微型茯砖茶加工及“金花”菌鉴定

茯砖茶历史悠久,外型大多为砖型、体积大,携带及饮用较为不便。通过自然发花,研制出质量在10g以下,表面及内部均发花较好的微型茯砖茶,并对"金花"菌进行分离、鉴定。试验结果表明:通过含水量30%～32%、模具填充量(7.5～8.0)g/孔、定型时间(15～20)min、灭菌温度(105～110)℃、灭菌时间(3～4)min、发花温度28℃、发花湿度50%、2℃/d逐渐升温干燥的方法获得微型茯砖茶品质较好,茶砖平整、金花茂盛均匀、颗粒饱满,汤色红浓明亮,菌花香纯正、高长,滋味醇厚、回味甘爽,叶底明亮匀齐。经菌落特征和显微结构(有性型和无性型)初步判断微型茯砖茶与传统茯砖茶的"金花"菌实属同一种微生物——冠突散囊菌(Eurotium cristatum)。     

茯砖茶中“金花”菌的研究进展

"金花"菌是茯砖茶中的优势菌群,通过对"金花"菌的菌种鉴定、形态学特征、生长条件及其功能性等方面进行阐述,综述了茯砖茶中"金花"菌的研究现状。     

茯砖茶中“金花”菌的研究进展

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安化茯砖茶中金花菌的筛选鉴定及发酵培养

目的：筛选、鉴定自然发酵的安化茯砖茶中的金花菌,优化分离菌株在安化黑毛茶为原料的发酵条件,实现人工发酵制备安化茯砖茶。方法 以安化白沙溪茯砖茶为实验材料,经过分离、纯化、培养,观察分离菌株的培养特征。对分离菌株进行DNA提取和PCR扩增、测序,以及分子生物学系统发育分析。将分离菌株人工培养后,以菌丝体干重量为考察指标,黑毛茶冲泡液为原始发酵液,对分离菌株的实验室的发酵条件进行优化。结果 分离的单菌落经过比对鉴定为曲霉属（Aspergillus）,推测为谢瓦曲霉（Aspergillus chevalieri）。实验室人工发酵条件确定为：发酵温度28 ℃,转速120 r/min,最佳碳源葡萄糖为90 g/L、氮源NH4Cl为7.5 g/L、无机盐CaCl2为5 g/L,装液量150 mL, 接种量为2.0 mL,发酵时间为6 d。优化后培养基中菌丝体干重量约为空白培养基组的20倍。结论 优化发酵培养条件后制得的发酵剂,可用于人工接种发酵安化黑毛茶,制备安化茯砖茶。     

陕西茯砖茶中“金花”菌的生物学特性分析

从陕西茯砖茶中,对"金花"菌分离纯化并进行生物学特性分析,进而对其种名进行鉴定。从陕西茯砖茶中分离纯化得到一株"金花"菌,将其分别接种到马铃薯琼脂培养基、改良察氏培养基(含5%NaCl)、察氏琼脂培养基、改良察氏培养基(含14%NaCl)、20%蔗糖察氏琼脂培养基上进行菌落、菌体及其繁殖特征的观察,并通过DNA测序在分子水平上对菌株进行鉴定。通过以上对"金花"菌的菌落、菌丝体、繁殖特性,以及其ITS测序分析确定该菌为冠突散囊菌。陕西茯砖茶中"金花"菌的种名鉴定结果与其他产地"金花"菌的种名鉴定结果一致。     

贵州茯茶散茶发花条件优化及微生物多样性分析

贵州是我国茶树品种资源最丰富的省份之一,茶园面积大,但经济产值低,夏秋茶浪费严重,品种结构单一。该研究以贵州省安顺市黑毛茶为供试原材料,人工接种茯砖茶“金花”发酵剂,优化散茯茶发花工艺条件,并开展了理化指标变化及真菌多样性研究。通过单因素试验及正交优化试验分析不同因素对黑毛茶散茶发花的影响。结果表明,其最佳发花条件为：含水量30%、温度24 ℃、发酵时间9 d及接种量1:100（m/m）。在此发花条件下,成品散茯茶冠突曲霉孢子数为3×108 CFU/mL,水分、总灰分、茶多酚、游离氨基酸、水浸出物含量分别为3.0%、6.8%、12.0%、2.4%、42.6%。经过上述优化后,茶汤色明亮,金花茂盛,香气纯正,滋味醇和。通过高通量测序技术分析不同发酵时间下散茯茶的真菌多样性。结果表明,发酵3 d后,曲霉属（Aspergillus）相对丰度达到98.8%。该研究优化了贵州散茶发花的工艺条件,对提高茯砖茶品质具有重要意义,为其他茶叶散茶发花工艺提供参考。     

小麦粉污染霉菌的分离鉴定及产黄曲霉毒素 能力的研究

目的对污染小麦粉中所含霉菌进行分离和菌株鉴定,并对所分离菌株的产黄曲霉毒素能力进行评价。方法使用马铃薯-葡萄糖琼脂培养基和麦汁琼脂培养基对小麦粉污染的霉菌进行分离和纯化,根据菌落形态、显微形态观察和ITS序列分析结果对分离菌株进行鉴定,采用PCR技术检测黄曲毒霉合成路径的关键基因来判断菌株的潜在产毒能力,最后用高效液相色谱法确认菌株是否产毒。结果共分离出5株菌株,分别鉴定为链格孢霉(NHF1)、橘灰青霉(NHF2)、黑曲霉(NHF3)和米曲霉(NHF4、NHF5),其中2株米曲霉具有潜在的产黄曲霉素的能力,在一定条件下会产生黄曲霉毒素。结论需要加强小麦粉微生物检测,尤其是霉菌污染的检测、管理和控制,全面制定小麦粉中污染微生物的限量标准,尤其是霉菌的限量值。     

茯砖茶中氯氰菊酯降解“金花菌”的降解特性及途径

以1株"金花菌"——冠突散囊菌(Eurotium cristatum)ET1为材料,研究了其降解氯氰菊酯(cypermethrin,CY)的特性及途径。冠突散囊菌ET1对CY降解的与其生长趋势是同步的,在PD培养基中8 d内对50mg/L CY降解率为57.93%。动力学研究表明,该菌株降解CY的过程符合一级动力学方程。在测试条件下菌株ET1可有效降解20~100 mg/L质量浓度范围内的CY,在测试的底物浓度、温度、p H范围内,CY半衰期(t1/2/d)为3.382~11.517 d;25°C、初始p H 6.0的条件下,菌株ET1降解50 mg/L CY的t1/2/d最短(6.104 d)。通过GC-MS结合菌株ET1对模式底物的利用情况研究了其降解CY的中间产物,并推导出菌株ET1降解CY途径为:首先分解CY为二氯菊酸(dichloro chrysanthemum acid,DCVA)和α-氰基-3-苯氧基苄醇,α-氰基-3-苯氧基苄醇自发转化为3-苯氧基苯甲醛,3-苯氧基苯甲醛在脱氢酶的作用下转化为3-苯氧基苯甲酸(3-PBA),其次,3-PBA的醚键断裂得到苯酚。     

基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS的“散茶发花”茯茶加工前后的物质变化分析

以大红袍、红茶与茯砖茶原料为供试原材料,利用超高效液相色谱电喷雾四级杆飞行时间串联质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术的代谢组学对不同茶叶原料茯茶的"发花"前后样品的整体成分组成差异进行了分析。结果表明,不同原料"发花"前、后间差异成分数量均有不同,各组差异代谢化合物个数分别为大红袍49个、红茶40个、茯砖茶原料49个;综合3组茶叶的具体差异代谢化合物,发现其从类别上表现出相似的变化规律,即酯型儿茶素下降的极为显著,而简单儿茶素除没食子儿茶素(GC)变化无明显差异外,表儿茶素(EC)、儿茶素(DL-C)、表没食子儿茶素(EGC)的含量较原料都有所升高,原花青素和咖啡碱、可可碱、茶碱、黄嘌呤与次黄嘌呤也有相同的变化;黄酮类化合物槲皮素、山奈酚、牡荆素和芦丁的含量均有不同程度的升高;而大黄素则是在各原料"发花"后均新增的蒽醌类化合物。     

陕西区域茯砖茶中“金花”含量分析

为了研究陕西省区域内茯砖茶中\     

基于图像处理技术快速检测茯砖茶中“金花菌”数量

"金花菌"的数量是评价茯砖茶品质的重要依据之一,为了快速准确的检测茯砖茶中"金花菌"的数量,本研究利用茯砖茶中的"金花菌"颗粒较大,颜色为金黄色,清晰可辨,与其它杂菌和茶基质差异较大的特性,设计出了一种自动、快速检测茯砖茶中"金花菌"数量的方法,首先对茯砖茶进行任意面切割,并利用高分辨率拍照设备获取茶切割面图像,然后利用Image Pro Plus软件中的图像处理系统对茶切割面图像进行处理,之后采用自动计数系统对茯砖茶中"金花菌"的数量进行统计,并以人工直接计数结果为参考,结果表明:本研究方法与人工直接计数法无显著差异,检测结果可靠。因此,该方法可以有效快速准确的检测出茯砖茶中的"金花菌"数量,从而达到在线快速准确地评价茯砖茶质量的目的。     

六堡茶中“金花”菌的生物学特性

微生物对六堡茶的品质形成有重要影响,以"金花"菌普遍茂盛品质为佳。"金花"生长具有随机性,因此,难以控制六堡茶中金花的数量。本研究对从六堡茶分离出的一株金花菌株LB-1雪黄散囊菌(Eurotium niveoglaucum)的形态学与生理特性进行研究,力图掌握其发花规律。结果表明,该菌株的形态学表现为,大量黄色菌丝,有隔;闭囊壳缠绕在具饰菌丝网中,破碎释放子囊孢子;分生孢子头结构呈疏松放射形,其末端会出现泡囊状的顶囊,分生孢子梗较长,壁光滑,顶囊烧瓶形,产孢结构单层;分生孢子椭圆形,少数近球形。菌株LB-1生长周期呈"S"形,其生长适宜温度为25℃、pH值为6.1。菌株LB-1在不同碳源的培养基中以蔗糖和葡萄糖为碳源的培养基菌丝生长良好,其中蔗糖浓度为20%时生长最佳。NaCl浓度为5%时菌株LB-1生长良好。菌株LB-1在不同氮源的培养基中以牛肉膏、蛋白胨、酵母膏为碳源的培养基菌丝生长最佳。     

茯砖茶中金花菌菌落计数方法的优化

金花菌数量是审评茯砖茶产品质量好坏的关键指标。以国标为依据,采用单因素试验和响应面分析法优化茯砖茶中金花菌菌落总数计数方法。结果表明,样品前处理的最佳条件为:筛子目数80目,无菌稀释液为0.85%NaCl溶液,振摇时间50 min。该条件下,金花菌菌落总数为(50.75±1.1)×10~5CFU/g。优化方法得到的金花菌菌落总数是国标方法的5倍左右。     

六堡茶真菌分布浅析及金花菌筛选鉴定

选取多家梧州六堡茶龙头企业生产的六堡茶产品进行真菌分析,并对其中的冠突散囊菌("金花菌")进行分离选育和鉴定。结果显示:各厂家生产的六堡茶,真菌总数在(10~2~10~3)cfu/g干茶数量级之间,但真菌种类存在明显差异。各厂家生产的六堡茶产品中都有不同含量的金花菌,通过菌株分型结果显示六堡茶产品冠突散囊菌与安化黑茶冠突散囊菌亲缘性相近。进一步通过耐热性和生长速度试验筛选出2株适宜六堡茶发酵,表现优良的冠突散囊菌菌株,为六堡茶工艺升级和产品创新奠定基础。     

黄曲霉毒素B_1降解菌的筛选及鉴定

目的:在易被黄曲霉毒素B_1(AFB_1)污染的不同环境中,筛选能够降解AFB_1的菌株。方法:以香豆素为唯一碳源和能源进行AFB_1降解菌株的初筛,得到生长良好的菌株,分别与AFB_1标品(2.5μg/m L)共同作用进行复筛。对降解率最高的菌株通过形态以及16S r DNA序列分析,进行初步鉴定;并对胞外粗提液、菌细胞、胞内裂解物降解AFB_1进行研究。结果:从腐烂朽木中筛选出的菌株XY1降解AFB_1能力达71.91%。根据XY1菌株形态、16S r DNA序列同源性分析,初步确定菌株XY1为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。胞外粗提液降解率为70.23%,菌细胞悬液降解率为8.26%,胞内裂解物的降解率为3.18%,表明菌株XY1的降解活性与胞外粗提液有关。结论:筛选到能高效降解AFB_1的克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)XY1,XY1降解毒素的活性物质主要存在于胞外粗提液。     

普洱茶贮藏过程中“金花”菌的鉴定及其对茶叶品质的影响

由于仓储环境的差异,普洱茶在贮藏过程中偶尔会产生"金花"。以金花普洱茶(熟茶)为实验材料,并以同批次普通普洱茶(熟茶)为参照,对水浸出物、茶多酚、游离氨基酸、茶色素(茶黄素、茶红素、茶褐素)、咖啡碱、水溶性糖、儿茶素类等化学成分含量进行测定;采用平板划线法对"金花"菌进行分离和菌落数量测定,并结合形态观察和分子生物学方法对"金花"菌进行鉴定。结果表明:金花普洱茶(熟茶)和普通普洱茶(熟茶)在水浸出物、茶多酚、儿茶素总量、EC、EGC、茶黄素、游离氨基酸、咖啡碱含量上无显著性差异(P>0.05)。金花普洱茶(熟茶)中茶红素、水溶性总糖、没食子酸含量显著(P<0.05)高于普通普洱茶(熟茶),EGCG、茶褐素含量略低于普通普洱茶(熟茶);在普洱茶贮藏过程中分离出3株"金花"菌,分别鉴定为Aspergillus pallidofulvus(相似度99.9%)、Aspergillus sesamicola(相似度99.8%)、Penicillium manginii(相似度99.6%)。其中Aspergillus sesamicola为优势"金花"菌种,占"金花"菌群数量总量的66%。首次对普洱茶贮藏中的"金花"菌进行了鉴定,初步分析了"金花"菌对普洱茶(熟茶)品质的影响,为"金花"菌在普洱茶中的应用提供了一定的理论基础与参考价值。     

泾阳茯茶中冠突散囊菌的鉴定及降脂作用研究

目的 探究陕西泾阳茯砖茶中冠突散囊菌的鉴定标志, 鉴定泾阳茯茶中的冠突散囊菌, 并研究其降脂作用。方法 从泾阳茯茶中分离筛选真菌, 观察其在3种不同培养基的生长特征, 结合形态学观察和真菌内源转录间隔区(internally transcribed spacer, ITS)基因序列同源性比对; 人工接种菌种至不同产区茶类中, 对接种至茶叶中菌种的形态学、扫描电镜(scan electron microscope, SEM)鉴定和接种后茶叶进行感官审评; 最后建立小鼠肥胖模型, 探讨回接冠突散囊菌后黑茶水浸提物对肥胖模型鼠的作用。结果 筛选分离得到的菌株(JY1)为冠突散囊菌(Eurotium cristatum, E.C.); 该菌在几种试验茶类均可以良好“发花”; 除红茶外, 其余茶样闭囊壳较饱满且子囊孢子的“赤道”周围存在较多小孔, 而红茶表现出以分生孢子为主; 接种后的散茶, 在香气, 汤色和滋味上均有不同程度变化; 与肥胖模型组相比较, 发花茶能显著抑制鼠体质量增长和Lee`s指数, 使血清总胆固醇(total cholesterol, TC)下降, 皮下脂肪细胞直径明显变小。结论 陕西泾阳茯茶中冠突散囊菌“赤道”周围存在较多小孔的电镜结果有可能作为陕西茯茶的特异性鉴定标志, 该菌可在黑茶, 红茶, 白茶, 绿茶上优势生长, 不同程度改变接种后的茶叶香气、汤色、滋味。回接冠突散囊菌后黑茶可降低血清总胆固醇水平, 同时有抑制脂肪细胞体积增大的作用, 且作用有一定时效性。     

贵州秋季栽培不同荞麦品种成熟期果实中黄曲霉及其毒素的分离与鉴定

本研究以贵阳秋季栽培的2个米苦荞(F.tataricum,贵米苦荞18-1号和贵黑米苦荞12号)、2个多苦荞(F.tatari-cymosum,贵多苦荞003C和贵多苦荞60)、2个甜荞(F.esculentum,贵红花甜荞2号和1412-1)、2个常规苦荞(F.tataricum,定苦荞1号和六苦2017)为材料。对其成熟期种子果壳和籽粒进行了黄曲霉分离鉴定,并采用高效液相色谱法对所有品种果壳和籽粒中分离出的黄曲霉菌株进行AFB₁、AFB₂、AFG₁和AFG₂毒素的检测。结果表明,所有品种果壳中均没有分离出黄曲霉菌落;4类荞麦籽粒中仅米苦荞分离出了黄曲霉菌落,共分离出4株黄曲霉菌株。其中贵米苦荞18-1号黄曲霉带菌率为1.56%,贵黑米苦荞12号黄曲霉带菌率为0.78%。分离菌株形态学和ITS序列扩增产物测序结果与已知黄曲霉菌序列完全一致。毒素检测结果表明不同品种之间产毒素差异显著,所有品种籽粒中只有米苦荞中检出4种毒素,贵米苦荞18-1号产AFB₁最高为(5.861±0.055) μg/kg、AFB₂最少为(1.605±0.052) μg/kg,贵黑米苦荞12号产AFB₁最高为(14.475±0.533) μg/kg、AFG₂最少为(3.393±0.151) μg/kg;籽粒产毒量远大于分离菌株产毒量;各分离出菌株之间产毒素能力差异显著,最大产AFT为(11.102±0.095) μg/kg、最小产AFT为(1.794±0.024) μg/kg。上述结果显示供试米苦荞籽粒带菌来源可能是由于果壳开裂籽粒外露后部分籽粒被直接侵染所致。所得结果可为米苦荞中黄曲霉抗性育种研究及荞麦种子的保存、运输、储藏等研究奠定基础。     

“金花”菌的分离鉴定及其对紫娟红茶发酵品质的影响

为探究泾阳散装茯砖茶中“金花”菌的种类及其对紫娟红茶品质的影响,从泾阳散装茯砖茶中分离得到谢瓦曲霉（Aspergillus chevalieri）,并用其对紫娟红茶进行固态发酵。结果表明,紫娟红茶经发酵后,“金花”菌数量极显著增加,茶汤色泽由亮黄色变为橙红色;同时茶多酚、儿茶素、水浸出物、游离氨基酸、茶黄素和茶红素均整体出现不同程度的下降,而花青素、总黄酮含量整体呈升高的变化趋势。经谢瓦曲霉发酵后的紫娟红茶不仅能有效改善其茶汤色泽滋味,还可以促进紫娟红茶发酵过程中抗氧化物质的释放。     

茯砖茶发花过程中冠突散囊菌的变化及 差异性初报

目的 探讨不同季节、地区茯砖茶发花过程中冠突散囊菌类型的变化。方法 样品取自武义、长沙不同发花季节, 通过稀释平板法对样品中微生物进行培养与初筛, 并于光镜下观察初筛菌株的结构。对照《中国真菌志》对菌株进行鉴定。结果 在武义四季发花过程样中共分离得到两株冠突散囊菌, 长沙三季发花过程样中有五株冠突散囊菌、一株阿姆斯特丹散囊菌及一株肋状散囊菌。武义各季节发花过程中散囊菌无类型差异, 长沙夏季发花过程中散囊菌与其他两季有明显类型差异; 所有样品中的优势散囊菌均相同。结论 在发花过程中微生物的类型存在地域性和季节性的差异。