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多酚氧化酶(PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶,能催化邻-苯二酚氧化成邻-苯二醌,也是许多果蔬等农产品酶促褐变的主要原因。本文综述了国内外多酚氧化酶的提取及分离纯化技术的研究进展,包括传统提取方法(如缓冲液匀浆法、丙酮提取法、丙酮粉提取法等)和新型提取方法(超声波辅助提取法和超高压提取法等),传统经典分离纯化方法(如溶剂法、沉淀法)和新型分离纯化方法(如凝胶色谱分离法和离子交换色谱分离法等),旨在为多酚氧化酶的研究和应用,特别是为抑制农产品酶促褐变提供参考。 相似文献
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甘蔗多酚氧化酶的提取与应用试验 总被引:1,自引:0,他引:1
研究甘蔗多酚氧化酶(PPO)的提取及应用条件.实验得出甘蔗PPO提取的最佳工艺条件:甘蔗冷藏温度4℃,磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液的pH6.2,聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)的添加浓度2%,提取液与物料液比例为1.0.甘蔗原汁经抽提、离心、分级盐析、透析后制得部分纯化的PP0酶液,纯化倍数为2.51,酶活力回收率为34.9%;以儿茶酚为底物,甘蔗PPO的最大吸收波长为410nm.通过提前预灰并提高预灰pH值至大于7.5,可有效减缓蔗汁的酶促褐变,从生产源头上减少色素的形成. 相似文献
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应用超声诱导法对土豆中多酚氧化酶进行了粗提,并以邻苯二酚为底物考察了温度、时间和固液比对土豆多酚氧化酶活性的影响并进行了正交试验。结果表明:土豆多酚氧化酶酶促反应产物在408 nm下有最大吸收峰,提取最佳工艺条件为:超声温度40℃,超声时间270 s,超声固液比为60%,经超声波强化提取活力提高到原先的4.62倍。而正交试验优选出超声提取的最佳工艺:温度为35℃,时间240 s,液料比为70%。 相似文献
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目的优化缓冲液匀浆提取茶树多酚氧化酶的方法。方法以龙井43号茶树鲜叶为材料,采用缓冲液匀浆浸提法提取茶树多酚氧化酶,分别进行不同单因素浸提优化试验,测定比较提取的粗酶活性,确定适合的浸提条件。结果以鲜叶标准为一芽二叶,料液比1:2,加入内含5%PVP(w:v)、经预冷的p H5.6柠檬酸-磷酸盐缓冲液(0.15 mol/L),海砂适量,冰浴研磨,4℃条件下隔夜浸提12 h,于4℃、9000 r/min离心35 min,取上清液,为龙井43号鲜叶中多酚氧化酶缓冲液成浆浸提的最优条件。结论采用优化的浸提条件,可以制备得到高活性多酚氧化酶粗酶液,为茶树多酚氧化酶同工酶分离与酶性质研究提供了基础。 相似文献
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为了优化无核白葡萄多酚氧化酶的提取工艺。采用丙酮提取法、超声波辅助浸提法和缓冲溶液浸提法分别提取无核白葡萄多酚氧化酶,在单因素实验料液比、提取时间和缓冲液pH的基础上,利用响应面法优化无核白葡萄多酚氧化酶提取条件。结果表明,多酚氧化酶提取的最佳工艺为料液比1:1.8 (g/mL),浸提时间2.9 h,缓冲液pH5.8,无核白葡萄多酚氧化酶比活力为(378.12±1.3) U/mg,与模型预测值非常接近,拟合性好。采用响应面法分析,能较为准确的预测实验结果,以期为无核白葡萄多酚氧化酶纯化、性质、结构研究提供基础。 相似文献
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为探究超高压加速梨汁褐变的机制,以鲜榨翠冠梨汁为原料,采用超高压(500 MPa、5 min)处理,以未处理的梨汁为对照,测定超高压处理对梨汁货架期色泽的影响,检测处理前后梨汁中溶解氧质量浓度和总酚浓度,并研究多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的最适pH值、最适反应温度、热稳定性、米氏常数(Km)。结果表明,超高压组梨汁货架期6 h褐变(色差值(ΔE)=1.61),而未处理组货架期24 h仍未见明显褐变(ΔE=0.56)。鲜榨梨汁PPO存在PPO1(pH 5.0)和PPO2(pH 7.0)两种形式,超高压加速褐变与PPO1和PPO2被激活有关:PPO1活力从6.5 U/mL上升到14.1 U/mL,上升了1.17 倍;PPO2活力从2.6 U/mL上升到25.5 U/mL,上升了8.8 倍。激活效应的内在原因是PPO存在潜在酶活性形式,其本身活力较弱甚至无活力,超高压是激活PPO潜在酶活性的外在原因之一,十二烷基硫酸钠处理、热处理等也可激活PPO潜在酶活性。超高压降低PPO的Km值,提高了其与底物之间的亲和力,从而提高酶促反应速率;PPO1与底物的亲和力1/Km从2.353 L/mol上升到46.909 L/mol,上升了18.9 倍;PPO2与底物的亲和力从2.852 L/mol上升到62.857 L/mol,上升了21.0 倍。超高压同时会降低最大酶促反应速率(Vmax),Vmax对酶促反应速率的影响如超过Km的影响,将会表现出钝化效应。综上,超高压通过激活PPO潜在酶活力、提高PPO与底物的亲和力和酶促反应速率,加速鲜榨梨汁褐变。 相似文献
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以金花茶花为原料,基于单因素试验结果,采用响应曲面法(response surface method,RSM)和人工神经网络模型(artificial neural networks,ANN)对金花茶花多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的提取工艺进行优化。结果表明:RSM和ANN两种模型的决定系数R2分别为0.9922和0.9362,验证后的相对误差率分别为2.49%、1.14%。对比两种模型,ANN能够比RSM更准确地拟合模型和推导提取条件。金花茶花PPO提取最佳工艺条件为浸提时间45 min,缓冲液pH 6.35,聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone,PVP)添加量为22%。在此条件下,PPO提取量为1 805.11 U/(g·min)。该研究为金花茶花PPO活性与褐变的相关性以及抑制褐变提供基础。 相似文献
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采用丙酮粉沉淀抽滤法、硫酸铵分级沉淀法及苯基琼脂糖疏水性层析法对高灌蓝越橘多酚氧化酶进行提取和纯化。在提取和纯化中,用加入不同的酚吸收剂和抑制剂并比较酶活性的高低来确认最佳方法。结果表明在粗提中加入酚吸收剂、增溶剂和抑制剂提取效果较好,苯基琼脂糖疏水性层析法对此类酶纯化效果较佳并为后来的辅酶的分离提供了较高的纯化倍数。 相似文献
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Polyphenol oxidase (PPO) was extracted from cocoa beans and subsequently purified using ammonium sulfate precipitation followed by high performance liquid chromatography (HPLC) for enrichment. HPLC analysis was performed using hydrophobic interaction chromatography which resulted in a 6.5-fold enrichment and a 24.6% recovery of the enzyme. Enrichment was confirmed using polyacrylamide gel electrophoresis under nondenaturing conditions. Comparison of enzyme- and protein-stained electrophoretic gels revealed the presence of possible multiple molecular forms of PPO and the absence of non-enzymic contaminating protein, indicating a rapid procedure of enzyme extraction and enrichment. 相似文献
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以杨梅汁为原料,采用微波和超声波对杨梅汁中的多酚类物质提取进行了对比研究,两种方法分别采用单因素及正交实验,探讨了最佳提取条件和参数。结果表明:微波提取的最佳工艺参数为乙醇体积分数为80%,微波功率500 W,处理时间25 s,液料体积质量比为4 mL∶1 g;提取多酚提取量为514.837 mg/L;超声波提取的最佳工艺参数为乙醇体积分数为60%,超声波功率500 W,处理时间35 min,液料体积质量比为4 mL∶1 g,多酚提取量为609.256 mg/L。超声波提取的杨梅多酚类物质的量多于微波提取的量。 相似文献