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以牛血清白蛋白为载体,采用活化酯法合成灵芝酸A的偶联抗原作为免疫原,按照免疫程序接种试验兔,获得针对偶联抗原的多克隆抗体。对多克隆抗体的效价及靶向进行分析后,构建灵芝酸A的间接竞争酶联免疫吸附测定法。结果显示:多克隆抗体中存在靶向偶联抗原3个区域的独特型抗体,总效价为1∶78 125,其中抗灵芝酸A特异性抗体效价为1∶3 125。间接竞争酶联免疫吸附测定法的灵芝酸A检出限为0.3μg/L,半数抑制浓度为4.0μg/L,线性范围在0.6~27.3μg/L之间。样品测定批间变异系数低于10%,样品加标回收率在82.9%~118.6%之间,对22份灵芝粉剂产品的测定结果显示不同品牌产品中灵芝酸A含量的差异极显著,该法测定结果与高效液相色谱法的测定结果相比,相关系数为0.972。结果表明,间接竞争酶联免疫吸附法测定灵芝酸A可行,该方法能够为灵芝保健品市场中相关产品的质量监控提供一种辅助方案。 相似文献
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快速检测畜产品中青霉素残留的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将青霉素与牛血清白蛋白连接成复合物作为抗原 ,建立畜产品中青霉素残留间接竞争酶联免疫反应吸附法(ELISA)分析方法。测定残留青霉素的浓度范围为 6.0~1 50 ng/ ml检测限是 6.0 ng/ ml,样品回收率 87%~ 1 1 0 %。 相似文献
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目的:制备格林沙星多克隆抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。方法:采用碳二亚胺法将格林沙星偶联于牛血清白蛋白(BSA)作为免疫原,免疫新西兰大白兔获多克隆抗体;采用活泼脂法分别将格林沙星、克林沙星、加替沙星、培氟沙星和沙拉沙星偶联于卵清白蛋白(OVA),制备5种包被抗原并做性能比较;建立icELISA方法并对其灵敏度和特异性进行评价。结果:成功制备了免疫原和包被抗原及抗体,抗体效价最高达64 000倍。以克林沙星-OVA作异源包被,建立的icELISA方法灵敏度最高,半抑制药物浓度(IC50)为9.14 ng/mL,检测限(IC10)为0.9 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.3~36.4 ng/mL,与其他喹诺酮类药物无明显交叉反应。结论:首次制备出格林沙星抗体并建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法,该法灵敏度高、特异性强,为分析生物样品中格林沙星含量的测定提供了1种新的方法。 相似文献
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《中国乳品工业》2018,(10)
为了验证酶联免疫吸附实验(ELISA)中一种简化的的氯霉素包被方法,采用间接竞争酶联免疫吸附法(icELISA)对氯霉素标准品和牛乳样品进行了测定,分析了测量孔间吸光度值变异系数,制备了吸光度值与氯霉素浓度关系的回归曲线,根据回归曲线测算出牛乳样品中氯霉素检出量和回收率,并与目前通用的氯霉素包被方法进行了对比。研究发现,在其它条件一定的情况下,这种简化的包被方法与通用的包被方法相比回归曲线具有更大的斜率,吸光度值的变异系数更低,两者在牛乳样品中氯霉素检出量和回收率方面没有显著性差异。结果表明,这种包被方法可以获得理想的包被效果,能够用于样品中氯霉素的检测。 相似文献
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《食品科学》2020,(10)
建立检测鸡肉中金刚烷胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋白、牛血清白蛋白偶联合成免疫原和包被原,将所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制备特异性识别金刚烷胺的单克隆抗体。ic-ELISA法经系统优化后,最佳包被原稀释倍数为80 000,抗体工作质量浓度为122.50μg/L,对金刚烷胺的IC50为0.69μg/L,检出限为0.21μg/L,在0.07~6.15μg/L之间线性良好,鸡肉样品中添加回收率为101.69%~108.71%,变异系数均低于15%,且实际样品检测结果与高效液相色谱-质谱联用测定结果相关性良好(R2=0.97),表明建立的ic-ELISA具有良好的准确度和可靠性。利用该特异性抗体建立的方法适用于实际鸡肉样品中金刚烷胺的快速检测。 相似文献
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《食品工业》2015,(4)
研究非蛋白质掺假牛乳样品中的乳蛋白质检测方法。样品用15%三氯乙酸溶液处理牛乳样品,沉淀分离乳蛋白质,通过凯氏定氮法和四种分光光度法对液态乳中添加尿素和三聚氰胺常见掺假物进行检测比较研究。结果表明,凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测牛乳中掺入不同比例尿素溶液蛋白质含量,结果不受尿素溶液的影响,准确度高。对于牛乳中掺入三聚氰胺溶液,三氯乙酸结合凯氏定氮法检测相对误差较大,而三氯乙酸结合双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测结果不受三聚氰胺溶液影响,准确度高。考马斯亮蓝法测定牛乳中掺入尿素溶液和三聚氰胺溶液相对误差均很大。 相似文献
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畜产品中磺胺药物残留的检测研究 总被引:1,自引:0,他引:1
建立了检测畜产品中磺胺二甲嘧啶 SM2 的间接竞争酶联免疫反应吸附法 (EL ISA)。以 SM2 、丁二酸酐 (SA)再加上牛血清白蛋白 (BSA)或卵白蛋白 (OA)的结合物免疫小鼠 ,制备特异性针对 SM2 的多克隆抗体。畜产品试样经提取后用 ELISA检测。测定浓度范围 2 .0~ 1 2 0 ng/ ml,最小检测限 2 .0 ng/ ml。 相似文献
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目的 建立鲜湿米粉中米酵菌酸(bongkrekicacid,BA)的免疫学快速检测方法,制备特异性识别BA的单克隆抗体并进行评价。方法 利用碳二亚胺[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]法将BA半抗原与牛血清白蛋白(bovineserumalbumin, BSA)和卵清蛋白(ovalbumin, OVA)载体偶联,分别合成BA免疫原(BA-BSA)和包被原(BA-OVA),用BA-BSA免疫Balb/C小鼠,取免疫效果好的小鼠脾脏与小鼠NS-1骨髓瘤细胞进行融合。采用间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay, icELISA)进行筛选,筛选出能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞,利用有限稀释法进行亚克隆得到单株能稳定分泌所需抗体的细胞;采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用正辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水型抗体,通过酶联免疫吸附法测定纯化后的抗体效价。结果 成功合成了BA免疫原BA-BSA和BA包被原BA-OV... 相似文献
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以9-芴乙酸(fluorene-9-aceticacid,FLU)为原料,经活性酯法合成完全抗原FLU-牛血清白蛋白(bovineserum albumin,BSA)和FLU-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),偶联产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及紫外扫描法鉴定。使用FLU-BSA足垫免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,间接酶联免疫吸附实验(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)测得多克隆抗体效价为51 200,间接竞争ELISA方法测得芴多克隆抗体的特异性,与荧蒽的交叉反应率为12%,与其他14 种多环芳烃交叉反应不明显。 相似文献
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基于电子舌的掺假牛乳的快速检测 总被引:2,自引:0,他引:2
以掺假牛乳样品为检测对象,利用电子舌结合主成分分析法进行研究,旨在寻求一种能有效监控牛乳品质的快速检测方法.对几种常见的掺假(掺入水、食盐、蔗糖、尿素、大豆油)牛乳样品、复原乳以及纯牛乳样品进行检测和评价.试验结果表明:电子舌可以很好地区分纯牛乳和掺入不同物质的牛乳样品,纯牛乳、纯鲜牛乳、复原乳及其混合乳样品得到有效辨识,同时各种掺假牛乳样品随掺入物质的比例在主成分得分图中呈规律性分布.电子舌可用于掺假牛乳的快速检测.在建立典型标准样品数据库的前提下电子舌可有效监控牛乳品质,其在乳制品的质量控制及评价中具有较大的应用潜力. 相似文献
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间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化 总被引:2,自引:0,他引:2
以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件.采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件.选择与DES结构类似的四种药物进行交叉反应,计算交叉反应率.结果表明产生的抗血清的稀释度可以达到 1:102400.方阵滴定法确定最佳包被浓度和抗血清工作浓度分别为1:200和1:4000.通过间接ELISA方法建立了标准曲线,抑制曲线表明,兔抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系,其IC 50为1.89ng/ml,最低检测限为0.08ng/ml.四种DES结构类似物的交叉反应率除双烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%.从而优化了间接酶联免疫检测条件,建立了己烯雌酚实用的检测方法,为最终组装试剂盒奠定了基础. 相似文献
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目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。 相似文献
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《食品工业》2020,(6)
研究麦麸阿拉伯木聚糖与牛血清白蛋白在漆酶的催化下形成酶促共聚物。通过用紫外分光光度法(UVvis)、十二烷基硫酸钠聚丙烯胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)及红外光谱法(FT-IR)对酶促共聚物进行定性表征,并测定酶促共聚物与麦麸阿拉伯木聚糖及牛血清白蛋白乳化特性。结果表明,麦麸阿拉伯木聚糖在漆酶的作用下与牛血清白蛋白发生接枝反应,制得的麦麸阿拉伯木聚糖-牛血清白蛋白酶促共聚物(155.8 m~2/g, 23.7 min)运用在乳状液体系中时,乳化活性及乳化稳定性优于麦麸阿拉伯木聚糖/牛血清白蛋白混合物(144.8 m~2/g, 18.5 min)及麦麸阿拉伯木聚糖(75.3 m~2/g, 17.5 min)及牛血清白蛋白单体(128.0 m~2/g, 15.7 min)。 相似文献
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建立牛乳制品中青霉素酶Alphalisa的检测方法。将青霉素酶进行生物素化,与样品中的青霉素酶竞争结合鼠源性青霉素酶单克隆抗体,利用Alphalisa反向竞争的反应模式,对牛乳中的青霉素酶实施检测。建立的Alphalisa检测方法能特异性识别样品中存在的青霉素酶,方法的线性范围在2.5~500 IU/mL;检出限和定量限分别为1.6 IU/mL和5 IU/mL;批间批内变异度均小于10%。结果表明,该方法能够替代传统酶联免疫吸附实验方法,成为青霉素酶的实验室筛查或检测方法。 相似文献