一株产γ-氨基丁酸屎肠球菌的筛选和发酵条件优化及其益生特性分析

为拓宽产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)微生物资源,以四川泡菜为分离源从中筛选高产GABA乳酸菌菌株,并对高产乳酸菌菌株进行生理生化、分子生物学鉴定,高产GABA发酵条件优化及其益生特性分析。结果表明:采用高效液相色谱对菌株产GABA能力分析发现菌株AB157的GABA产量最高为1.08 g/L。生理生化和16S rRNA鉴定菌株AB157为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。通过单因素实验和响应面优化,确定屎肠球菌AB157的最佳培养条件为L-谷氨酸钠底物浓度5.2 g/L、发酵温度31 ℃、初始pH7、发酵时间70 h,在此条件下,屎肠球菌AB157的GABA产量达到1.60 g/L。屎肠球菌AB157的益生分析表明,其在pH2.0和3 g/L的胆盐环境中的存活率分别为39%和59%,胆固醇的脱除量为18.09 μg/mL,说明该菌株具有良好的耐酸和耐胆盐特性以及较强的降胆固醇能力,可作为潜在功能性乳酸菌资源进行后续研究开发。     

人粪便来源的屎肠球菌潜在降胆固醇能力研究

高胆固醇血症为心脑血管疾病的重要诱因,使用具有降胆固醇活性的乳酸菌调控血清胆固醇水平具有重要意义。研究从健康人群粪便中分离获得1株动物双歧杆菌和5株屎肠球菌,考察了这些菌株的胆固醇脱除能力、胆盐耐受能力、模拟胃肠道条件耐受能力等特性。结果表明,屎肠球菌MCLF03和MCLF04对胆固醇的脱除能力显著高于其他菌株,脱除率分别为(38.9±3.77)%和(61.0±4.75)%。屎肠球菌MCLF04在0.5%胆盐溶液、人工胃液、人工肠液中的耐受性均高于屎肠球菌MCLF03。屎肠球菌MCLF04具有潜在的降胆固醇特性,可用于降胆固醇功能性食品的开发研究。     

屎肠球菌R40产胆盐水解酶发酵动力学及底物特异性分析

该研究以产胆盐水解酶的屎肠球菌（Enterococcus faecium）R40为研究对象,模拟人体胆盐条件,对其发酵动力学进行分析。采用Logistic、Luedeking-Piret、Luedeking方程描述屎肠球菌R40发酵过程中菌体生长、产物生成、底物消耗的内在关系,并比较不同胆盐条件对屎肠球菌R40生长和降胆固醇能力的影响,判断其产生的胆盐水解酶是否存在底物特异性。结果表明,拟合模型的相关系数R2均＞0.9,效果良好,模型预测值与试验测量值的误差均＜10%,说明可以通过建立发酵动力学模型对屎肠球菌R40产酶情况进行预测和描述。胆盐的添加有利于屎肠球菌R40发挥降胆固醇作用,使菌株R40提前4 h进入对数生长期,且提高了菌株R40的生物量。不同胆盐对菌株R40生长的影响存在差异性,甘氨酸脱氧胆盐虽能提高生物量,但未缩短适应期。牛磺酸胆盐和甘氨酸胆盐缩短了菌株R40的适应期,但对生物量并无显著影响,说明菌株R40产的胆盐水解酶具有一定的底物特异性。     

产细菌素屎肠球菌SC-Y112的体外益生性及安全性评价

屎肠球菌SC-Y112是一种具有广谱抗菌性质的产细菌素乳酸菌，为更深入了解其菌株性质，本研究通过模拟胃肠液耐受实验、胆盐耐受实验、抗氧化活性测定、溶血活性测定、明胶液化实验、有害代谢物质检测、耐药性评价及肠球菌毒力基因检测对屎肠球菌SC-Y112的体外益生性质与安全性质进行分析评价。结果表明：屎肠球菌SC-Y112对模拟胃肠液耐受性强，在模拟胃液培养3 h存活率达73.66%，在0.3 g/100 mL的胆盐质量浓度下培养3 h后存活率达56.38%，其发酵24 h上清液总抗氧化能力达35.21 U/mL；此外，屎肠球菌SC-Y112不产生物胺、吲哚以及偶氮还原酶等有害代谢物质，无溶血现象，不溶解明胶，不携带常见肠球菌毒力基因，且对万古霉素敏感。研究结果可为菌株的进一步开发与应用提供科学依据。     

传统发酵牦牛酸乳中益生性乳酸菌的体外筛选

为获得具有潜在益生特性的乳酸菌,实验以抗人工胃液、胆盐中生长效率和细胞表面疏水性为筛选指标,对羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离出的38株乳酸菌进行体外筛选。最终通过测定结果综合比较得出菌株编号为YBJ-3、YBJ-11、YBJ-15、YBJ-17、YBJ-30和YBJ-33乳酸菌的益生特性较好,其中4株乳酸菌抗人工胃液能力大于90%,在胆盐中良好生长。通过16S r DNA序列分析鉴定,菌株编号YBJ-3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)、YBJ-11为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、YBJ-15为耐久肠球菌(Enterococcus durans)、YBJ-17为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-30为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-33为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。     

酸马乳源降解亚硝酸盐乳酸菌的分离及鉴定

为筛选亚硝酸盐降解能力强、产酸快、发酵风味好的乳酸菌,以新疆传统酸马乳为筛选源,经亚硝酸盐降解试验初筛、接种辣 椒酱复筛,筛选出一株亚硝酸盐降解率达88.91%、发酵辣椒酱风味佳的乳酸菌C27。 总酸复筛试验显示,菌株C27可以明显缩短发酵 周期,发酵辣椒酱第8天,总酸含量达2.15 g/100 g。 菌株C27经形态观察、生理生化试验及16S rRNA序列分析鉴定为肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesenteroides）。 耐酸及耐胆盐试验显示,菌株C27在pH 3.0及0.30%胆盐环境中能够生长,满足益生菌在肠胃定植的首要条件。因此菌株C27可以作为发酵辣椒酱专用发酵剂进行生产应用。     

新疆喀什长寿老人肠道益生菌的分离鉴定及生物学特性研究

从新疆喀什长寿老人肠道中分离筛选出具有益生功能的乳酸菌,并对其进行体外降甘油三酯能力试验。结果表明,分离获得的41株乳酸菌中有14株菌的甘油三酯降解率均高于15%,其中株菌A2-1、A1-2、A3-1、A4-6、A4-1在pH为3.0的人工胃液中培养3 h的存活率较高,分别为63.22%,60.01%,58.94%,56.14%,50.29%;同时这5菌株在胆盐浓度为1,3,5g/L的MRS培养基中存活率较高,其中存活率最高的菌株为A1-2,存活率分别为46.61%,42.65%,16.32%;经16SrDNA鉴定,A1-2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),A2-1、A3-1、A4-6为屎肠球菌(Enterococcus faecium),A4-1为干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。     

降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及鉴定

以家制的大豆酱、酸菜、酱黄瓜、生拌黄瓜、腌制芥菜以及市售的辣白菜、乌江榨菜、五原榨菜、咸萝卜块为来源,从中分离出了18株乳酸菌菌株.经测定其在MRS液体培养基中降解亚硝酸盐的能力,最终从家制发酵的大豆酱中筛选出了1株优良的亚硝酸盐降解菌D j-1,其在1.0×107cfu/mL时,对0.125mg/mL亚硝酸盐22h内降解率为93.63％.经过形态特征观察、生理生化试验和16S rRNA基因序列相似性分析,鉴定该菌株为屎肠球菌.     

蒙古族奶嚼口与下层凝乳中乳酸菌的筛选和比较研究

该研究以蒙古族奶嚼口和下层凝乳为原料,对乳酸菌进行计数和分离,通过产酸凝乳、耐胆盐实验及基因分析筛选并鉴定优良发酵菌株。结果表明,奶嚼口和下层凝乳中乳酸菌活菌数为（12.60±0.78）lg（CFU/mL）和（12.31±0.35）lg（CFU/mL）;分离获得的200株乳酸菌中有19株产酸凝乳能力较好,其中12株来源于奶嚼口,7株来自下层凝乳;在0.3 g/L和0.6 g/L胆盐环境中,奶嚼口中筛选出的乳酸菌具有更强的胆盐耐受性;奶嚼口筛选出11株乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）和1株屎肠球菌（Enterococcus faecium）;下层凝乳筛选出的7株均为乳酸乳球菌。奶嚼口和下层凝乳中乳酸菌活菌数及种属并无明显差异,奶嚼口中分离的具有产酸凝乳能力的乳酸菌多于下层凝乳中所筛选的菌株,并有较强的胆盐耐受性。     

高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的益生特性

采用植物乳杆菌UL-4发酵生产富含γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）的鹰嘴豆乳,并通过检测此菌株的耐酸、耐胆盐、抑菌、表面特性、降解胆固醇和甘油三酯的能力评价其益生特性。结果表明：菌株发酵鹰嘴豆乳48 h后,活菌数为7.81（lg（CFU/mL））,GABA产量为371.14 mg/L。pH值为2、3、4时,菌株的存活率分别为46.67%、91.81%、174.21%;在质量分数为0.03%、0.15%和0.3%胆盐中的存活率分别为382.83%、91.81%、56.28%,显示出良好的耐酸耐胆盐特性;菌株的表面凝集性和疏水性分别为52.49%和61.50%,在肠道具备一定的黏附和定植能力;菌株具有良好的抑菌特性,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌的抑菌圈直径分别为14.40、15.77、13.36 mm;菌株具备对胆固醇和甘油三酯的降解能力,降解率分别为73.23%和19.11%。植物乳杆菌UL-4能够发酵鹰嘴豆乳产GABA,又具有良好的益生特性,可用于开发功能性食品。     

耐胃液乳酸菌的筛选、鉴定与驯化

利用本实验室分离保存的乳酸菌菌种17株,经过耐胃液实验筛选,得到耐胃液能力较强、生长良好的乳酸菌菌株5株,选取4株菌株利用API乳酸菌生化系统和16S rDNA分析鉴定,并进行耐胃液驯化选育.结果表明,鉴定的4株乳酸菌中2株(编号:BR1-2和R8)为副千酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei),1株(编号:BR3-2)为屎肠球菌(Enterococcus faecium),1株(编号:BR2-2)为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici);驯化后各菌株耐胃液能力均有不同程度的提高,其中BR1-2经人工胃液处理存活率提高52.2%;其他三株菌株的存活率也均提高20%以上.     

植物乳杆菌HLX37降胆固醇活性研究

HLX37是从福建南平地区农户自然发酵的酸乳中分离得到的一株植物乳杆菌,本文对该菌株的耐酸耐胆盐能力和体内外降胆固醇活性进行研究。结果表明,HLX37菌株在p H为3.0和胆盐浓度为3.0 g/L环境下培养4 h的存活率分别为59.1%±4.8%和48.2%±4.9%,且对添加胆盐的MRS+CHOL培养基中胆固醇具有良好的降解能力(24 h和48 h降解率分别达37.33%±2.55%和44.72%±2.74%);连续灌胃HLX37发酵酸奶65 d可显著降低高胆固醇血症大鼠血清总胆固醇含量(p0.05),而将该酸奶灭活后,其降胆固醇效果显著下降(p0.05),说明HLX37活菌能够降低高胆固醇血症大鼠血清胆固醇水平。综上,HLX37菌株在体内外均显示出良好的降胆固醇活性,具有较大潜力应用于功能性发酵食品的生产中。     

降胆固醇乳酸菌的筛选及对大鼠血脂的影响

对分离自发酵品及肠道排泄物的乳酸菌进行降胆固醇体外筛选及体内评价。结果显示：所分离得到的菌株中,对MRS-CHOL培养基胆固醇降解率最高的是R-2菌株(26.97±0.51)%和I-2菌株(23.72±0.41)%;R-2和I-2菌株对酸(pH3.0)有一定耐受性,在0.3g/100mL胆盐质量浓度条件下培养6h后,I-2的活菌数为1.1×104CFU/mL,R-2的活菌数为2.2×106CFU/mL。与对照组相比,采用I-2菌株和R-2菌株饲喂高脂大鼠,均可明显抑制大鼠总胆固醇(TC) (P＜0.01) 和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P＜0.05)升高;经鉴定,I-2菌株和R-2菌株分别为海氏肠球菌(Enterococcus hirae)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。     

人源乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇作用研究

利用选择性培养基、人工胃液及含胆盐培养基,从如皋长寿地区的人群肠道中分离筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其降胆固醇能力及方式。结果表明,分离筛选的60株乳酸菌在pH 3.0的人工胃液中存活率均30%;来源于中年组、老年组及长寿组的乳酸菌存活率分别为69%,71%,70%,均显著高于青少年组(P0.05);在0.3%及0.5%胆盐培养基中的存活率均20%,老年组及长寿组的乳酸菌在0.3%胆盐培养基中的存活率分别为53.85%,55.26%,均显著高于青少年组和中年组(P0.05);来源于长寿组的乳酸菌降胆固醇能力显著高于中年组(P0.05),其中,乳杆菌属与魏斯氏菌属的胆固醇降解率显著高于肠球菌属(P0.05),其降胆固醇的主要方式为细胞吸收和共沉淀。来源于长寿地区人群的乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇能力较强,其中长寿组的乳酸菌要高于其他年龄组。     

盐酸菜中降胆固醇、亚硝酸盐乳酸菌筛选及功能特性研究

以独山传统工艺制作盐酸菜液为研究对象,运用涂布法分离纯化乳酸菌。采用生理生化试验和分子生物学法,鉴定菌株Y-12为棉籽糖乳球菌（Lactococcus raffinolactis）。运用比色法测定其对胆固醇和亚硝酸盐清除能力,该菌株对胆固醇和亚硝酸盐的降解率分别为78.15%和75.17%。对菌株Y-12进行耐酸、耐盐和耐胆盐试验研究,结果表明,菌株Y-12在pH值为≥2.5的酸性环境中能正常生长,能够耐受5%NaCl和0.3%胆盐。     

川西高原发酵牦牛乳中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选与耐受性研究

以川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌为研究对象,采用比色法测定其亚硝酸盐降解能力,从中筛选出亚硝酸盐降解能力极强的菌株。将这些优势菌株分别在人工胃液、人工肠液、胆盐和高盐4个模拟人工胃肠道消化环境中进行培养,测其耐受力。结果表明:这195株乳酸菌亚硝酸盐降解率范围为35.79%~96.51%,其中降解率在80%~90%的菌株占54.87%,仅有1.54%的菌株亚硝酸盐降解率在50%以下,有3株亚硝酸盐降解能力极强的菌株(降解率大于95%)。这3株菌在人工胃液中的活菌数随培养时间的延长而减少,培养3 h后,菌株5、26、150在pH5.5时的活菌数分别为3.7、3.6、4.1×108 CFU/mL;在人工肠液中培养4 h后,菌株5、26、150的活菌数分别为4.3、6.8、5.3×108 CFU/mL;在不同胆盐梯度的培养基中培养24 h后,3株菌的活菌数随胆盐浓度增大而减少,且均保持在108 CFU/mL以上;在高盐环境中培养24 h后的活菌数随盐质量浓度的增加而降低,活菌数均在108 CFU/mL以上。结论:川西高原发酵牦牛乳中分离出的195株乳酸菌降解亚硝酸盐的能力存在较大差异,其中降解亚硝酸盐能力极强的菌株对体外模拟消化环境具有较好的耐受力,为其在医药,食品和生物领域的应用提供了理论依据。     

传统富源酸菜中优质乳酸菌的筛选及应用

以传统自然发酵的富源酸菜为研究对象,利用MRS-CaCO3固体培养基中分离纯化菌株,经过革兰氏染色、过氧化氢酶试验初步鉴定,进行发酵性能（产酸速度、产酸量、降解亚硝酸盐能力、耐酸生长、耐盐生长）测试以确定最优菌株,再通过16S rDNA序列分析进行最终鉴定,并应用于酸菜发酵。结果表明：分离纯化的4株乳酸菌,发酵性能有所差异,菌株N1表现突出,经鉴定为乳杆菌属布氏乳杆菌,将其应用于富源酸菜发酵,发酵效果好,能明显缩短富源酸菜发酵周期,降解亚硝酸盐效果突出,可作为富源酸菜标准化生产菌种。     

具有降胆固醇能力的人源乳酸菌筛选

分离筛选出长寿人群肠道中具有益生功能的乳酸菌,并研究其体外降解胆固醇能力。结果表明分离获得的80株乳酸菌中,9株菌在模拟胃液中培养3 h的存活率较高,分别为26.60%、24.30%、22.50%、16.72%、46.61%、16.10%、19.80%、19.60%、17.80%,在0.30%、0.50%及1.00%的胆盐培养基中存活率最高的菌株为o2,存活率分别为21.31%、13.35%及12.43%;9株菌对氨苄青霉素、青霉素G、氯霉素敏感,对四环素、利福平、环丙沙星敏感或中度敏感;9株菌对三株致病菌均有抑制作用,其中V9、o2分别对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌抑制能力较强,抑菌圈直径分别为12.00 mm、11.40 mm,9株菌对大肠杆菌的抑制作用普遍较强,抑菌圈直径均大于7.00 mm;9株菌中f10、o2、T1及V9的胆固醇降解率较高,分别为45.85%、40.76%、41.70%、42.87%,经生理生化试验及16S rDNA测序鉴定分别为屎肠球菌、食窦魏斯氏菌、干酪乳杆菌及发酵乳杆菌,是良好的辅助降血脂候选菌株。     

新疆酸马奶中乳酸菌的乙醇耐受性及蛋白酶性质研究

通过对新疆酸马奶中乳酸菌以传统方式分离鉴定后,筛选得到不同种属菌株,并进一步对其乙醇耐受性及蛋白酶活性差别进行研究。结果表明:在分离的21株菌株中,其不同种属的5株菌株在不同浓度乙醇胁迫12 h后,在耐胁迫能力上,由高到低分别为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici),其中最高能够耐受浓度为13%的乙醇胁迫。对蛋白酶水解能力的测定结果表明,菌株均能产生蛋白酶,其中乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)的水解圈直径最大,为13.1 mm,其菌株自溶度为36.4%。菌株的乙醇耐受性与其蛋白酶水解能力间无显著关联性。     

酵母浸出物对屎肠球菌活菌数的影响

屎肠球菌(Enterococcus faecium)发酵饲料中的活菌数是保证其功能特性的关键因素,为了提高屎肠球菌发酵过程中的活菌总数,本研究以屎肠球菌为试验菌株,选用4种不同特性的酵母浸出物来考察其对屎肠球菌活菌数的影响。通过单因素试验,确定以酵母浸出物为唯一氮源培养屎肠球菌的活菌数,根据酵母浸出物检测指标找出影响屎肠球菌活菌的关键因子。试验结果表明,培养基中主要提供生长因子和微量元素的酵母浸出物对屎肠球菌的活性有明显的影响,其中游离核苷酸的含量是影响屎肠球菌发酵活菌数重要因子,通过外源添加一定量的游离核苷酸,厌氧培养12 h,获得的最终活菌数为176×10~8 CFU/m L,与未添加游离核苷酸相比,活菌数提高了将近40%。结果显示,在培养基中添加一定量的游离核苷酸可提高屎肠球菌在发酵液中活菌数量,为工业化生产高活菌数的饲用屎肠球菌提供参考和借鉴。