色谱技术在肽分离中的应用

肽具有分子质量低、易于吸收、生物活性高和低免疫原性等优点,被广泛应用于食品、医疗和化妆品等领域。色谱技术在肽的分离中扮演着重要角色,为肽的分离纯化和产量提高发挥了关键作用。该文重点阐述了离子交换色谱、分子排阻色谱和反相高效液相色谱3种常用色谱技术在肽分离中的应用,分别从技术原理及特点、应用实例进行论述,并对未来色谱技术在肽分离中的应用提出了展望。     

草鱼蛋白源抗氧化肽的分离及鉴定

利用超滤、离子交换色谱、高效逆流色谱以及凝胶过滤色谱等系列分离纯化技术从草鱼蛋白酶解产物中分离纯化抗氧化活性肽,分离过程中发现相对分子质量1～3kD 的组分抗氧化活性最强,且碱性肽组分的抗氧化活性强于酸性或中性肽组分、疏水性肽组分的抗氧化活性强于亲水性肽组分。最终借助反相高效液相色谱在线连接的电喷雾质谱结合氨基酸分析鉴定出一种抗氧化肽,一级结构序列为Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val,相对分子质量为966.3D。     

色谱技术在黄酮类化合物分离纯化中的应用研究进展

综述了色谱技术在黄酮类化合物分离纯化中的应用情况,主要包含柱色谱法、制备型高效液相色谱法、薄层色谱法、超临界流体色谱法、高速逆流色谱法以及多种色谱法的联用,并对制备型液相色谱柱的发展方向、高速逆流色谱溶剂体系的优化、多维色谱系统的耦合使用作了展望。     

反相高效液相色谱-质谱联用法测定抑菌肽功能单元的氨基酸序列

测定乳酸菌发酵液中小分子抑菌肽抑菌功能单元的氨基酸组成序列对于深入理解其抑菌原理并实际应用有重要意义。作者利用AssayMAP Bravo蛋白纯化系统平台,采用色谱-质谱联用法将相对分子质量为3 500的抑菌肽样品经过凝胶过滤色谱分离纯化,两步反相高效液相色谱分离纯化和二维质谱鉴定,得到高纯度、高抑菌活性的三个抑菌功能单元,氨基酸组成序列分别为Phe-Tyr-Pro-Ser-Tyr-Ala,Asn-Glu-Arg-His和Lys-Glu-Ile-Thr-Pro-Ser-Glu-Arg,即该小肽的功能单元由三个短肽组成。结果表明,利用该方法,能够有效地提取并检测该小分子抑菌肽,其在氨基酸组成上与Nisin不同。     

米糠蛋白类阿片拮抗肽的分离纯化

采用体积排阻色谱和反相高效液相(RP-HPLC)对米糠蛋白酶解物进行分离纯化,得到一种具有较高活性的类阿片拮抗肽,体积排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定它的相对分子质量为546Da。     

蛋清肽的结构及活性研究

蛋清蛋白质活性肽经交联葡聚糖凝胶色谱纯化,通过液相色谱四极杆线性离子阱串联质谱确证3种活性肽的一级结构,氨基酸序列分别为Arg-Val-Pro-Ser-Lea-Met,Thr-Pro-Ser-Pro-Arg和Asp-Leu-Gln-Gly-Lys.Fmoc固相合成法合成相应肽序列,经制备液相色谱纯化纯度分别为98.73%、98.77%、96.68%.利用分析型高效液相色谱分别测定3种肽的血管紧张素转化酶抑制活性,结果表明Asp-Leu-Gin-Gly-Lys的活性较高,血管紧张素转化酶活性抑制率为35%.     

酶解制备水产动物活性肽研究进展

生物活性肽是一类分子量较低的小分子蛋白,具有特殊的生物活性。以水产动物为原料通过酶解制备的生物活性肽具有抗氧化、降血压、免疫等多种生物学活性。综述活性肽的主要生物学功能、酶水解制备以及离子交换色谱、凝胶色谱和高效液相色谱等分离纯化手段,并展望其研究趋势和市场前景。     

小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

为了探讨和研究小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离提纯方法、技术参数及分离效果,首先采用超滤、纳滤膜技术将谷朊蛋白水解液按照相对分子质量的不同进行分离纯化,采用高效液相色谱法和SHR大鼠实验检ACE抑制抑制效果,并对高抑制活性的组分采用凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)进一步分离纯化。结果显示膜过滤和凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)能够有效分离和纯化谷朊蛋白抑制肽,IC50由0.125mg/mL降低到0.106mg/mL。一次性灌胃SHR大鼠一星期后动脉血压降低(8.86±2.23)mmHg,证明谷朊蛋白抑制肽经过分离纯化后具有良好的降血压效果。     

模拟移动床技术在天然产物分离制备中的应用

随着模拟移动床色谱技术(simulated moving bed,SMB)的快速发展,该技术在天然产物活性成分的提取与纯化中的应用日益广泛。本文简述了SMB技术的发展和在天然产物分离中的应用现状,并重点介绍了SMB技术在黄酮类、多酚类、氨基酸以及肽类和糖类分离制备中的应用。与传统的制备色谱技术相比,SMB采用连续操作手段,具有易于自动化操作、制备效率高、制备量大等特点,在天然产物分离制备中具有良好的发展前景。     

高效液相色谱分离纯化多肽的研究进展

简要介绍了多肽的性质及其应用,综述了高效液相色谱分离纯化多肽的研究进展,探讨了今后分离纯化活性多肽的研究方向.     

高效液相色谱分离纯化多肽的研究进展

简要介绍了多肽的性质及其应用,综述了高效液相色谱分离纯化多肽的研究进展,探讨了今后分离纯化活性多肽的研究方向。     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分(肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白)进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析.结果表明:罗非鱼肌浆蛋白酶解物(tilapia sarcoplasmi...     

酪蛋白非磷肽中一种ACE活性抑制肽的分离和鉴定

酪蛋白经碱性蛋白酶Alcalase水解后,加入乙醇提取出的酪蛋白非磷肽(CNPPs)对血管紧张素转化酶(ACE)的活性有很强的抑制作用。采用凝胶过滤色谱Sephadex G-15和反相高效液相色谱(RP—HPLC)对CNPPs进行分离纯化,通过高效液相色谱/电喷雾电离质谱联用分析和氨基酸组成分析鉴定出一种抑制ACE活性肽,其氨基酸序列为Ser-Trp,ACE半抑制浓度为92.8μmol/L。     

海洋胶原低聚肽的分离纯化及其抗氧化活性研究

通过总抗氧化能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力及还原能力实验,对海洋胶原低聚肽的体外抗氧化活性进行考察,然后采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,测定收集得到的11个组分的总抗氧化能力。结果表明,海洋胶原低聚肽具有一定的总抗氧化能力、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除能力,并且具有一定的还原能力;RP-HPLC分离纯化后,5个组分的抗氧化活性显著提高,对总肽整体的抗氧化活性起到了重要的作用,并且疏水性肽组分对抗氧化活性的贡献大于亲水性肽组分。     

鲨鱼皮明胶水解肽的制备、分离纯化与抗氧化活性研究

目的:基于鲨鱼皮明胶水解肽的抗氧化活性,制备、分离纯化高活性的抗氧化多肽。方法:分别使用5种商业蛋白酶水解鲨鱼皮明胶,测定其水解产物的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除活性以及对Fe2+诱导卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化反应的抑制作用;利用SP-Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱(HPLC)对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化。结果:酸性蛋白酶水解产物具有最佳的抗氧化活性;利用SP-Sephadex C-25、Sephadex G-50和C18-HPLC对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化,所得洗脱组分E2具有最强的清除DPPH自由基活性。经过ESI质谱分析,其多肽组分的主要分子质量为1356u。结论:本研究制备并分离纯化得到高活性的抗氧化多肽,为将来的生产应用提供理论依据。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

棉籽抗菌活性肽的分离纯化及鉴定

通过体外模拟消化系统对棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI)进行酶解,得到具有抗菌活性的酶解产物,并采用超滤(ultrafiltration,UF)、阴离子交换色谱(anion exchange chromatography,AEC)、半制备高效液相色谱(semi-preparation high performance liquid chromatography,semi-P-HPLC)分离技术对棉籽抗菌活性肽进行分离纯化,用电喷雾串联质谱(electrospray ionization-tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)鉴定棉籽抗菌肽的氨基酸序列。在抗菌活性肽分离纯化过程中,用UF对具有抗菌活性的CPI酶解产物进行分离,得到3个组分U-Ⅰ~U-Ⅲ。抗菌活性检测表明U-Ⅲ的抗菌能力最强;用AEC分离U-Ⅲ得到3个组分QF-Ⅰ~QF-Ⅲ,其中QF-Ⅱ抗菌能力最强;进一步采用semi-P-HPLC分离QF-Ⅱ得到4个组分PF-Ⅰ~PF-Ⅳ,其中PF-Ⅲ的抗菌能力最强,经HPLC检测为单一峰,ESI-MS/MS检测分析得到该肽的氨基酸序列为ISGLIYEETR(Ile-Ser-Gly-Leu-Ile-Tyr-Glu-Glu-Thr-Arg)。     

武定鸡肉中鲜味肽分离鉴定及呈味特性

利用超滤分级、凝胶过滤色谱法和反相-高效液相色谱法对武定鸡肉中鲜味肽进行分离纯化,结合感官评价追踪鲜味最强烈的组分,以纳升高效液相色谱-串联质谱联用技术与固相合成法对鲜味肽进行鉴定和合成,进一步分析鲜味肽的序列来源及其呈味特征。结果表明：从武定鸡肉中分离鉴定出8 条多肽,分子质量范围为365.20～1 735.92 Da,其中LDF、FVT和DLAGRDLTDYLMKIL这3 条肽段具有明显的鲜味活性,阈值在0.062～0.250 mg/mL之间,是武定鸡肉鲜味的关键组分。     

酶解虾副产物制备抗氧化肽的研究

以虾副产物为原料,采用α-胰凝乳蛋白酶和嗜热菌蛋白酶进行酶解制备抗氧化肽。酶解液经透析、Sephadex G-15凝胶过滤层析、离子交换色谱和反向高效液相色谱分离,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力和铁离子还原能力(FRAP)为指标进行纯化,得到了高抗氧化活性组分F1。质谱分析结果表明组分F1中有三个肽,对这三个肽进行序列合成并测定其活性,发现十肽GCKVALIVVG的活性最高,其DPPH自由基清除能力按抗坏血酸当量计(AAE)为(16.10±0.02)μmol AAE/g pro,铁离子还原能力为(245.37±0.03)μmol AAE/g pro。本实验研究制备并分离纯化得到高活性的抗氧化肽,为虾副产物的生产应用提供了理论依据。     

虾头、虾壳抗氧化肽的分离纯化及其对秀丽隐杆线虫的抗氧化作用

采用超滤、凝胶过滤色谱和制备液相色谱对南美白对虾虾头、虾壳蛋白质的酶解液进行分离纯化,以1,1-二苯基-2-苦基肼自由基清除率、还原力、氧化自由基吸收能力为指标,制备纯度较高、抗氧化活性较强的抗氧化肽,同时,采用秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）模型对其体内抗氧化活性进行评价。结果表明：酶解液经超滤分离后,分子质量为3～10?kDa组分的抗氧化活性最强;将该组分采用凝胶过滤色谱、制备液相色谱等手段分离出含有抗氧化肽的混合物（抗氧化肽纯度达到70%）。体内抗氧化活性结果显示,喂食该抗氧化肽的秀丽隐杆线虫的产卵量和热应激条件下的存活率均显著增长,寿命显著延长（P＜0.05）,且与VC相比效果无显著差异（P＞0.05）,说明本研究所获得的抗氧化肽对秀丽隐杆线虫具有和VC相当的抗氧化保护作用,具有潜在的应用价值。