侧孢短芽孢杆菌S62-9对常见微生物的体外抑菌作用

通过研究侧孢短芽孢杆菌S62-9的抑菌谱及抑菌活性,初步判断其是否符合微生态制剂菌种选育的标准。通过指示平板法研究侧孢短芽孢杆菌S62-9的抑菌谱,从中选取1株藤黄微球菌28001(G~+)和1株大肠杆菌CMCC 44752(G~-)作为指示菌,采用液态共培养法研究S62-9对两株菌的抑菌能力。结果表明,S62-9对大多数致病性细菌及部分真菌产生抑菌作用,对G~+菌的抑菌效果强于G~-菌;液态共培养体系中,S62-9对两株指示菌表现出强烈的抑菌作用,抑菌效果随其所占接种比例的增加而增强,抑菌机理包括营养竞争作用以及S62-9产生的抗菌肽的拮抗作用。该研究表明,侧孢短芽孢杆菌S62-9具有广谱、高效的抑菌特性,为其微生态制剂的开发提供了理论基础。     

乌拉尔甘草内生真菌的分离及其抑菌活性研究

研究乌拉尔甘草内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,寻找新型抗菌物质。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行抑菌试验。从乌拉尔甘草中分离到46株内生真菌,其中34株内生真菌对指示菌表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的74%;20株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的43%。乌拉尔甘草的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为新型抗菌物质提供资源。     

抑制芽孢杆菌乳酸菌的筛选鉴定及其抗菌物质的分离纯化

从朝鲜族辣白菜中分离筛选得到1株对芽孢杆菌具有广谱抑菌活性的菌株JLY-7,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪地芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌等食品中常见的腐败性和致病性芽孢杆菌具有较强的抑制作用。对菌株JLY-7进行形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,鉴定其为植物乳杆菌。利用正丁醇萃取、凝胶过滤层析(Sephadex LH-20)和半制备液相色谱纯化等手段对该菌株所产抗菌物质进行分离纯化,得到单一活性抑菌组分,经高分辨电喷雾电离质谱确定该抗菌物质的分子量为694.129 Da。通过蛋白酶处理结果表明,该抗菌物质对常见的蛋白酶均非常敏感。本研究可为乳酸菌抗菌物质控制食品中芽孢杆菌奠定理论基础。     

酪蛋白酶解物中抗菌肽的抑菌性及稳定性研究

对酪蛋白胰蛋白酶酶解物中抗菌肽的抗菌性及稳定性进行研究。实验通过以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽胞杆菌为指示菌,验证了抗菌肽的抑菌性,并以大肠杆菌为指示菌,研究了酶解物中抗菌肽在不同温度、不同pH值、不同储藏时间条件下的抑菌稳定性。结果表明:此抗菌肽能有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽胞杆菌的生长,具有广谱抗菌活性;碱性及中性条件下,此抗菌肽对大肠杆菌抑菌活性稳定,酸性条件下,抑菌活性随pH值下降而增强;此抗菌肽冻干样品在室温下可长期储藏。     

1株乳酸菌所产类细菌素Lactobacillin SD-22的初步研究

自泡菜中分离的329株乳酸菌中筛选出1株具有较广抑菌活性的菌株SD-22,经鉴定为短乳杆菌(Lac- tobacillus brevis)。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,SD-22菌株发酵液对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌(Esche- richia coli),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimuniuns)等革兰氏阴性菌具有较好的抑制作用,而且对部分真菌也有抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性略有下降,表明该活性物质为非蛋白成分或起抑菌作用的非单一物质。该活性物质不同于一般细菌素,属于类细菌素,命名为LactobacillinSD-22。它具有很好的热稳定性,在酸性条件下稳定且活性高,对蛋白酶敏感性低,且具有较广的抗菌谱。     

一种芽孢杆菌中性蛋白酶启动子的克隆和验证

为研究1398中性蛋白酶高效表达的分子机制,对其生产菌株进行了基因组测序和比对,确认了表达该中性蛋白酶的操纵子序列及结构。通过构建1398中性蛋白酶表达质粒,将其转入枯草芽孢杆菌;以gfp为报告基因,将包含P1398在内的不同启动子分别构建到质粒p MK4,转入枯草芽孢杆菌。发酵研究结果表明:P1398是一种底物自发诱导的高效启动子,是菌株表达1398中性蛋白酶的关键因素。1398中性蛋白酶在枯草芽孢杆菌中可获得稳定的表达量,其中在164中活性最高(1210 U/m L);重组枯草芽孢杆菌在LB中培养时,P1398介导的GFP的表达量低于P43和Pxyl A,而在工业培养基PPB中,其表达量为Pxyl A介导的GFP的2.14倍。因此,P1398可用于食品工业酶重组生产菌株的构建。     

副溶血性弧菌拮抗菌的筛选鉴定及抑菌物质特性研究

为获取既可抑制食源性致病菌又可抑制水产致病菌的益生菌株,以人畜共患致病菌副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus ATCC17802)为指示菌,采用点种法初筛以及打孔扩散法复筛,得到1株来源于上海东海海水的H19菌株,其抑菌物抑菌圈直径达(17.16±0.28)mm。通过形态观察及16SrDNA序列分析可知,菌株H19为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis H19,GenBank登录号:MG383451)。将菌株H19进行抑菌谱试验,探究菌株H19抑菌物的理化性质,并且抑菌物通过硫酸铵沉淀及不同孔径透析袋截留粗提,粗提物经蛋白酶处理及Tricine-SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳可知,该抑菌物具有广谱抑菌活性,既可抑制革兰氏阳性菌又可抑制大部分革兰氏阴性菌,且具有较好的热、pH以及紫外线稳定性,该抑菌物可能为2种新型抗菌肽,分子量分别在6.5~9.5kDa以及27.0~35.0kDa。由此可见,枯草芽孢杆菌H19所产抗菌肽具有防治食源性疾病以及水产疾病的应用潜力。     

广谱抑菌性多粘类芽孢杆菌的筛选及其细菌素理化特性

采用热处理和琼脂扩散法从湖泥中筛选出一株产广谱抗菌活性物质的芽孢杆菌XW4,通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA分析等对其进行鉴定,并对其发酵产物进行抑菌活性探究。结果表明XW4在细菌发育分类学上鉴定为多粘类芽孢杆菌,其发酵产物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、赖氨酸芽孢杆菌等多种腐败微生物均有抑制作用XW4。XW4无细胞上清液对蛋白酶k敏感,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶不敏感;经60、80、100℃处理30 min后,对大肠杆菌拮抗活性基本不变;在pH3.0~11.0范围内保持其抑菌活性。     

农用抗生素高产菌株的筛选分离及诱变育种

该实验分离得到4株产农用抗生素菌株,编号1#～4#。 以厚垣镰孢霉（Fusarium chlamydosporum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为指示菌,测定其发酵液的抑菌活性,并对抑菌 活性菌株进行诱变育种。 结果表明,菌株1#对枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）抑菌圈直径＞10 mm,抑菌 活性较好。 采用紫外诱变、重金属激活沉默基因复活诱变两种方法诱变菌株1#后,对厚垣镰孢霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄 色葡萄球菌抑菌作用分别增加了25.68%、32.11%、34.85%、28.28%。 形态学观察及生理生化实验结果初步鉴定菌株1#为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株抗菌肽发酵条件优化及其抑菌活性研究

本文以抑菌圈直径为指标,采用单因素试验和响应面法对解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株产抗菌肽的发酵条件进行优化,并对该抗菌肽的抑菌谱及其最小抑菌浓度(MIC)进行了研究。得到最佳发酵条件为：pH7.5,装液量为50 mL,接种量3%,培养时间13h、温度38.5℃、转速145r/min,抗菌肽含量441.56±1.24 μg/mL。在此条件下抗菌肽的抑菌圈直径达15.95 mm。针对9种指示菌的抑菌谱结果表明,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其次是霉菌、酵母菌。其中,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC为 3.45 μg/mL,大肠杆菌、白地霉、巴氏醋酸杆菌MIC为6.9 μg/mL,禾谷镰孢菌、黄曲霉、假丝酵母MIC为 55.20 μg/mL,红酵母MIC为110.40μg/mL。     

拮抗砀山梨炭疽菌的内生菌筛选及抑菌效果分析

从健康砀山梨中分离出15 株内生菌,筛选出1 株对砀山梨胶孢炭疽菌抑菌活性较高的菌株,命名为DSL-9,初步鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。DSL-9菌株对炭疽菌的抑制主要是通过胞外分泌物作用的结果。采用硫酸铵沉淀法获得DSL-9的粗蛋白提取液,蛋白提取液在30～60?℃抑菌率无明显变化,大于60?℃抑菌率下降;在pH?7～10区间抑菌活性较高,且无明显变化;紫外线对抑菌物质无明显影响;蛋白提取液经蛋白酶处理后,抑菌活性下降。研究内生菌DSL-9对感染炭疽菌砀山梨防御酶活性的影响,发现内生菌DSL-9可提高砀山梨果实对病菌的抗性。从砀山梨中分离筛选的枯草芽孢杆菌DSL-9?对砀山梨炭疽病害的生物防治具有潜在的应用价值。     

枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质的研究进展

枯草芽孢杆菌广泛存在于自然界,具有广谱抑菌活性,其产生的抗菌物质种类繁多。本文综述枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质及其合成途径的研究进展。     

野生大型真菌抑菌菌株的筛选及培养基优化

研究了9种野生食药用大型真菌次生代谢产物的抑菌活性,并优化了高抑菌活性菌株的发酵培养条件,旨在筛选具有良好抗菌活性的野生大型真菌菌株,以寻找新型抗菌物质和为其工业化生产提供参考资料。利用大肠杆菌Escherichia coli和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis为指示菌,采用滤纸片法测定大型真菌的抑菌活性,以摇瓶发酵法对高抑菌活性菌株的培养基配方进行优化,并验证。结果表明:绒柄小皮伞Marasmius confluens对大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的抑菌率最高,分别达到56%和52%。最优培养基配方为:蔗糖20 g/L,酵母膏5 g/L,KH_2PO_4 3.0 g/L,MgSO_4·7H_2O 2.0 g/L,维生素B_1 10.0 mg/L,pH 7.0。在优化的条件下,绒柄小皮伞M.confluens发酵液对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌率分别达85%和88%,比优化前的抑菌率分别提高了0.52倍和0.69倍。野生食药用大型真菌发酵产物中存在丰富的抑菌物质,优化培养有助于提高大型真菌的抑菌活性。     

海洋链霉菌LY-1的抗细菌特性研究

从连云港海域潮间带所采的土样中分离到一株产高活性抗细菌物质的链霉菌LY-1。抗菌谱测定结果表明菌株LY-1 发酵产物对枯草芽孢杆菌等5 株革兰氏阳性菌,大肠杆菌等6 株革兰氏阴性菌有显著拮抗作用。稳定性研究表明该菌所产抗细菌物质在121℃,pH1 和pH12 条件下抑菌活性均不变;紫外线照射也不影响其抑细菌活性。该抗菌产物对蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌生长的抑制作用研究表明,该抗菌产物能够较好的抑制蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌的生长繁殖。菌株LY-1 所产抗菌物质在海产品及食品保鲜、生防及医药方面具有潜在的应用价值。     

α-淀粉酶的耐酸性改造及在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

α-淀粉酶基因经改造后,克隆到穿梭质粒pBE2中。在α-淀粉酶基因的上游连接枯草芽孢杆菌sacB基因的启动子-信号肽序列(sacR),构建了含突变α-淀粉酶基因的分泌型诱导表达载体pBSAT,转化蛋白酶三缺陷枯草芽孢杆菌菌株DB403。含有pBSAT的菌株可将突变α-淀粉酶分泌到胞外,表明sacB基因的启动子-信号肽序列(sacR)能很好的将枯草芽孢杆菌中的重组α-淀粉酶引导到胞外,完成分泌表达。分泌的α-淀粉酶具有较高的耐酸性及生物学活性。     

布氏乳杆菌CF10所产类细菌素Lactobacillin FC-10的初步研究

采用纸片法初筛和杯碟法复筛自黄水中分离出一株抗生物质产生茵CF10，经鉴定为布氏乳杆菌。排除酸性末端产物及过氧化氢的干扰后，CF10菌株发酵液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性茵、大肠杆菌和绿脓杆菌等革兰氏阴性茵、K酵母和某些真菌有强烈的抑制作用。经蛋白酶K处理，该菌株具有广谱抑菌活性、热稳定性，在酸性条件下稳定且活性高，对蛋白酶敏感度低。     

鲅鱼副产物中产蛋白酶微生物的分离与表征

目的 以鲅鱼副产物为实验材料,定向筛选高产蛋白酶的野生菌株。方法 以脱脂牛奶培养基对鲅鱼副产物中的产蛋白酶微生物进行初筛,采用福林酚方法对各菌株产蛋白酶的活力进行测定,复筛出具有高产碱性蛋白酶和中性蛋白酶的野生菌株,并通过分子生物学方法(16S rDNA测序分析)对高产蛋白酶菌株进行物种鉴定。进一步通过测定高产菌发酵过程中的菌株浓度和蛋白酶活力,分析菌株随发酵时间的生长情况和产酶动力学。结果 采用选择性培养基初步筛选获得8株具有蛋白酶活性的菌株,进一步复筛发现两株菌Z3和Z8菌株产蛋白酶的能力较强[碱性蛋白酶活力分别为(393.87±19.69)、(358.87±17.94)U/mL;中性蛋白酶活力分别为(344.87±17.24)、(291.20±14.56)U/mL]。经分子生物学测序比对分析菌株Z3和Z8分别鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)。对两株菌的生产情况和产酶能力进行研究,发现两株菌的产酶模式均为部分生长偶联型,枯草芽孢杆菌Z3菌株合成碱性蛋白酶和中性蛋白酶的能力优于蜡样芽孢杆菌Z8。结论 本研究从鲅鱼副产...     

抗瓜果腐霉芽孢杆菌优良菌株的筛选及生物学特性

为获得具有高效抗菌活性的芽孢杆菌用于生物防治与果蔬保鲜,从柠檬、葡萄、红枣、酸奶、腐乳、豆瓣酱、哈尔滨红肠等26种食品样品中分离获得204株芽孢杆菌,通过对峙培养法,初筛得到62株抗瓜果腐霉(P.aphanidermatum)的菌株,选取其中抑菌效果明显的4株菌株,采用牛津杯扩散法经复筛得到1株显著抗瓜果腐霉的芽孢杆菌L-NM62,其发酵上清液对瓜果腐霉的抑菌圈直径达到(24.54±0.13)mm。菌株L-NM62经形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,被鉴定为枯草芽孢杆菌L-NM62(Bacillus subtilis L-NM62)。进一步研究枯草芽孢杆菌L-NM62的生物学特性,发现该菌株的最适生长温度37℃,最适pH值7.5,最适接种量1.0%,并测定了该条件下枯草芽孢杆菌L-NM62的生长曲线。在此基础上,考察枯草芽孢杆菌L-NM62的抗菌谱,结果表明,枯草芽孢杆菌L-NM62具有广谱的抗菌活性,尤其对霉菌具有高效广谱的抗菌效果,显示出了很好的潜在开发应用前景。     

留兰香精油的抗菌活性研究

采用扩散法对留兰香精油的抗菌活性进行定性测定,用紫外可见分光光度法确定精油的最小抑菌浓度(MIC值)。结果表明留兰香精油对3种试验菌株的抑菌性是枯草芽孢杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌。对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球、菌大肠杆菌3种菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.5、1.0μL/mL和3.5μL/mL。     

一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从菜园土壤中分离筛选到1 株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱。通过形态特征、16SrDNA 序列分析和系统发育分析,菌株K6 与B. amyloliquefaciens 位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌。