纳豆芽孢杆菌NT-6固态发酵罗非鱼下脚料条件优化及产脂肽组分分析

利用纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）NT-6,以罗非鱼下脚料为主要基质,进行固态发酵生产抗菌营养复合型活性肽,以提高抗菌脂肽产量为目的,对培养基和发酵条件进行优化。在对产生的脂肽组分进行分析的基础上,采用高效液相色谱-质谱定量检测法,通过单因素试验和响应面设计优化固态发酵工艺条件。结果表明：利用罗非鱼下脚料为主要基质固态发酵生产的抗菌脂肽组分主要包括表面活性素（m/z分别为995.20、1 008.20、1 058.20）、伊枯草菌素（m/z分别为1 044.30、1 071.20）。优化后的最佳工艺参数为罗非鱼下脚料与麸皮配比3.48∶1（m/m）、初始基质水分含量69.34%（质量分数）、发酵时间61.69 h、发酵温度28.97 ℃、甘蔗渣添加量6%（质量分数）、接种量5 mL/100 g,此条件下抗菌脂肽产量达7.32 g/kg,实际验证结果为7.29 g/kg,相对于优化前提升了7.5 倍,产生的脂肽含有多种脂肽组分。     

碱性蛋白酶酶解罗非鱼下脚料蛋白动力学研究

以加工罗非鱼片废弃的下脚料蛋白和碱性蛋白酶为原料,以水解度为指标,考察温度、底物质量浓度、酶用量及pH等因素对碱性蛋白酶酶解罗非鱼下脚料蛋白水解度的影响。得到碱性蛋白酶水解罗非鱼下脚料蛋白的适宜工艺条件为：酶解温度50℃、底物质量浓度20g/L、酶用量为0.067g/L、pH9.50、反应时间180min,此时水解度为22.00%。同时得到50℃条件下酶失活常数Kd为37.9min-1,反应速率常数K2为244.2min-1、米氏常数KM为29.27g/L、最大反应速度Vmax为28.41g/(min·L);并建立了相应的水解动力学模型。验证实验表明：建立的水解动力学模型与实际水解过程基本吻合。     

罗非鱼下脚料酶法水解条件优化的研究

以罗非鱼下脚料为原料,进行酶法水解工艺的研究,分析酶的种类、酶的添加量、温度、pH值、反应时间和底物浓度等因素对蛋白水解的影响。通过正交试验,确定了木瓜蛋白酶水解的最佳工艺条件:温度为65℃、水解时间为3h、酶加量为1.5%、pH值为6.0、底物浓度为5∶9,此时水解度为9.38%,氨基氮含量为2.03mg/mL,蛋白质提取率为71.27%。     

Bacillus natto TK-1产脂肽发酵条件的优化

对BacillusnattoTK-1产脂肽的发酵条件进行了优化。优化后发酵条件为:60mL培养基装于500mL三角瓶中,接种量3%,温度37℃,床转速110r/min。优化后,发酵液的相对溶血率提高了70%。     

酶解黄斑海蜇下脚料制备降血压肽的工艺条件优化

以黄斑海蜇（Rhopilema hispidum）下脚料为原料,采用酶水解法制备降血压肽。改进ACE（Angiotensin I-converting Enzyme,ACE）抑制率检测方法,并以ACE抑制率为指标,利用响应面法对酶解下脚料制备ACE抑制肽的工艺条件进行优化,在酶解条件（加酶量、液固比、酶解时间）和ACE抑制率之间建立了数学模型Y=65.404-2.486X3+1.7X2X3-7.657X12-4.577X22-1.785X23。优化后的工艺参数为:加酶量0.92%、液固比1.95:1、酶解时间0.95h。根据回归方程的预测结果,其ACE抑制率达66.8%。      

酶解黄斑海蜇下脚料制备降血压肽的工艺条件优化

以黄斑海蜇(Rhopilema hispidum)下脚料为原料,采用酶水解法制备降血压肤.改进ACE(AngiotensinI-converting Enzyme,ACE)抑制率检测方法,并以ACE抑制率为指标,利用响应面法对酶解下脚料制备ACE抑制肽的工艺条件进行优化,在酶解条件(加酶量、液固比、酶解时间)和ACE抑制率之间建立了数学模型Y=65.404-2.486X<,3+1.7X2X-7.657X24.577X22-1.785X32.优化后的工艺参数为:加酶量0.92%、液固比1.95:1、酶解时间0.95h.根据回归方程的预测结果,其ACE抑制率达66.8%.     

罗非鱼下脚料酶解液特定腐败菌的分离和鉴定

采用PCR-DGGE和PCR-RFLP技术研究了罗非鱼下脚料酶解液冷藏过程中的特定腐败菌。结果表明:酶解液在冷藏条件下,在20 d左右腐败,细菌总数在0¹2 d里逐渐增加（8.71×102⁸.13×107cfu/g）,12 d之后趋向稳定。16S r RNA的PCR-RFLP及序列比对分析结果显示,随机挑取的18株细菌分成三个分型,其中分型1占61%,与Genbank核酸数据库的假单胞菌（Pseudomonas sp.）有最大相似性;PCR-DGGE图谱显示酶解液的细菌菌相随时间的延长而逐渐减少,腐败终点菌相单一。DGGE主要条带测序结果表明,酶解液存在三个类群的细菌,分别是假单胞菌属、气单胞菌属（Aeromonas）和不动杆菌属（Acinetobacter）,其中在酶解液腐败终点,荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）占绝对优势,与RFLP结果相符。      

二次回归正交旋转组合优化罗非鱼下脚料酶解液螯合锌的工艺条件

以罗非鱼下脚料酶解液为原料,在单因素的基础上,用二次回归正交旋转组合方法优化其与硫酸锌的螯合条件,结果显示,在配位比2.70∶1、温度71.3℃、时间15min、pH6.86条件下,酶解液与硫酸锌的螯合率可达到87.56％ 各个因素对螯合率影响大小的顺序是:配位比＞pH＞温度＞时间.     

二次回归正交旋转组合优化罗非鱼下脚料酶解液螯合锌的工艺条件

以罗非鱼下脚料酶解液为原料,在单因素的基础上,用二次回归正交旋转组合方法优化其与硫酸锌的螯合条件,结果显示,在配位比2.70∶1、温度71.3℃、时间15min、pH6.86条件下,酶解液与硫酸锌的螯合率可达到87.56%。各个因素对螯合率影响大小的顺序是:配位比>pH>温度>时间。      

响应面法优化加酶提高罗非鱼下脚料和豆粕混合发酵水解度的工艺研究

以罗非鱼下脚料和豆粕为原料,在加入枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌发酵的前提下,添加中性蛋白酶。在单因素的基础之上,以水解度为响应值,对混合发酵的工艺条件进行中心复合设计,确立了最佳工艺条件为:中性蛋白酶添加量0.1%,发酵温度40℃,发酵时间53h。在此条件下,水解度为31.94%,比纯菌种发酵提高4.7%。      

响应面优化罗非鱼下脚料发酵制备蛋白肽的工艺

为提高罗非鱼下脚料蛋白质的水解度,向罗非鱼下脚料中接种枯草芽孢杆菌,采用响应面实验对罗非鱼下脚料发酵制备蛋白肽的工艺进行了优化。以爬坡实验(Plackett-Burman,PB)筛选出影响水解度的显著因素,通过最陡爬坡实验逼近最大水解度区域,并利用Box-Behnken实验进行响应面分析,最后运用高效体积排阻色谱法分析制备的罗非鱼蛋白肽的分子量分布情况。响应面实验结果表明,罗非鱼下脚料制备蛋白肽的最佳发酵工艺为:罗非鱼下脚料13.8%、发酵温度为34℃、装载量为48.6 mL/250 mL,优化后罗非鱼下脚料蛋白质的水解度高达33.12%。高效体积排阻色谱结果表明,制备的罗非鱼蛋白肽中低聚肽的含量高达74.058%。     

响应面法优化加酶提高罗非鱼下脚料和豆粕混合发酵水解度的工艺研究

以罗非鱼下脚料和豆粕为原料,在加入枯草芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌发酵的前提下,添加中性蛋白酶。在单因素的基础之上,以水解度为响应值,对混合发酵的工艺条件进行中心复合设计,确立了最佳工艺条件为:中性蛋白酶添加量0.1%,发酵温度40℃,发酵时间53h。在此条件下,水解度为31.94%,比纯菌种发酵提高4.7%。     

酶法水解对罗非鱼下脚料蛋白功能特性的影响

以罗非鱼下脚料为原料,采用Alcalase蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶对其进行控制酶解,通过pH-stat法控制水解程度,制备不同水解度(1.0%～15.0%)的罗非鱼下脚料酶解蛋白,探讨酶的种类和水解度对其乳化性和发泡性的影响。结果表明:在水解度较低(3.0%～5.0%)时,酶解蛋白的乳化性和发泡性较好,随着水解度进一步增大,酶解蛋白的乳化性和发泡性均降低;比较而言,由中性蛋白酶水解得到的酶解蛋白乳化性较好,而风味蛋白酶水解得到的酶解蛋白发泡性较好;此外,pH值(2～10)对轻度酶解蛋白的乳化性和发泡性影响较大,在pH 4.0～5.0范围内,酶解蛋白的乳化性和发泡性最差。     

利用响应面法优化酶解罗非鱼制备抗氧化肽的研究

采用响应面分析法以·OH清除率和DPPH清除率为研究指标,分析了加酶量、酶解时间、料液比和酶解温度各因素对Protamex蛋白酶酶解罗非鱼制备抗氧化肽的影响,得到了多因素方程来说明各因素之间的相互作用规律,以及多因素对·OH清除率和DPPH清除率的影响,其中料液比对·OH清除率影响最大,酶解时间对DPPH清除率影响最大...     

Bacillus natto TK-1产脂肽发酵条件的优化

对BacillusnattoTK-1产脂肽的发酵条件进行了优化。优化后发酵条件为:60mL培养基装于500mL三角瓶中,接种量3%,温度37℃,床转速110r/min。优化后,发酵液的相对溶血率提高了70%。      

罗非鱼下脚料酶解液脱腥去苦的研究

采用微生物发酵和活性碳吸附两种处理方式对罗非鱼下脚料酶解液进行脱腥去苦的研究。通过不同的考察指标,选取最佳微生物发酵条件、最佳活性碳吸附条件,并通过游离氨基酸含量分析,比较处理前后营养物质的变化,确定罗非鱼下脚料酶解液最佳脱腥去苦方式为干酪乳杆菌Lc、植物乳杆菌Lp菌发酵,发酵条件:发酵比例为1∶1(Lc∶Lp),接种量2%,发酵时间16h,最适温度37℃,该条件下对罗非鱼下角料酶解液脱腥去苦效果最佳。     

罗非鱼下脚料水解工艺的研究

以罗非鱼下脚料为原料,利用多种蛋白酶对罗非鱼下脚料中的蛋白质进行水解,挑选中性蛋白酶1398以及Flavourzyme两种蛋白酶进行复合酶解,得出酶解的最佳工艺参数为:中性蛋白酶1398的酶底比为300U/g、Flavourzyme的酶底比为1200 U/g、Flavourzyme的作用时间为15h、总时间为16h、底物浓度为2%.水解后,总氮回收率达到84.24%.     

罗非鱼下脚料酶解工艺的响应面法优化

采用AS．1398中性蛋白酶对罗非鱼下脚料进行水解，利用响应曲面分析法对酶解工艺条件进行优化，最终确定AS.1398中性蛋白酶水解罗非鱼下脚料的最佳条件为：酶浓度=0．56％，温度=53℃，pH=7．1，水解时间t=4h，液固比为3：1，此时水解度为36.2％。     

酶解高水解度大豆蛋白肽的研究

通过对中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶3种酶对大豆分离蛋白水解程度的研究，优化试验方案，探索制备高水解度大豆蛋白水解液的条件组合，并对3种酶进行了比较，以找出适合于大豆蛋白水解的蛋白酶。     

罗非鱼下脚料复合酶水解物锌螯合盐的制备

以罗非鱼下脚料为原料,通过正交试验优化中性蛋白酶与风味蛋白酶的复合酶解条件,并对酶解液进行超滤,比较不同超滤组分的螯合效果,利用紫外吸收和傅立叶红外扫描对螯合盐进行了鉴定。结果表明:复合酶水解条件为温度55℃、加酶量1500U/g、复合比1∶2、固液比1∶4、自然pH值;水解度为14.43%酶解液的螯合率为77.92%,其超滤组分中,10KDa以下组分的螯合效果最好,螯合率达到89.36%,1KDa以下组分的螯合率较低为61.45%。