光裸方格星虫纤溶活性蛋白的提取及抗氧化活性研究

目的:从光裸方格星虫提取纤溶活性蛋白并研究其抗氧化能力。方法:光裸方格星虫全虫匀浆后,用3倍体积PBS缓冲液（0.02 mol/L,p H7.5）在4℃条件下抽提6 h,上清液用硫酸铵盐析法粗提纯纤溶活性蛋白;采用普鲁士蓝法测定该蛋白组分的还原能力,在DPPH体系,Fenton体系和邻苯三酚自氧化体系中分别测定对DPPH自由基（DPPH·）、羟基自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O₂^-·）的清除能力。结果:用30%饱和度硫酸铵沉淀杂质,再用50%饱和度硫酸铵沉淀上清液的纤溶活性蛋白可取得较好的纯化效果,该蛋白组分具有一定还原能力,具有显著的清除DPPH·和·OH作用,且与剂量呈正相关,EC₅₀分别为1.23、6.07 mg/m L,对O₂^-·则有负清除作用。结论:采用两级硫酸铵盐析纯化的光裸方格星虫纤溶活性蛋白具有一定体外抗氧化活性。      

方格星虫酶解物成分分析及其抗氧化作用

用木瓜蛋白酶对方格星虫（Sipunculus nudus）进行酶促水解,并对酶解物冻干粉的成分进行了分析,其中粗蛋白质量分数为69.02%,多肽质量分数为60.60%,肽的平均链长为3.73个氨基酸残基,肽分子的平均相对分子质量为447.6;游离氨基酸占5.27%。氨基酸分析结果显示,方格星虫酶解物含有17种氨基酸（色氨酸未测）,其中人体必需氨基酸含量较高,占总氨基酸数的30.62%。方格星虫酶解物中还含有P、Fe、Mg、Mn、Zn、Cu、Se等至少12种矿质元素,以及含有抗氧化作用的营养成分,并通过动物试验证明了方格星虫酶解物具有显著的抗氧化作用。方格星虫酶解物可用于食品添加或用作功能性食品。     

老蒜提取物萃取部位的抑菌活性及成分分析

本实验将大蒜切片后于室温下浸泡于10%乙醇水溶液或者蒸馏水一段时间,得到老蒜提取物样品一和样品二;依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对样品一和样品二进行萃取,得到不同极性的萃取部位,以多种细菌、霉菌、放线菌为供试菌进行抑菌圈实验,研究各个萃取部位的抑菌活性。实验结果表明石油醚层和乙酸乙酯层表现出了较强的抑菌活性,正丁醇层抑菌活性较弱,水层没有抑菌活性。选取抑菌活性较强的石油醚层和乙酸乙酯层进行了气质联用分析,样品一石油醚层中含有的多种具有二硫键的化合物可能使其具有较强的抑菌活性,而且样品一和样品二的石油醚层和乙酸乙酯层均鉴定出多种酚类物质和有机酸,对其抑菌活性可能有一定的贡献。老蒜提取物样品一、样品二的功能成分存在的差异导致了其抑菌活性的不同。     

方格星虫蛋白酶解工艺优化

以水解度为指标,比较7种蛋白酶对方格星虫的水解效果。在单因素试验考察的基础上,采用Box-Behnken模型响应面设计,建立方格星虫蛋白酶解的二次回归模型,确定最佳的水解条件。结果表明,复合蛋白酶对方格星虫蛋白的水解效果最佳,最佳水解条件为:酶与底物比为7.8%,酶解时间为4 h,酶解温度为50℃。该条件下,方格星虫蛋白的水解度达到24.81%。     

方格星虫多糖分离纯化及性质鉴定

以方格星虫（Sipunculus nudus）体壁和血液为试验材料，经胰蛋白酶水解，Sevage法去除蛋白质，乙醇沉淀得到粗多糖，透析并冷冻干燥后分别得到方格星虫体壁多糖（SWP）和血液多糖（SBP）。经凝胶渗透色谱分析，SWP和SBP均为单一组分，相对分子质量分别为284528和198212。红外光谱分析表明，两种多耱结构相似，不含硫酸基团，均含有葡萄耱、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。SBP含有乙酰氨基，而SWP不含乙酰氨基，它们是以α-糖苷键或β-糖苷键连接的呋喃多糖。     

方格星虫多糖的分离纯化及单糖组成

方格星虫多糖经碱法提取、三氯乙酸脱蛋白、DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100凝胶柱层析纯化得到精制方格星虫多糖（Sipunculus nudus polysaccharide,SNPS）。测定SNPS的理化性质和单糖组成,结果表明：SNPS为白色粉末状单一组分;经理化性质测定和紫外光谱分析,表明SNPS的多糖质量分数为99.35%,糖醛酸质量分数为22.21%,不含蛋白质和核酸,不含硫酸根;气相色谱分析结果表明方格星虫多糖SNPS主要由阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,其物质的量比为1.16∶9.54∶1。本研究表明SNPS是从方格星虫中得到的均一组分纯多糖。     

荔枝核活性成分分析及其提取物抗氧化性能研究

对不同荔枝核样品采用香草醛- 高氯酸比色法测定荔枝核总皂甙含量,用硝酸铝- 亚硝酸钠比色法测定总黄酮含量,用蒽酮- 硫酸法测定多糖成分的含量;结果表明：不同荔枝核样品中总皂甙含量在1.30%～1.40%之间,总黄酮含量在5.78%～6.80% 之间;多糖2.85%～3.34% 之间。以芦丁为对照,从对不同体系产生的超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH 自由基的清除能力及脂质过氧化的抑制活性等方面研究荔枝核提取物的抗氧化活性。结果显示：荔枝核提取物质量浓度为0.8mg/ml 时,对超氧阴离子自由基的清除率达92.96%,超过同质量浓度的芦丁;质量浓度为0.5mg/ml 时,对羟自由基的清除率达85. 56%,略低于相应对照。荔枝核提取物对脂质过氧化的抑制率随浓度的增加而增大,质量浓度为0.5mg/ml 时,抑制率达52.56%,稍低于相应对照。妃子笑荔枝核提取物质量浓度为1mg/ml 时,其清除DPPH 自由基的能力超过同质量浓度的芦丁。     

檀香叶提取物抗氧化及抗菌活性初步研究

研究檀香(Sandalwood)叶不同溶剂提取物的抗氧化及抗菌活性,为檀香叶资源开发利用提供依据。采用4种不同溶剂提取檀香叶中抗氧化、抗菌活性成分;采用清除DPPH自由基方法测定抗氧化活性,采用平板打孔法测定抗菌活性。结果表明:檀香叶80%乙醇、水、乙酸乙酯提取物可以清除DPPH自由基;80%乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抗菌作用,但对霉菌、啤酒酵母没有抑菌作用。乙醇提取物经不同温度、不同光照时间处理后,其抗氧化、抗菌活性较稳定。乙醇提取物经不同pH处理后,抗氧化物质在pH6～8范围内稳定,抗菌物质在pH3～7范围内稳定,碱性条件下不稳定。檀香叶乙醇提取物化学成分标识结果表明:檀香叶乙醇提取物中含有多糖、鞣质、黄酮类、酚类物、有机酸以及氨基酸、多肽、蛋白质等成分。结论:80%乙醇、水、乙酸乙酯提取物具有抗氧化活性,其中,80%乙醇提取物抗氧化活性最好。只有80%乙醇提取物具有抗菌活性。      

檀香叶提取物抗氧化及抗菌活性初步研究

研究檀香(Sandalwood)叶不同溶剂提取物的抗氧化及抗菌活性,为檀香叶资源开发利用提供依据。采用4种不同溶剂提取檀香叶中抗氧化、抗菌活性成分;采用清除DPPH自由基方法测定抗氧化活性,采用平板打孔法测定抗菌活性。结果表明:檀香叶80%乙醇、水、乙酸乙酯提取物可以清除DPPH自由基;80%乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有抗菌作用,但对霉菌、啤酒酵母没有抑菌作用。乙醇提取物经不同温度、不同光照时间处理后,其抗氧化、抗菌活性较稳定。乙醇提取物经不同pH处理后,抗氧化物质在pH6～8范围内稳定,抗菌物质在pH3～7范围内稳定,碱性条件下不稳定。檀香叶乙醇提取物化学成分标识结果表明:檀香叶乙醇提取物中含有多糖、鞣质、黄酮类、酚类物、有机酸以及氨基酸、多肽、蛋白质等成分。结论:80%乙醇、水、乙酸乙酯提取物具有抗氧化活性,其中,80%乙醇提取物抗氧化活性最好。只有80%乙醇提取物具有抗菌活性。     

方格星虫纤溶酶抗血栓作用研究

目的:研究方格星虫纤溶酶(SNFE)抗血栓作用。方法:体外采用比浊法测定SNFE对花生四烯酸(AA)诱导下的血小板5 min内最大聚集率(PAGM)的影响;小鼠随机分为空白组、模型组、阿司匹林组(10 mg/kg)、SNFE低剂量组(4000 IU/kg)、SNFE高剂量组(8000 IU/kg),每天进行一次灌胃给药,每7 d记录体重。给药第12 d,除空白组外,皮下注射0.8%角叉菜胶诱发尾部血栓,继续给药2 d,记录造模后48 h黑尾发生率及黑尾相对长度;末次药后2 h眼球采血及凝固法测定血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)。结果:SNFE低、高剂量组AA诱导下的血小板5 min内最大聚集率(PAGM)均低于空白组,抑制率分别为20.2%±4.5%和45.1%±2.5%,但与空白组比较,仅高剂量组PAGM的差异有统计学意义(P<0.01)。注射角叉菜胶48 h后,90%模型组和SNFE低剂量组小鼠出现黑尾,60% SNFE高剂量组小鼠出现黑尾;低、高剂量组的黑尾相对长度均比模型组短,但只有高剂量组有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠的PT、APTT、TT缩短(P<0.05),FIB无明显差异;SNFE高、低剂量组的PT、APTT、TT在数值上均比模型组增加,FIB含量减少,但仅高剂量组的APTT、TT的延长有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:方格星虫纤溶酶有一定的抗血栓形成的作用。     

金钱草提取物的抗氧化活性及其成分研究

用1∶2的氯仿-甲醇超声提取金钱草成分,并用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次进行萃取,利用Schaal烘箱法进行抗氧化实验,同时与合成抗氧化剂BHT进行对照。结果显示,乙酸乙酯提取物(EAF)具有最高的抗氧化活性,其活性大于人工合成抗氧化剂BHT。利用硅胶、RP-18和Sephadex LH-20对其进行活性追踪分离,得到3种纯的抗氧化成分。利用现代波谱技术对其化学结构进行了鉴定,结果显示为槲皮素、槲皮素-3-O-葡萄糖甙和山奈酚-3-O-葡萄糖甙。抗氧化活性顺序为:槲皮素>槲皮素-3-O-葡萄糖甙>山奈酚-3-O-葡萄糖甙>EAF>BHT。酚羟基化合物的抗氧化活性与其结构密切相关,活性大小主要取决于酚羟基的数目。     

西瓜籽油脂肪酸成分分析及抗氧化活性研究

目的：研究西瓜籽油脂肪酸成分及抗氧化活性。方法：采用索氏回流法对西瓜籽进行提油,对西瓜籽油进行酯化处理,用气相色谱—质谱联机（GC-MS）对其脂肪酸的成分、含量进行分析,通过其对铁离子的还原能力和对DPPH自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基清除能力的测定。结果：西瓜籽油中含有6种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸相对含量达到50%以上;西瓜籽油对铁离子具有还原能力,对DPPH自由基的IC₅₀值为3.7 mg/mL,对超氧阴离子自由基的IC₅₀值为0.031 mg/mL,对羟基自由基的IC₅₀值为12.04 mg/mL。结论：西瓜籽油富含不饱和脂肪酸,有较好的抗氧化活性。     

加工方法对方格星虫肉营养组分及特征风味的影响

为研究加工方法(水煮、蒸煮处理)对方格星虫肉营养组分及特征风味的影响,实验采用国标中的营养成分检测方法和电子鼻技术,分别对加工前后方格星虫肉营养成分(水分、灰分、总糖、蛋白质、脂肪与氨基酸)的含量、特征风味进行了对比分析。结果表明,水煮或蒸煮处理均显著降低了新鲜方格星虫肉水分、灰分、总糖、蛋白质和氨基酸的含量(p<0.05),对脂肪含量无显著影响(p>0.05),降低氨基酸含量,其中必需氨基酸占总氨基酸的比例显著降低(p<0.05),而鲜味氨基酸占总氨基酸的比例却显著升高(p<0.05),增强了方格星虫的鲜味。电子鼻能够较好地区分加工前后方格星虫肉的特征风味,主成分分析显示各个样品间差异明显,负荷加载分析显示S2、S7、S9传感器对第1、第2主成分贡献率均较大;水煮或蒸煮处理使方格星虫肉中氨氧化物、甲烷、硫化氢、芳香烷烃类特征风味含量增加,其中氨氧化物与硫化氢类物质含量增加尤其明显。因此,两种加工方式均能引起方格星虫营养成分损失及特征风味变化,为方格星虫食用加工新技术的开发提供参考。     

松针提取物对柑橘青霉病菌的抑制作用及活性成分分析

本试验研究了马尾松松针提取物对柑橘青霉病菌意大利青霉的抑制作用及其活性成分。采用孢子萌发的方法测定了马尾松不同溶剂提取物对意大利青霉抑制作用,结果表明马尾松松针提取物的抑菌活性因提取溶剂的极性而异,其强弱顺序依次是乙酸乙酯提取物乙醇提取物二氯甲烷提取物水提取物石油醚提取物;选取乙酸乙酯提取物进行气质联用分析,发现样品中主要包括α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、β-石竹烯、莰烯、β-荜澄茄油烯等20种化学成分。其中含量最多的α-蒎烯和β-蒎烯抑制柑橘青霉菌的活性最强,是马尾松松针抑制柑橘青霉病菌的主要活性成分;其次为月桂烯;莰烯、罗勒烯、3-蒈烯、β-石竹烯对柑橘青霉病菌的孢子抑制作用最弱。因此,α-蒎烯和β-蒎烯作为安全、高效的熏蒸型柑橘采后抑菌剂具有进一步研究与开发的意义。     

水煮或油煎处理对方格星虫肉挥发性风味物质成分变化的影响

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用分析鉴定新鲜、水煮和油煎加工方格星虫肉挥发性风味成分及
相对含量,并结合气相色谱-嗅闻技术鉴定关键性风味成分。结果表明：新鲜、水煮和油煎方格星虫肉分别检测出
34、44、46 种挥发性成分。进一步分析发现：醛、醇、酮类化合物是构成新鲜方格星虫肉风味的主要成分,高温
水煮和油煎加工均减少了醛类、醇类和酮类物质相对含量,而增加了吡嗪类物质相对含量。比较风味贡献较大的醛
类、醇类和酮类成分相对含量：新鲜肉（60.48%）＞水煮肉（46.58%）＞油煎肉（28.09%）,比较吡嗪类成分相
对含量：油煎肉（10.70%）＞水煮肉（1.39%）＞新鲜肉（0%）。经气相色谱-嗅闻检测确定,新鲜肉中的9 种关
键性风味成分：庚醛、辛醛、（E）-2-壬烯醛、（E）-2-辛烯醛、壬醛、2-十一烯醛、α-蒎烯、3-辛酮、2-丙基-1-庚
醇;水煮肉中的12 种关键性风味成分：庚醛、辛醛、壬醛、2-十一烯醛、（E,E）-2,4-十二碳二烯醛、2,3-辛二酮、
2-甲基十一烷-2-硫醇、2-丁基-3-甲基吡嗪、α-蒎烯、长叶烯、甲苯、乙苯;油煎肉中的10 种关键性风味成分：庚
醛、辛醛、（Z）-2-癸烯醛、壬醛、2-十一烯醛、2,5-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、2-乙基-3,6-二甲基吡嗪、2-乙基-1-
己醇、甲苯。不同加工方式对方格星虫挥发性风味形成有一定的影响,这为方格星虫食用深加工技术开发提供理论
依据。     

干燥方法对方格星虫干品质及特征风味的影响

为研究3种干燥方法对方格星虫干(dried Sipunculus nudus,DSN)品质及特征风味的影响,实验对比分析干制品的感官评分、色泽、复水率、营养成分含量、挥发性盐基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)含量、干燥时间和干燥能耗,并利用变异系数权重法综合评价干制品品质,结合电子鼻技术研究干制品特征风味。结果表明:真空冷冻干燥制得的DSN复水率最大,蛋白质和总糖含量最高,TVB-N含量与色差最小,但其能耗最高;真空干燥DSN感官评分最高。a*和干燥能耗在DSN品质评价中占较大比重,权重值分别为0. 192和0. 241;DSN品质综合评分结果:真空冷冻干燥>真空干燥>鼓风干燥。电子鼻能够区分不同干燥方法制备的DSN风味,6号(甲烷)、7号(无机硫化氢类)、8号(乙醇)和9号(有机硫化氢类)传感器对DSN风味识别起到主要作用。     

杏鲍菇乙醇提取物的抗氧化活性及成分分离鉴定

以杏鲍菇为原料,通过70%乙醇提取可溶性物质,通过体外抗氧化实验研究其乙醇提取物的抗氧化活性,通过高效液相色谱质谱联用技术（LC-MS）分析乙醇提取物的一些生物活性成分。对杏鲍菇乙醇提取物的成分分析表明,杏鲍菇乙醇提取物中蛋白质含量为2.41 mg/g（DW）,总糖含量为25.46 mg/g（DW）,多酚含量为12.03 mg/g（DW）,黄酮含量为1.53 mg/g（DW）。体外抗氧化实验表明,杏鲍菇乙醇提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH·）、羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-）都具有一定的清除能力。结果表明随着杏鲍菇乙醇提取物的浓度增大,抗氧化活性也增加。杏鲍菇乙醇提取物清除自由基能力的大小顺序为:·OH>DPPH·>O2-,而且杏鲍菇乙醇提取物对脂质过氧化具有明显的抑制作用。利用HPLC对多酚类物质进行了分析,其中含有原儿茶酸和黄岑素,利用LC-MS进一步对多酚类物质进行分析,证实其中含有:奎宁酸、没食子酸、原儿茶素、香豆酸和肉桂酸。      

硫磺菌乙酸乙酯提取物抗氧化活性及其成分分析

以硫磺菌为原料制备硫磺菌乙酸乙酯提取物,测定提取物的多糖、多酚、黄酮和三萜含量,并评估其抗氧化活性。结果表明,硫磺菌乙酸乙酯提取物中含有多糖、多酚、黄酮、三萜,含量分别为76.27±3.29, 19.15±0.66,9.12±0.41和32.41±4.03 mg/mL。硫磺菌乙酸乙酯提取物对DPPH、ABTS、羟自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除能力并且具有一定的还原能力。     

薰衣草挥发油的抗氧化活性测定和成分比较

利用水中蒸馏和水上蒸馏提取薰衣草挥发油,采用试剂盒法对其抗氧化活性进行测定,应用GC-MS技术测定其化学成分,结果表明水中蒸馏所的薰衣草挥发油的抗氧化能力比水上蒸馏所的薰衣草挥发油的抗氧化能力强,共鉴定出20种化合物,其中主要的且相同的化合物有6种,分别占相对百分含量的63.03%和75.57%,芳樟醇的含量分别占相对百分含量的43.46%和27.06%,这可能是导致不同方法提取的薰衣草挥发油抗氧化能力不同的主要原因。