基于上转换荧光纳米材料免疫层析法快速检测甲硝唑的研究

为方便现场检测农产品中抗生素残留情况以及解决实验室检测样本量多时导致检测耗时长等问题,本文结合免疫层析技术和上转换发光纳米材料研制了一种可快速定量检测豆芽中甲硝唑残留量的试纸。通过对抗体偶联pH值优化,标记颗粒粒径筛选,包被浓度的确定,在最优条件下制备了上转换发光免疫层析试纸,该技术的方法检测限可达1.01 ng·mL^-1,加标回收率为90.6%～99.7%,变异系数为3.5%～19.4%,检测时间为10 min。     

上转换发光免疫层析技术及其在食品安全 检测中的应用

食品安全是关系到亿万人民健康生活的头等大事,保障食品安全的快速检测技术在不断进步。传统的理化检测方法存在样品前处理复杂、耗时费力、成本居高不下等问题,只能作为疑似样品的确证方法,不能满足质量安全监督现场筛查的需求。上转换发光免疫层析技术是建立在功能化上转换发光纳米材料与抗原抗体特异结合的层析技术基础上的一种新兴技术,具有灵敏度高、特异性强、使用便捷、检测速度快等特点,被广泛应用于快速检测过程中。本文对上转换发光技术及免疫层析技术进行了简要介绍,主要对上转换免疫层析技术以及其在食品安全检测领域的应用进展进行了综述。通过分析目前技术的优点与不足,根据目前的应用领域,提出了发展方向,为该技术在食品安全领域的进一步应用提供了参考。     

胶体金免疫层析法快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留

目的:以胶体金为标记物,根据竞争抑制免疫层析原理,建立一种快速检测猪肉及牛奶中磺胺二甲嘧啶残留的方法.方法:采用柠檬酸三钠法制备40nm胶体金.电镜鉴定后标记磺胺二甲嘧啶多克隆抗体:磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条.结果:所建立的检测体系方法检出限为1 μg/L,将该法与高效液相色谱法(HPLC)对比检测猪肉和牛奶样品,在试纸务的检测范围内,与HPLC法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性.结论:通过消除基质影响,成功检测到猪肉及牛奶中的磺胺二甲嘧啶残留.该方法灵敏度高,样品前处理简便、快速,整个检测过程可在10min内完成.该方法适用于动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的大批量现场检测.     

基于免疫磁珠的胶体金免疫层析法快速检测水产品中地西泮残留

本研究针对水产品中地西泮残留的问题,建立了一种快速、灵敏的免疫磁珠-胶体金免疫层析法。采用链霉亲和素磁珠与生物素化地西泮单克隆抗体偶联制备的免疫磁珠,快速富集、分离水产品中地西泮残留,并结合胶体金免疫层析法进行半定量检测。结果表明,经过优化后试剂卡最佳工艺为金标抗体标记量25 μg/mL、T线抗原包被量0.6 mg/mL、C线羊抗鼠二抗包被量1.5 mg/mL、金标喷量3.0 μL/cm,地西泮加标浓度为1.0、5.0、10.0和15.0 μg/kg时回收率为78.34%~90.40%,相对标准偏差(RSD)为5.03%~8.96%。本方法特异性强、稳定性好,可在25 min内完成单个样本检测,对水产品中地西泮残留检出限为0.5 μg/kg,优于常规前处理法。经验证,对40份水产品样本检测结果与GC-MS法结果一致,证明免疫磁珠-胶体金免疫层析法可作为水产品中地西泮残留快速检测的有效手段。     

稀土掺杂上转换发光材料的研究进展

上转换发光材料的研究已取得巨大的发展,并在各行业中得到应用。介绍了稀土掺杂上转换发光材料的发光机制、制备方法、材料种类和应用,并提出其进一步发展的方向。     

胶体金免疫层析法快速检测食用油中黄曲霉毒素残留

为建立用于快速检测粮油样品中黄曲霉毒素药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,我们采用免疫竞争法,将抗黄曲霉毒素单克隆抗体-胶体金复合物包被在微孔中,并将人工合成的黄曲霉毒素抗原包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面作为检测线(T 线)。待测样品中的黄曲霉毒素残留物将与NC膜上的黄曲霉毒素抗原竞争结合胶体金标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体,并以颜色直观显示检测结果。检测食用油样品时,灵敏度可达到0.5μg/L,仅需20 min。实验证明该检测试剂具有较高的灵敏度及很好的特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为黄曲霉毒素残留现场监控的有效快速筛检手段。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法快速检测磺胺嘧啶残留

本实验用胶体金标记磺胺嘧啶多克隆抗体包被在胺体金垫上,磺胺嘧啶与牛血清白蛋白偶联物和羊抗兔二抗抗体分别包被在硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T线)和质控线(C线),制成免疫层析快速检测试剂条,用于快速检测组织等样品中的磺胺嘧啶残留量.T线与待测样品中所含磺胺嘧啶竞争结合胶体金标记的磺胺嘧啶多克隆抗体,并通过胶体金显色直接观察检测结果.检测猪肉等组织试样时,灵敏度最低值可达到20 ng/mL,只需3～5 min.本试剂条具有较高的灵敏度及特异性,操作简单,快速,结果稳定可靠,可作为磺胺嘧啶残留现场监控的有效筛检手段.     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

基于DNA核酸适配体序列的超灵敏比色法检测牛乳中的雌二醇

分别利用最适长度的雌二醇DNA核酸适配体的特异性识别和胶体金聚集前后颜色及吸光度的变化实现雌二醇的定性和定量检测。本研究制备了胶体金,并设计了75-mer、35-mer和22-mer的雌二醇核酸适配体,依据没有核酸适配体保护的胶体金在最适氯化钠浓度条件下聚集,而有核酸适配体保护的胶体金在此浓度条件下不聚集以及雌二醇的核酸适配体与雌二醇特异性结合的特性,实现对雌二醇的超灵敏检测。结果表明,在Na Cl浓度30 mmol/L、35-mer核酸适配体质量浓度30 nmol/L条件下,雌二醇质量浓度与胶体金在625 nm和523 nm波长条件下,吸光度的比值(A_(625) nm/A_(523) nm)在13.6~54.4 pg/m L的范围内呈良好的线性关系,检测限为2.7 pg/m L。所构建的比色法的特异性、稳定性和重复性均良好。应用该方法对牛乳样品进行检测,雌二醇的最低检测限为13.6 pg/m L,因此可用于奶制品中雌二醇的快速检测。     

荧光定量法快速检测鲜奶中四环素类总量残留

以荧光纳米微球标记抗体,建立免疫层析检测方法,配合荧光定量仪,可高灵敏度地检测样本中4种四环素类药物的残留含量,实现鲜奶中所含四环素类药物的总量检测。结果表明,本方法对四环素的检测下限达10μg/L,对金霉素、土霉素、多西环素回收率均达70%以上,除了与链霉素有0.32%的交叉反应率外,与其他药物没有交叉反应,整个检测过程只需15 min左右。通过建立的荧光定量免疫层析法,实现了四环素总量的快速定量检测。     

乳品中致病大肠杆菌荧光双重PCR技术建立

建立乳及乳制品中致病性大肠杆菌(EPEC)的快检方法。以EPEC特异的微绒毛粘连基因(eae gene)和茵毛束形成编码基因(bfp gene)为模板,设计两对引物,荧光探针对EPEC进行特异性扩增。该方法快速,特异性好,对EPEC的最低检出量为1 cfu/μL(纯菌),检出时间为3 h,同一样品重复检测3次ct值的变异系数均小于5%。建立可快速特异检测乳及乳制品中EPEC的双重荧光PCR方法。     

基于脲酶催化和酸碱指示剂变色原理的高脲乳快速检测方法的建立

针对市场上存在的高脲乳(掺假和病理性)问题,建立区别于正常生理浓度范围的快速检测方法。检测方法依据尿素被酶解导致的pH值升高幅度与其浓度呈正相关这一机理,对牛乳起始pH值进行优化调整为6.8时,选择溴百里酚蓝作为指示剂,可以使乳脲含量达40mg/100mL生理上限卡切值以上时变色,从而区别检出高脲问题乳。研究表明,依此组装的高脲乳检测试剂盒,可用于生产实践。     

基于电子舌的掺假牛乳的快速检测

以掺假牛乳样品为检测对象,利用电子舌结合主成分分析法进行研究,旨在寻求一种能有效监控牛乳品质的快速检测方法.对几种常见的掺假(掺入水、食盐、蔗糖、尿素、大豆油)牛乳样品、复原乳以及纯牛乳样品进行检测和评价.试验结果表明:电子舌可以很好地区分纯牛乳和掺入不同物质的牛乳样品,纯牛乳、纯鲜牛乳、复原乳及其混合乳样品得到有效辨识,同时各种掺假牛乳样品随掺入物质的比例在主成分得分图中呈规律性分布.电子舌可用于掺假牛乳的快速检测.在建立典型标准样品数据库的前提下电子舌可有效监控牛乳品质,其在乳制品的质量控制及评价中具有较大的应用潜力.     

Elispot assay检测牛奶中庆大霉素

为了建立快速检测牛奶中庆大霉素的Elispot assay,采用制备GM免疫抗原获得抗GM多克隆抗体。将检测抗原点阵在PVDF膜上,通过检测抗原和样品中GM竞争结合抗GM多克隆抗体,酶标结合物催化底物显色,根据颜色的有无及深浅判读结果,从而建立了检测牛奶中GM的Elispot assay。该方法的检测阈值为10 ng/mL,检测时间为40 min,可对样品实现半定量检测。该方法制备的试纸条于4℃密封保存90 d仍可用于检测;与多种结构类似物未见交叉反应;其结果与酶联免疫方法一致。     

雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明：IC50为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。     

市售纯牛奶乳清雌二醇和孕酮含量分析

目的：初步调研市售纯牛奶雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量现状。方法：收集同季节6 个品牌(A、B、C、D、E 和F 品牌,各品牌随机采集6 个批号)共36 个批号市售纯牛奶,采用免疫化学发光分析法检测经硫酸酯酶水解的乳清总E2(TE2)和P4。结果：6 个品牌乳清TE2 差异无统计学意义;F 品牌乳清P4 高于C 品牌(P ＜ 0.05),其余各品牌间差异均无统计学意义。36 个批号中,乳清TE2 和P4 最大值与最小值之比分别为2.32 和6.67。A、B、C、D、E 和F 品牌批号间乳清TE2 的最大值与最小值之比分别为1.38、1.60、1.82、1.79、2.17 和1.68,其P4的最大值与最小值之比分别为3.19、5.98、2.89、1.38、1.86 和1.67。6 个品牌的乳清TE2 和P4 均值的最大值与最小值之比分别为1.25 和3.05。结论：市售纯牛奶品牌间乳清P4 存在差异,且同品牌不同批号波动较大;批号间乳清TE2 也有一定差异。     

牛奶中四环素类兽残的快速检测关键技术 应用研究

介绍四环素类兽残快速检测的几种常用方法及区别,并就目前市场上3种典型牛奶用液相色谱-质谱/质谱法,进行土霉素、四环素、金霉素、强力霉素4种抗生素检测,结果表明3种牛奶中四环素含量均低于检出限,效果较好。