Hela细胞高密度悬浮培养的研究

应用1.5L Celligen细胞培养罐,通过加大培养基的更换量,实现了Hela细胞高密度悬浮培养,细胞浓度达1.1×10~7/ml,每周可收获10~(10)以上的活细胞。     

模拟植物细胞悬浮培养体系和其两相培养体系流变特性研究

用颗粒状琼脂代替植物细胞从实验上系统研究了模拟植物细胞悬浮培养体系的流变特性。进而根据实验结果得出了模拟植物细胞悬浮培养体系的流动特性指数、稠度系数和表观粘度随植物细胞浓度的变化规律。并初步探索了加入有机溶剂后形成的模拟植物细胞两相培养体系流变特性     

生物反应器不同搅拌速度的计算流体力学模拟及对悬浮培养CHO细胞的影响

目的考察搅拌式生物反应器不同搅拌速度对悬浮培养的CHO细胞生长、代谢及促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)表达的影响。方法采用计算流体力学(computational fluid dynamics,CFD)技术对5 L生物反应器在100、200、300、400 r/min搅拌速度下的内部流场进行模拟;对培养过程中的细胞密度、细胞活率、细胞直径、pH、生化参数及FSH浓度进行检测,根据细胞比生长速率、葡萄糖比消耗速率、谷氨酰胺比消耗速率、乳酸比生成速率、氨比生成速率以及FSH浓度变化,确定不同搅拌速度对细胞生长、代谢及FSH产量的影响。结果在100、200、300、400 r/min搅拌速度下,随着搅拌速度的增加,反应器内的剪切速率逐渐增大;导致最大细胞密度逐渐降低,依次为6.22×10⁶、6.14×10⁶、5.87×10⁶、5.72×10⁶个/mL;细胞比生长速率逐渐降低,依次为0.52、0.49、0.47、0.47/d;培养前5 d,在100 r/min搅...     

紫草细胞悬浮培养的结构化动力学模型

引言 植物细胞培养技术已经历了近40年的发展,但目前对其培养动力学的数学描述还比较缺乏.基于细胞内多组分变化及其相互作用的结构模型能较精确的描述细胞的培养过程,如Bailey和Nicholson[3]提出的对数-线性模型,Frazie[2]提出的"渗漏模型",Hooker[3]提出的结构化模型等.但由于其形式复杂,不可测或待测参数太多,实际应用很少.     

剪切应力对红豆杉细胞悬浮培养的影响及CFD模拟研究

在同轴圆筒装置的均匀剪切场中研究了不同剪切应力(0.16, 0.46, 0.78Pa)对悬浮培养的南方红豆杉细胞生理的短期影响。结果表明剪切应力为0.16~0.46Pa时,有利于细胞的生长和初生代谢;剪切应力为0.46~0.78Pa时, 有利于细胞的次生代谢;另一方面利用计算流体力学(CFD)对20L生物搅拌釜(45-斜向上桨(45-PBT),桨距为(1/3)T的流场进行了三维模拟,获得搅拌釜内部的剪切场。结果表明搅拌釜内剪切应力分布极不均匀, 且主要集中在搅拌桨区和尾流区,约为主流区和挡板区值的3~5倍,有时甚至高达7倍。通过将实验结果和CFD模拟相结合,预测了20L生物搅拌釜剪切应力对南方红豆杉细胞生理的影响。表明当搅拌转速小于150 rmin-1时,搅拌釜内相应的剪切应力有利于细胞的生长和初生代谢;而当搅拌转速大于200 rmin-1时,则不宜于南方红豆杉细胞的培养。     

剪切力对植物细胞悬浮培养的影响

简单介绍了剪切力对植物细胞产生的影响,并对剪切力对植物细胞的损伤机理、研究方法以及悬浮细胞培养生物反应器设计等方面进行了评述．     

大规模植物细胞培养生物反应器

讨论了植物细胞大规模培养的基本特性。根据分析比较了在植物细胞悬浮培养中通常使用的几种生物反应器,包括摇瓶,搅拌式反应器,气升式反应器,转瓶反应器以及带挡板的转瓶反应器,指出综合性能以气升式为最佳。此外还介绍了固定化植物细胞反应器以及生物膜反应器,讨论了大规模植物细胞培养反应器的选择原则。     

红豆杉细胞反应器悬浮培养氧传质系数的研究

氧传质系数是表征反应器操作性能的重要参数,是反应器优化设计和放大的关键,植物细胞培养液中的氧传质系数与纯水或模拟溶液有很大差异,必须在实际培养过程中在线进行氧传质系数的研究。为了快速、准确地测量实际培养液的氧传质系数,基于动态法恢复通气后的溶氧质量浓度-时间数据,提出了确定氧传质系数和饱和溶氧质量浓度的新方法,进而测定了10 L通气搅拌反应器中红豆杉细胞悬浮培养过程的氧传质系数,研究了氧传质系数、细胞的摄氧率和细胞的比耗氧速率的变化规律。结果表明:通气量对氧传质系数的影响大于搅拌转速对氧传质系数的影响;随着细胞生物量增加,氧传质系数减少、摄氧率增加,比耗氧速率先增加后缓慢下降;建立了氧传质系数kLa与单位体积的功率输入N3D2和空气表观线速度vS的关联式和氧传质系数kLa与细胞生物量X的关联式。     

剪切力对南方红豆杉细胞悬浮培养的影响

考察了流体剪切力对南方红豆杉悬浮细胞线粒体活性、膜透性、培养液pH、酚积累以及氧迸发等的影响. 结果表明，指数后期或稳定前期的南方红豆杉细胞对剪切力更为敏感，细胞生物活性丧失较大，次生代谢物酚的积累更多；此外，剪切力还引起了红豆杉细胞的防御应答反应，如H+内流、酚类物质大量积累以及活性氧迸发.     

紫草细胞悬浮培养的动力学

通过对紫草细胞进行悬浮培养,测定了培养基中碳源、氮源、磷酸盐等无机元素的变化;并分析了细胞结构性组分、细胞呼吸以及次生代谢产物紫草宁的合成情况,探索研究了细胞培养的内在规律,为建立结构化动力学模型奠定了基础。     

BHK-21细胞悬浮培养狂犬病病毒(rCVS-11-dG株)工艺的建立及病毒免疫原性评价

目的 优化生物反应器悬浮批次培养狂犬病病毒(rCVS-11-dG株)工艺,制备灭活免疫原,并检测其免疫原性.方法 摇瓶培养BHK-21细胞,优化rCVS-11-dG株病毒培养温度、接种MOI及接毒时初始细胞密度等病毒培养条件,使病毒与细胞相互适应,提高病毒滴度,为生物反应器培养病毒提供参数.在5L体积的生物反应器中,低...     

硝酸银作用下南方红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇动力学研究

研究了诱导子硝酸银对红豆杉细胞培养生产紫杉醇的影响,表明１０μｍｏｌＬ＾－１的硝酸银量有利于紫杉醇的生成,并通过动力学模型对硝酸银的作用位点进行分析,确定了硝酸银在紫杉醇代谢路径中的作用位点位于ＢａｃｃａｔｉｎⅡ和紫杉醇之间。     

抗人A血型杂交瘤细胞高密度培养条件的研究

抗人 A 血型杂交瘤15B_4细胞在 CelliGen 细胞培养罐中进行连续灌注培养,细胞密度达1.6×10~7/ml。每天灌注新培养液量由1000ml 增到2300ml,第14天后又逐日减少至1000ml,死细胞数随着转速的增加和灌注量的减少而增多。血凝效价呈梯度上升,滴度达到2~(14),相当于腹水效价。培养6天 IgM 产量为0.2克/升/天,10～18天波动在1.45～1.8克/升/天。15B_4细胞代谢与葡萄糖、乳酸有关,与氨无关。CelliGen 自控效果较好,适用于杂交瘤细胞的高密度培养。搅拌速度在120～150r/min 对细胞产生的剪切力有明显地破坏作用。溶氧控制系统有待改进。     

发状念珠藻细胞液体悬浮培养的研究

为解决天然发状念珠藻生长缓慢的问题,从天然藻体中分离出细胞对其进行液体悬浮培养。结果表明,液体悬浮培养可以显著提高发状念珠藻细胞的生长速度,同时提高发状念珠藻胞外多糖的产量。采用BG-11培养基,添加2.5 g/L硝酸钠,培养温度25℃,光照强度40μmol/(m2.s),转速130 r/min,培养20 d细胞干质量浓度达到1.05 g/L,胞外多糖产量89.9 mg/L。培养发状念珠藻细胞的基本成分和细胞培养液的HPLC指纹图谱分析表明其生化组成和多糖的合成与天然发状念珠藻相似。与其他人工培养方法相比,液体悬浮培养更适合大规模工业化生产。     

有机溶剂原位萃取法提高悬浮培养中国红豆杉细胞紫杉醇产量

The production of paclitaxel from suspension culture of Taxus chinensis var,mairei was improved by in situ extraction with organic solvents to avoid feedback repression and product degradation.Oleic acid and dibutyl phthalate were proved to be suitable solvents .The optimal volumetric percentage of organic solvents in the culture medium was found to be around 8%,and the favorable time for their introduction was at the exponential phase of cell growth,Paclitaxel production with the in situ extraction was ca 3-fold of that without extraction.     

电刺激对红豆杉悬浮培养细胞产紫杉醇的影响

以红豆杉悬浮培养细胞为材料产紫杉醇,在细胞生长的不同时期分别用脉冲电刺激及微交流电刺激处理。结果表明,两种电刺激均不同程度促进了红豆杉悬浮培养细胞的生长、紫杉醇的产生,其中脉冲电刺激效果优于微交流电刺激。最佳作用时间是在红豆杉细胞生长的衰亡期,微交流电刺激的紫杉醇含量较对照提高3倍多,脉冲电刺激的紫杉醇含量约为对照的7~9倍,最高达到12.24 mg.L-1。脉冲电刺激可有效提高紫杉醇的胞外释放率,达对照的4~5倍。     

半连续悬浮细胞及固定化细胞生产紫草素的研究

采用半连续悬浮细胞及固定化细胞生产紫草素,结果表明:前者可明显提高单位细胞的紫草素产量,但在15天后其产量明显下降;后者可在75天内连续稳定地生产并分泌紫草素。采用六种化学试剂,以不同浓度处理固定化细胞,发现只要选择合适的试利与浓度即可改变细胞的透性而不影响其活性,并且产生的紫草素可不断地向胞外分泌,产量可提高2.4倍。应用紫外——可见全波长扫描、TLC 和 HPLC 分析,发现固定化细胞生产的紫草素与天然的紫草素成分基本相同,只是各单体成分的相对含量有一定的差异。     

长春花植物细胞团的粒径分布及其模糊数学模型

对长春花植物细胞团前10代粒径分布进行了研究,其平均粒径和分布的分散程度经历由大到小,再由小到大,最后达较稳定值的过程.针对模糊群子模型进行参数估计,拟合结果表明,植物细胞团粒径分布遵从能反映分散与成团矛盾作用的模糊群子模型.     

寡聚糖诱导悬浮培养红豆杉细胞生理态势的改变

运用顺磁共振、电镜、能谱等手段研究了寡聚糖对红豆杉细胞氧化还原生理态势的影响 .结果表明 ,诱导前红豆杉细胞处于相对稳定的生长态势 ,细胞完整 ,细胞器发达 ;氧化还原电势较低 ,活性氧相关酶系统相对稳定 ,细胞初生代谢旺盛 ,紫杉醇合成速率很低 .诱导后红豆杉细胞向产物合成态势转移 ,SOD酶活性迅速提高 ,CAT和POD酶活被强烈抑制 ;细胞出现活性氧迸发 ,4h达最大值 ;细胞的氧化还原电势增高 ,细胞膜上离子通道被激活 ,H⁺ 和Ca^{2 +} 内流 ,Cl^-外流 ;液胞内出现大量含Ca^{2 +} 离子的高电子致密区并呈规律性变化 ,培养环境碱化 ;细胞生长被抑制 ,紫杉醇合成速率升高 ,其产量提高了 5.5倍 ,达 76.1mg·L^-1.     

生物反应器高密度无血清培养全悬浮MDCK细胞和流感病毒工艺的建立

目的 优化生物反应器高密度无血清培养全悬浮MDCK细胞和流感病毒的条件,并放大培养规模,建立MDCK细胞和4种型别流感病毒的培养工艺。方法 分别在不同溶氧（DO）、pH、转速、接种密度条件下培养MDCK细胞,每24 h取样计数,优化细胞培养条件后,放大至50 L生物反应器,并接种4种型别流感病毒（H1N1:A/California/7/2009、H3N2:A/Texas/20/2012、BV:B/Brisbane/60/2008、BY:B/Phuket/3073/2013）,接毒条件为MOI=10-4,胰酶终浓度为15μg/mL,细胞密度为（1.8～2.2）×106个/mL,病毒维持液为DMEM,培养温度为甲型34.5℃、乙型33.5℃,检测病毒血凝效价、病毒滴度（CCID50）和血凝素（hemagglutinin,HA）含量。结果 在5 L及50 L生物反应器中培养MDCK细胞,活细胞密度均可在72 h后达到8.0×106个/mL,活率在95%以上;H1N1、H3N2、BV、BY的血凝效价分别为7、11、9、9 log2(HAU/25μL),CCID50均达6.5以上,HA含量分别为...