率和水解度分别提高5%和3%（p<0.05）。前处理都能提高酶解产物中小肽的比例,分子量小于1000 u的小肽占75%以上,1000~3000 u的组分占20%左右;其中超声前处理,分子量小于1000 u的小肽从占比66.44%提高到77.58%。通过单纯形重心设计,探讨在酶解液中氯化钠和谷氨酸钠的相互作用对滋味的影响。氯化钠和谷氨酸钠的浓度对超声前处理的酶解产物的鲜味有显著性的影响（p<0.05）,当味精和氯化钠的浓度分别是0.37%和0.85%时,鲜味增效达到最佳值,感官评分为7.3分。     

酶解蚕蛹蛋白制备氨基酸饮料

纤维素酶加入到木瓜蛋白酶酶解蚕蛹蛋白过程中 ,可使酶解液中氨态氮含量提高 9%～ 11% ,与不加纤维素酶的对照处理之间有明显的差异显著性 (p <0 0 5 )。利用其酶解液可配制成氨基酸饮料。氨基酸饮料中含蛋白质为 171 6 2mg/ 10 0mL ,8种游离状态的必需氨基酸含量占总蛋白质含量的 2 7 4 5 %。     

蚕蛹蛋白酶解制备抗氧化肽的初步研究

将蚕蛹通过粉碎和丙酮脱脂后,得到蚕蛹蛋白粉.用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶酶解蚕蛹蛋白粉,以DPPH清除能力为指标对酶解过程进行分析,结果表明胃蛋白酶对蚕蛹蛋白有较好的酶解效果.然后通过正交优化胃蛋白酶的酶解条件,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

花生蛋白水解条件的优化研究

以花生蛋白粉为原料,采用Alcalase碱性蛋白酶为水解酶进行水解。采用二次旋转回归设计,以反应温度、底物浓度、酶用量和水解时间4个因素进行正交旋转组合试验,得出花生蛋白的最佳水解条件是:温度为54.7℃,底物浓度为4%,酶用量为0.943%,水解时间为167min,在此条件下三氯乙酸沉淀后可溶性氮的得率为87.86%,花生蛋白的水解条件得到较好的优化结果。     

乙酰化改性蚕蛹蛋白条件的优化

采用乙酸酐对蚕蛹蛋白进行酰化改性。在进行了蛋白浓度、乙酸酐/蛋白量和反应时间对蚕蛹蛋白的乙酰化程度影响的单因素实验基础上,以乙酰化程度为评价指标,通过响应面分析法对乙酰化改性蚕蛹蛋白的条件进行了优化,并对改性后蚕蛹蛋白的溶解度进行了研究。结果表明,最佳工艺条件为:蛋白浓度6.0%、乙酸酐/蛋白量22.0%、反应时间59.8min。理论最大乙酰化程度值为83.20%,验证值为(82.82±1.49)%,说明预测模型可靠性高,可用于反应条件的优化。此外,溶解度实验结果表明,改性后的蚕蛹蛋白溶解度显著提高,比改性前提高了39.27%。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。