仿刺参精酶解工艺条件优化及体外抗氧化

本研究以仿刺参精(Apostichopus japonicus spermary,ASJS)为材料,以水解度为指标优化了酶解工艺条件,并考察了酶解产物的体外抗氧化效果。实验选用木瓜蛋白酶(PAP)、复合蛋白酶(PRO)和风味蛋白酶(FLA)作为实验用酶,以双缩脲法结合三氯乙酸法测定水解度,通过单因素与正交实验,优化了单酶酶解工艺条件,并与双酶及三酶复配水解进行了比较实验,最后对不同的水解产物进行了体外抗氧化活性测定。结果表明:单酶最佳酶解工艺条件为PAP:酶添加量3.0%、温度70℃及反应时间4 h;PRO:酶添加量3.0%、温度45℃及反应时间4 h;FLA为:酶添加量2.0%、温度45℃及反应时间4 h。在最佳酶解工艺条件下PAP水解度为32.14%,PRO为31.09%,FLA为11.89%。双酶及三酶的复配水解工艺检测到的水解度均低于单PAP及单PRO。不同水解产物清除羟自由基和超氧阴离子自由基能力结果为,在样品浓度为5 mg/m L和10 mg/m L时,ASJS的PAP酶解产物好于PRO、FLA、双酶、三酶复配,同时也好于仿刺参卵及体壁PAP酶解产物。综上可知,ASJS的PAP水解产物显示出较好的体外抗氧化活性,可以进一步开发利用。      

仿刺参精酶解工艺的优化及酶解液的抗氧化活性

作为性腺的仿刺参精富含蛋白质、多糖和多种活性物质,被单独收集并酶解,用于开发新型的海洋活性多肽。选用木瓜蛋白酶水解仿刺参精,以水解度(DH)为评价标准,通过单因素实验和响应面法确定最佳水解条件。当木瓜蛋白酶与底物质量比为4.4%时,在70 ℃条件下反应4 h,水解度最高可达到43.18%。随后,采用Pall Minimate超滤系统从酶解液中分离梯度肽,得到分子质量范围分别为<1 ku、1~5 ku和5~10 ku的多肽,测定它们对超氧自由基(·O₂-)和羟基自由基(·OH)的清除效率。抗氧化试验结果显示,分子质量<1 ku的多肽对·O₂-的清除能力最强,表明该肽段具有较好的抗氧化活性。仿刺参精的水解产物作为一种具有抗氧化活性的海洋多肽,有望用于保健品、医药和化妆品行业。     

仿刺参卵酶解工艺条件优化

以仿刺参卵为材料,优化出酶解工艺,获得高水解度、风味独特的水解产物。首先,通过实验从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶与风味蛋白酶中筛选出合适的水解用酶。然后通过单因素试验与正交试验,分别考察酶解温度、加酶量及酶解时间对筛选出的各种蛋白酶水解度的影响,获得单酶的优化水解工艺条件。最后进行多酶体系综合酶解实验,综合考虑水解度、生产成本和水解液感官评定结果来确定最佳水解工艺条件。结果表明:最佳酶解条件为:以混合酶(木瓜蛋白酶与复合蛋白酶质量比1:1)在加酶量2.0%、酶解温度75℃条件下酶解4h,煮沸灭酶活后再添加1.5%风味蛋白酶,在酶解温度45℃条件下继续酶解1h,在此工艺条件下水解度达到了77.11%,并且水解液鲜香浓郁,状态均匀澄清,可用于开发风味独特的功能食品。     

仿刺参肠道组织酶解工艺优化及肽段分析

以仿刺参肠道组织为原料,优化酶解工艺条件,研究梯级肽对小鼠原代巨噬细胞过氧化氢损伤的保护作用。采用单因素试验及响应面试验分析法对酶解工艺条件进行优化,利用超滤法获取不同截留分子质量的肽段,采用噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测细胞活力。结果表明：通过响应面优化得最佳条件为：酶解温度50.10 ℃、酶解时间2.84 h、加酶量2.639万 U时水解度可达41.82%。通过超滤制备,分别得到分子质量小于650、650～1 000 u与1 000～10 000 u肽段,各肽段均能显著提高过氧化氢损伤细胞的细胞活力值,所获肽段对过氧化氢损伤巨噬细胞具有显著保护作用,其中小于650 u肽段更佳。     

南方刺参性腺多肽酶解工艺优化及抗氧化活性分析

研究南方养殖刺参性腺多肽的酶解提取条件,并分析南北刺参性腺多肽抗氧化活性。选用复合蛋白酶对刺参性腺进行水解,以酶解多肽得率为指标,选取酶解温度、底物浓度、pH、酶解时间、酶用量等为主要影响因素,在单因素实验基础上应用响应面分析法对以上5个因子进行优化,确定刺参性腺多肽酶解工艺。试验结果表明,刺参性腺多肽酶解最佳条件:温度为56 ℃,底物浓度11.5%,酶添加量0.5 mKat/g,pH7.1,酶解时间4.5 h,此时刺参性腺多肽得率可达到67.97%±0.96%,与预测值相差0.26%。抗氧化试验结果表明,刺参性腺多肽浓度在40 mg/mL时,羟自由基抑制率与超氧自由基抑制率均大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,60 mg/mL刺参性腺多肽的FRAP值大于0.1 mg/mL的维生素C溶液,南、北方养殖刺参性腺酶解多肽的抗氧化能力无显著差异。     

仿刺参雌性生殖腺皂苷提取分离工艺优化及体外抗氧化活性研究

目的:优化超声辅助提取和高速逆流色谱(HSCCC)分离仿刺参雌性生殖腺皂苷工艺并探究其抗氧化活性。方法:以提取时间、乙醇体积分数、超声时间、料液比为考察因素,采用响应面试验优化皂苷提取工艺;针对高速逆流色谱分离工艺的关键参数溶剂体系配比、流动相体积流量、转速进行优化,并通过DPPH自由基、ABTS自由基清除试验评价粗提物及分离组分的抗氧化活性。结果:粗皂苷的最佳提取条件为提取时间7 d,乙醇体积分数83%,超声时间33 min,料液比1∶20 (g/mL),此条件下皂苷提取率为(0.66±0.02)%。在HSCCC溶剂体系配比为V_乙酸乙酯∶V_正丁醇∶V_甲醇∶V_水为2.0∶3.0∶0.2∶4.8,流动相体积流量为2 mL/min,转速为800 r/min的条件下分离粗皂苷提取物得到组分1和组分2。粗皂苷提取物、组分1和组分2的DPPH自由基清除率分别可达(36.23±0.55)%,(35.07±0.20)%和(38.40±0.14)%,ABTS自由基清除率分别可达为(17.55±0.42)%,(24.49±0.50)%和(33.65±0.34)%。结论:经工艺优化获得了较高的仿刺参雌性生殖腺粗皂苷得率及较好的分离效果,且相较于粗皂苷,经HSCCC分离后得到的组分2的抗氧化活性有所提高。     

枸杞清汁酶解澄清工艺优化及体外抗氧化作用

采用果胶酶酶解法提高枸杞清汁透光率,并进一步对其体外抗氧化能力进行研究,以440 nm及660 nm透光率为响应值,研究不同果胶酶添加量、酶解时间、酶解温度、底物pH值对枸杞清汁酶解后澄清效果的影响。通过体外抗氧化试验DPPH自由基清除率、ABTS⁺自由基清除率、铜离子还原能力(cupric reducing antioxidant power,CUPRAC)及铁离子还原抗氧化能力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)]对比VC、枸杞原汁及枸杞清汁的抗氧化能力。结果表明,枸杞清汁最优酶解工艺条件为果胶酶添加量0.02%、酶解温度30℃、酶解时间4 h、底物pH4。枸杞清汁对DPPH自由基、ABTS+自由基均具有较强的清除能力,同时具有较强的还原能力,其中对铜离子还原能力最强。采用果胶酶酶解可以提高枸杞汁的澄清度,制备的枸杞清汁具有较好的体外抗氧化作用。     

仿刺参肠酶解条件的优化及其抗疲劳活性的研究

以水解度为主要指标,筛选了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、动物蛋白酶和水产蛋白酶对仿刺参肠的酶解效果,比较了p H、温度、时间、料液比和加酶量等单因素对水解度的影响,在单因素试验的基础上采用响应面试验设计对酶解条件进行了优化,并对最佳工艺下的水解产物高、中、低剂量对小鼠抗疲劳活性进行了研究。试验结果表明,水产蛋白酶对参肠蛋白的水解效果优于其它蛋白酶;响应面优化得到的最优水解条件为:温度50℃,酶的添加量2.3%,料液比1︰8.6(g/m L),p H 7.1,水解时间3.1 h,其水解度达到18.6%;参肠蛋白水解物的低中高剂量组均能显著延长小鼠的游泳时间,具有抗疲劳活性。     

猪血红蛋白酶解条件优化及酶解物抗氧化研究

以猪血为原料,以DPPH自由基清除率为指标,采用酶法制备抗氧化肽并用响应面分析法(RSM)优化酶解条件。试验结果表明,冰浴+超声波粉碎的血红细胞破碎率高达97.1%,试验条件下水解猪血红蛋白制备抗氧肽的最适用酶为碱性蛋白酶,在温度58℃、pH7.7、加酶量6.5%条件下的酶解产物对DPPH自由基的实际清除率达96.94%,与模型预测值基本相符。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

丝素酶解工艺条件优化及抗氧化活性肽的研究

通过7种酶对柞蚕丝素蛋白水解的实验表明,酸性蛋白酶水解蚕丝素的水解效果最好,并经单因素及正交实验确定酸性蛋白酶水解丝素的最佳条件为:加酶量为8000u/g,pH3.8,料液比为1:200,50℃下,水解4.5h,所得水解液中氨基肽氮含量为807μg/mL,最终得到的水解度为16.8%.经Sephadex G-25葡聚糖凝胶分离出两种组分,其分子量分别为2959、1432Da,并测得其清除·OH自由基能力分别为67.52%、14.76%.     

丝素酶解工艺条件优化及抗氧化活性肽的研究

通过7种酶对柞蚕丝素蛋白水解的实验表明,酸性蛋白酶水解蚕丝素的水解效果最好,并经单因素及正交实验确定酸性蛋白酶水解丝素的最佳条件为:加酶量为8000u/g,pH3·8,料液比为1∶200,50℃下,水解4·5h,所得水解液中氨基肽氮含量为807μg/mL,最终得到的水解度为16·8%。经SephadexG-25葡聚糖凝胶分离出两种组分,其分子量分别为2959、1432Da,并测得其清除·OH自由基能力分别为67·52%、14·76%。      

仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化

目的：以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法：仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。结果：红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构,分子质量约为676kD,硫酸基含量为10.98%,取代度为0.285;硫酸酯化后硫酸基含量为17.43%,取代度为0.360;纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。结论：仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高,抗氧化活性逐渐增强。     

酶解制备羊胎盘抗氧化肽工艺条件的优化

对羊胎盘下脚料为原料制备羊胎盘抗氧化肽的工艺进行了研究。以DPPH自由基清除率和水解度为考察指标,分别采用4种蛋白酶酶解制备羊胎盘抗氧化多肽,结果表明木瓜蛋白酶酶解产物的自由基清除率最高且水解度适中,因此木瓜蛋白酶被确定为水解酶。通过单因素试验与二次响应面回归分析对酶解工艺参数进行了优化。最佳酶解条件为:底物质量浓度33 mg/m L、pH 6.4、酶解温度55℃、加酶量4 900 U/g、酶解时间120 min,此时羊胎盘蛋白水解度为7.92%,10 mg/m L酶解产物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基与羟基自由基的清除率分别可达92.15%、93.45%与46.88%,显示出较好的抗氧化活性。     

鲤鱼鳞酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性研究

为得到高抗氧化活性的鲤鱼鳞胶原蛋白酶解液,试验以羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O2-·)清除率作为主要检测指标,通过单因素试验研究酶解温度、pH值、加酶量、底物浓度、酶解时间对鱼鳞胶原蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响.在此基础上,采用响应面分析法对酶解工艺条件进行优化.得到试验最优工艺为酶解时间4.4 h,...     

鱿鱼酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性的研究

以鱿鱼为原料,探讨了酶法水解鱿鱼的工艺条件,同时研究了最佳工艺条件下酶解液的抗氧化活性.试验结果表明:鱿鱼酶解最佳工艺参数为温度55℃、pH值为8、反应时间为5h,加酶量为40％,通过验证试验,在此条件下,鱿鱼的水解度为56.82％.鱿鱼酶解液具有一定的抗氧化活性,对O2-·和·OH的IC50分别为7.2765mg/mL和0.1121mg/mL.     

桑叶蛋白提取工艺优化及其酶解蛋白体外抗氧化活性

为提高桑叶蛋白的得率和加强桑叶蛋白的开发利用,采用超声细胞破碎法提取桑叶蛋白,并研究桑叶酶解蛋白的体外抗氧化活性。考察浸提液的pH值、液料比、超声功率、破碎时间、浸提温度、浸提时间、浸提次数7个单因素对桑叶蛋白得率的影响,并采用正交试验设计优化提取工艺。采用木瓜蛋白酶酶解桑叶蛋白,得到桑叶酶解蛋白,以DPPH自由基清除法和总还原能力的测定方法评价桑叶酶解蛋白体外抗氧化活性强弱。结果表明,最佳提取工艺条件：浸提液的pH值为8,液料比为12∶1（mL/g）,超声功率200 W下处理5 min,在30℃下水浴15 min浸提2次,在此条件下,桑叶蛋白的得率为9.85%。桑叶酶解蛋白具有一定的还原能力,且对DPPH自由基具有较强的清除能力。     

响应面法优化仿刺参酶解工艺及其改善睡眠活性的研究

以水解度为主要指标,筛选了动物蛋白酶、海参水解酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对仿刺参的酶解效果,考察了酶解温度、加酶量、水解时间、p H等单因素条件对水解度的影响,在此基础上通过响应面分析获得仿刺参的最佳酶解工艺,并对最佳工艺条件下酶解液高、中、低剂量对小鼠改善睡眠的功能进行了研究。结果表明:水产蛋白酶对仿刺参蛋白的水解效果优于其他受试蛋白酶,且响应面结果显示其加酶量对水解度具有极显著影响(p<0.01);响应面法优化得到刺参酶解的最适条件为:p H7、温度49℃、加酶量8%(酶/底物百分比)、时间4h,其水解度达到28.0%;仿刺参酶解液高、中、低剂量组对小鼠没有明显的直接催眠作用,但中剂量组能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率(p<0.05)。     

仿刺参精低分子质量多肽的制备及抗氧化作用

本实验以仿刺参精为原料,制备出多肽并考察其体外和体内抗氧化活性。以清除羟自由基（•OH）能力为指标,考察木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶的5 种酶解方式产生的酶解产物的活性,优化实验用酶。经超滤分级后,测定各级组分的分子质量分布、可溶性蛋白质含量、多肽含量和清除•OH能力。选择清除•OH能力较好的低分子质量多肽组分,测定氨基酸组成,设定低、中、高剂量组（100、200、600 mg/kg（以体质量计,下同））、模型对照组、和空白对照组进行42 d小鼠灌胃实验。实验完成后,检测小鼠血液中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力、谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量和蛋白质羰基含量。结果表明,由木瓜蛋白酶水解,经超滤制备的＜1 000 u仿刺参精多肽具有较好的体外清除•OH能力,其半数抑制浓度为6.02 mg/mL,含量占比为58%,氨基酸组成中谷氨酸等酸性氨基酸和酪氨酸等疏水性氨基酸含量丰富。小鼠抗氧化模型实验表明,实验组生长正常,高剂量多肽组小鼠体内SOD活力显著提高（P＜0.05）,GSH的含量提高极显著（P＜0.01）、GSH-Px活力也呈剂量依赖性升高,但未达到差异显著（P＞0.05）。MDA和蛋白质羰基含量得到有效降低,后者达到差异显著（P＜0.05）。研究结果显示：＜1 000 u仿刺参精多肽具有提高小鼠抗氧化能力的效果,可以作为相关功能产品开发的原材料。     

响应面法优化糙刺参内脏团制备抗氧化肽的酶解工艺

以加工糙刺参的副产物内脏团为原料,选用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分别对其进行酶解,采用ABTS法对酶解产物进行抗氧化活性分析,筛选出酶解产物具有较强抗氧化活性的木瓜蛋白酶作为最适用酶,然后通过响应面法对酶解工艺条件进行了优化。结果表明:木瓜蛋白酶酶解糙刺参内脏团的最佳酶解参数为:温度为50.19℃,pH为8.0,加酶量为2.5%,酶解时间为9.0 h,此时3 mg/mL酶解物的还原能力(ABTS法)为0.2533μmol/g,实验验证结果为0.2552μmol/g;响应面法预测值与实验验证结果吻合性良好。此外,最佳酶解条件下所得酶解产物的氨基酸含量丰富,谷氨酸含量较多,分子量在2000 u以下的组分占总量的99.52%。