乳杆菌ALAC-4产抑菌物质的分离纯化及特性研究

以内蒙古传统发酵食品中筛选出的具有抑制霉菌活性的乳杆菌ALAC-4为研究对象,对其代谢产生的抑菌物质进行分离纯化及特性研究。结果表明:ALAC-4的代谢产物经过饱和硫酸铵粗提、凝胶过滤层析中提、超滤离心管精提后可得到抑制霉菌的活性组分NS3,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其相对分子质量为31.06 ku。对其进行特性研究后发现NS3在pH3.0~6.0的范围内有抑菌活性,有良好的热稳定性,121℃处理30 min后仍有抑菌活性,且其对黄曲霉的最低抑菌浓度为13.66μg/m L。     

乳杆菌代谢产生抑菌物质的特性研究

从内蒙古传统发酵食品中筛选出具有抑酵母作用的乳杆菌,对其特性进行研究。结果表明,ALAC-3和ALAC-4菌株经排酸后,对酵母仍有抑菌效果。活性物质对热有很好的稳定性,并且对紫外线辐射不敏感。Ca2+、Mn2+对ALAC-3代谢产物的抑菌作用起促进作用,而K+、Na+、Mg2+对其代谢产物的抑菌作用起抑制作用。K+,Ca2+,Na+,Mg2+,Mn2+对ALAC-4代谢产物的抑菌作用均起抑制作用。经过氧化氢酶处理后,仍有抑菌效果。经木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后,抑菌活性均有不同程度降低,说明抑菌物质对蛋白酶敏感,故判定抑菌物质中有蛋白类物质。     

香茅油抑菌活性及其在猪肉保鲜中的应用研究

通过滤纸片扩散法和平板稀释法研究香茅油对4种细菌、1种酵母和5种霉菌的抑菌活性及其最低抑菌浓度(MIC),并考察香茅油对猪肉的保鲜作用。结果表明:香茅油对供试菌均有不同程度的抑制作用,其中对于金黄色葡萄球菌的抑制性最强,最低抑菌浓度是0.20μL/mL;其次为啤酒酵母,最低抑菌浓度是0.25μL/mL;而对于大肠杆菌的抑制性最差,最低抑菌浓度是3.12μL/mL;对其他菌种的最低抑菌浓度为0.39μL/m L~1.00μL/mL。香茅油对新鲜猪肉具有良好的保鲜效果,30℃条件下,在第5d时,经适当浓度香茅油处理的猪肉的细菌总数、pH各指标均处于鲜肉水平;4℃条件下,在第21d时,经适当浓度香茅油处理的猪肉的细菌总数、pH各指标均处于鲜肉水平。     

栗壳抑菌物质的提取及其抑菌作用的研究

研究了栗壳提取物中抑菌物质的主要成分及其对常见食品污染菌的抑制作用,并且在食品体系中进行了初步防腐试验。以MCI为填料,采用柱层析法对栗壳粗提物进行初步分离,采用琼脂扩散法和常量肉汤稀释法考察栗壳提取物对4种细菌及2种霉菌的抑制作用。结果表明,栗壳提取物种主要抑菌成分可能为可水解单宁,栗壳单宁对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌均有较明显的抑制作用,最低杀菌质量浓度为0.062 5~2.5 mg/m L,对黑曲霉,青霉孢子的最低杀菌质量浓度为20~40 mg/m L,对霉菌菌丝无抑制作用。食品防腐实验表明,同等质量浓度的栗壳单宁对苹果汁的防腐效果与苯甲酸钠基本相同。     

亚麻籽环肽混合物抑制霉菌生长繁殖活性

选取宛氏拟青霉(AS 3.776)和黄曲霉(CICC 2476)作为试验菌株,于121℃高温灭菌前、后添加一定浓度梯度的亚麻籽环肽混合物(flaxseed cyclolinopeptides,FCLPs)到马铃薯葡萄糖琼脂培养基中。FCLPs对宛氏拟青霉孢子形成的半数抑制浓度IC50分别为0.53 mg/m L(高温灭菌)和0.34 mg/m L(未经高温灭菌);对黄曲霉孢子形成的IC50值分别为0.31 mg/m L(高温灭菌)和0.24 mg/m L(未经高温灭菌)。高温灭菌处理后,FCLPs保持了相当的抑菌活性,对宛氏拟青霉的抑制活性最低残留76.8%(菌落生长)和76.7%(孢子形成);对于黄曲霉的抑制活性,最低残留分别为61.6%(菌落生长)和41.7%(孢子形成)。FCLPs对孢子萌发率的平均抑制率为17.8%(宛氏拟青霉)和7.8%(黄曲霉)。采用高效液相色谱法分析霉菌培养后从培养基中提取的FCLPs,发现高温灭菌会降低环肽的含量,这可能是导致环肽抗菌活性下降的原因之一,但环肽中4种主要环肽的比例没有发生明显变化,且没有发现环肽霉菌代谢物产生。综上所述,FCLPs对霉菌具有一定抑制活性,对高温处理较为稳定,能耐食品的热加工,相比现有抗菌肽具有独特优势。     

脱氢醋酸钠防霉效果的研究

试验以霉变饲料中提取的混合霉菌和黄曲霉、烟曲霉、枯青霉、岛青霉、串珠镰刀茵、禾谷镰刀茵为研究菌种,采用最低抑菌浓度法得出脱氢醋酸钠的最低抑茵浓度,对饲料中混合霉茵的为70 mg/kg,对黄曲霉、烟曲霉的为70 mg/kg,对枯青霉、岛青霉、串珠镰刀菌、禾谷镰刀菌的为80mg/kg;经121℃高温处理30 min后,最低抑菌浓度为70mg∥kg;pH值为5.5时脱氢醋酸钠的最低抑茵浓度为80 mg/kg,pH值为7.0时脱氢醋酸钠的最低抑茵浓度为130 mg/kg,pH值为7.5时脱氢醋酸钠的最低抑菌浓度为140mg/kg.结果表明,当培养基呈弱碱性时,其浓度达到140 mg/kg才具有抑菌能力.     

纳他霉素抑菌效果及其应用研究

论文主要研究纳他霉素的抑菌效果及其应用.试验结果表明:霉菌总数为500个/mL时,纳他霉素对黑根霉的最低抑菌浓度是400 mg/L,对黑曲霉的最低抑菌浓度是800 mg/L,霉菌总数为50个/mL时,纳他霉素对黑根霉的最低抑菌浓度是200 mg/L,对黑曲霉的最低抑菌浓度是600mg/L,纳他霉素在pH为6时、25℃时押菌效果较好,紫外线、重金属能使纳他霉素失去抑菌活性;纳他霉素在酱油中应用效果良好.     

抑制馒头中腐败霉菌活性乳酸菌的筛选及其应用

采用稀释涂布平板法从发霉馒头中分离主要腐败霉菌,并通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定。以分离得到的腐败霉菌为指示菌,从实验室保藏乳酸菌中筛选抑菌效果较好的乳酸菌,对其发酵上清液中抑菌物质的理化特性进行分析,并将其应用于馒头的防腐。结果表明,分离到两株主要腐败霉菌,经鉴定分别为扩展青霉（Penicillium expansum）和黄曲霉（Aspergillus flavus）。筛选到一株具有较强抑制霉菌活性的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）LP-1,其发酵上清液对温度、过氧化氢酶、胰蛋白酶和蛋白酶K处理均不敏感,在pH为3～4时有较好的抑菌活性,初步推测L. plantarum LP-1代谢产生的有机酸为主要抑菌物质。利用L. plantarum LP-1发酵制备酸面团,酸面团添加量为40%时,防霉效果与0.5 g/kg脱氢乙酸钠相当,37 ℃防霉效期可达4 d。     

西沙诺尼果汁抑菌特性与抑菌物质研究

以西沙诺尼果汁为研究对象,检测其对5种常见食源性致病菌和3种乳酸菌的抑制活性,研究温度、p H和蛋白酶K等因素对果汁抑菌活性的影响。考察了不同溶剂对抑菌成分的萃取活性,并对果汁中的有机酸组成和抑菌性能进行检测。结果表明,诺尼果汁对肠炎沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌5株常见食源性致病菌具有明显的抑制作用,而对动物双歧杆菌、植物乳杆菌和德氏乳杆菌3种常见肠道益生菌未表现出抑制活性。抑菌物质在酸性条件下作用较强,热稳定性良好,对蛋白酶K不敏感,经乙醇萃取后的果汁溶解及沉淀部分均具有抑菌活性。西沙诺尼果汁总酸含量为7.26 g/L,采用离子色谱法检测,其有机酸主要组成为苹果酸(7 114.5 mg/L)、3-甲基戊酸(6 113.30 mg/L)、乙酸(2 036.00 mg/L)和己酸(1 969.3mg/L)。抑菌试验表明有机酸是诺尼果汁的主要抑菌物质。     

具有抑菌特性的乳杆菌对食源性病原菌生物被膜形成的影响

以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌为指示菌,研究分离自内蒙古传统发酵食品中的5株乳杆菌对病原菌及其生物被膜的抑制作用。结果表明,5株乳杆菌对单一菌和混合菌生物被膜及AI-2分子相对活性均有抑制作用;ALAC-1和ALAC-5代谢产物抑菌效果较好,尤其对金黄色葡萄球菌抑制作用最好,ALAC-5抑菌率高达78.95%,ALAC-1可达69.47%;混合菌生物被膜对5株乳杆菌代谢产物的敏感性较弱,乳杆菌对其生物被膜抑制作用明显低于单一菌生物被膜。     

抗青霉芽孢杆菌的筛选及抑菌物质分析

从采自黑龙江齐齐哈尔、黑龙江大庆、辽宁沈阳等8 个地区的10 份自然发酵豆酱中分离出40 株芽孢杆菌,并采用平板对峙法和琼脂柱法筛选出2 株对青霉菌具有良好抑制作用的QQHE-2和DQ1-3菌株,其对青霉菌的抑菌率可达到83.42%和46.83%。经16S rRNA分子生物学鉴定两株菌为枯草芽孢杆菌。用扫描电镜观察发现,QQHE-2菌株发酵上清液使青霉菌菌丝形态发生改变,孢子形状干瘪且数量减少。通过对菌株发酵上清液进行pH值和温度调节及用蛋白酶处理,发现菌株分泌的抑菌物质的耐酸性和耐热性较差,经蛋白酶处理后对青霉菌的抑菌率显著降低,由此判断抑菌物质的有效成分为蛋白类或肽类物质。经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定QQHE-2菌株产生抑菌物质的分子质量约为35 kDa。     

ε-聚赖氨酸抑菌性能研究

分别采用分光光度法、菌体量法以及孔扩散法研究了ε-聚赖氨酸对细菌和真菌的抑菌活性及ε-聚赖氨酸浓度、pH值和温度对其抑菌活性的影响。结果表明,ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黄曲霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、保加利亚乳杆菌等6种供试微生物均有一定的抑制作用,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、保加利亚乳杆菌抑制效果较好,对黄曲霉较差;对各种菌的最小抑菌浓度(MIC)为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、保加利亚乳杆菌12.5 mg/L;枯草芽孢杆菌25 mg/L;酿酒酵母800 mg/L;黄曲霉1 600 mg/L。ε-聚赖氨酸的抑菌活性随其浓度的增加而增强,热稳定性非常好,能耐100℃的高温,在pH5～8抑菌活性最强,与甘氨酸、Nisin都有协同增效的作用。     

蓝莓贮藏期病原菌的分离鉴定及植物粗提物抑菌效果研究

以湖南省长沙县的兔眼蓝莓(粉蓝)为试材,分离并鉴定出自然贮藏过程中引发蓝莓果实腐烂变质的3株主要病原真菌(LM-1、LM-2和LM-3),同时采用牛津杯法开展21种植物乙醇粗提物对其中2株低温贮藏中重要致病真菌的抑菌活性筛选,并确定其最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。经形态学观察和18S r DNA序列分析将3株病原真菌分别鉴定为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、互隔交链孢霉(Alternaria alternata)和类阿达青霉(Penicillium adametzioides)。抑菌实验结果表明,丁香对灰葡萄孢菌和互隔交链孢霉的抑制能力最强,0.5 g/m L丁香提取液对灰葡萄孢菌和互隔交链孢霉的平均抑菌圈直径分别达47.55、40.66 mm,MIC分别为15.63、31.25 mg/m L,MBC分别为31.25、62.5 mg/m L。     

产抗李斯特菌细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

从51株肠球菌中筛选出2株具有抑制李斯特菌活性的肠球菌菌株:肠球菌KLDS6.0610和肠球菌KLDS6.0611。在排除有机酸和过氧化氢的干扰后,2株菌的无细胞发酵上清液对指示菌还有强烈的抑制作用。经蛋白酶K处理后,抑菌活性丧失,证明无细胞发酵上清液中含有蛋白性质的抑菌物质,即细菌素。经菌体形态和16SrDNA序列同源性分析鉴定2株肠球菌均为粪肠球菌。     

南五味子丙酮提取物对食品腐败细菌的抑制作用

目的:探讨南五味子丙酮提取物对食品腐败菌的抑制作用。方法:以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等7种菌为供试菌,测定其抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并研究热处理、pH、紫外光对丙酮提取物抑菌活性的影响。结果:质量浓度为100mg/mL的丙酮提取物对供试菌的抑菌圈直径均大于12mm。丙酮提取物对供试菌的MIC值和MBC值:金黄色葡萄球菌100、150mg/mL,铜绿假单胞菌100、150mg/mL,大肠杆菌100、150mg/mL,枯草芽孢杆菌50、100mg/mL,蜡样芽孢杆菌50、100mg/mL,乙型副伤寒沙门氏菌100、150mg/mL,变形杆菌50、100mg/mL。121℃、30min热处理对该提取物抑菌活性无影响。当pH>4时对其抑菌活性有明显的影响。紫外光照射对其抑菌活性有一定的影响。结论:南五味子丙酮提取物对7种食品腐败细菌均有较好的抑制作用。     

蒜氨酸的抑菌效果和防腐保鲜研究

采用平板计数法探讨了蒜氨酸与合成食品防腐剂对霉菌和酵母菌的抑菌效果，蒜氨酸对香辣酱防腐保鲜的效果。结果表明：在pH5.5时，蒜氨酸对多种霉菌和酵母菌的最低抑制浓度（MIC)0.89g/L，而山梨酸钾为2.88g/L，苯甲酸钠为3.44g/L。在试验中发现蒜氨酸对酵母最低杀死浓度（MBC）为1.00g/L。从蒜氨酸与黄曲霉产毒关系的试验中发现，蒜氨酸对黄曲霉产生黄曲霉毒素有较强的抑制作用。蒜氨酸能使香辣酱防腐保鲜期明显延长。     

肉桂油抑菌效果研究

采用滤纸片法测定抑菌圈,平板划线法测定最低抑菌浓度(MIC),以及对单一菌种的气相抑菌实验和对空气中常见菌体的气相抑菌实验,研究了肉桂油对4种细菌、2种酵母、6种霉菌的抑菌活性及其最低抑菌浓度(MIC).结果表明:肉桂油对供试的细菌、酵母、霉菌均有较强的抑菌活性,并且对霉菌的抑菌活性更强一些,且肉桂油即使不直接加入到培养基中,其挥发成分在菌体表面对细菌、真菌和空气中常见菌体也均有较强的抑菌活性.对所有供试菌种的最低抑菌浓度(MIC)小于0.8mL/L,其中黑曲霉的MIC最低,达到0.05m1./L.     

抑制青霉菌乳酸菌的分离、鉴定及抑菌物质分析

目的：从市售酱菜中筛选具有抑制青霉菌活性的乳酸菌,测定其对酱菜中主要霉菌及产毒真菌的抑菌效果,分析乳酸菌抑制青霉菌的有效成分,并对乳酸菌进行分子生物学鉴定。方法：采用双层平板法对酱菜中具有抑制青霉菌活性的乳酸菌进行筛选,打孔法测定其抑制青霉菌作用,并采用蛋白酶消化、调节pH值、热处理等方法分析抑菌物质的有效成分,采用16S rDNA聚合酶链式反应扩增后测序对乳酸菌进行鉴定。结果：从酱菜中筛选出的14 株乳酸菌中,其中3 株对酱菜中分离的青霉菌及2 株产毒真菌的生长有较明显的抑制作用,不同蛋白酶处理、pH值调节对乳酸菌发酵浓缩液的抑菌活性会有不同影响,但是3 种加热处理并不改变抑菌效果。3 株乳酸菌经鉴定分别为：弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）、清酒乳杆菌（Lactobacillus sake）、植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）。结论：从酱菜中分离的乳酸菌对酱菜中青霉菌及某些产毒霉菌的生长有明显抑制作用,推测其抑菌成分可能为小分子肽和/或有机酸。     

长裙竹荪浸提液对食源性病原菌的抑菌作用

以长裙竹荪浸提液为天然抑菌物质,采用平板菌落计数法研究其对4种常见食源性病原菌的抑制作用,分析热处理对其抑菌活性的影响。结果表明:浸提液对病原菌的抑菌作用由高至低排序为大肠杆菌金黄色葡萄球菌副溶血性弧菌单增李斯特菌。其中,浸提液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌与单增李斯特菌的最小抑菌浓度为800μL/m L,对副溶血性弧菌的最小抑菌浓度为1 000μL/m L。将浸提液分别置于100℃水浴与121℃湿热条件下处理25 min,对其实际抑菌效果没有影响。     

红黑二丸中甾醇类物质的抑菌活性

采用牛津杯法和菌饼法分别测定红黑二丸甾醇类物质对细菌和霉菌的抑菌活性,并测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果表明：红黑二丸甾醇类物质对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、黑曲霉和橘青霉均有一定的抑制效果,当甾醇质量浓度为7.0mg/mL时,对金黄色葡萄球菌的抑制效果最好,其抑菌直径大于9mm。红黑二丸甾醇类物质对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其MIC值为0.5mg/mL。不同质量浓度红黑二丸甾醇类物质对细菌的药效持久性随着时间的延长呈下降趋势,且质量浓度越高,抑菌作用越明显。