增生性烧伤瘢痕成纤维细胞的超微结构研究

对16例增生性烧伤瘢痕和5例正常皮肤成纤维细胞进行了透射电镜的观察分析。结果显示,它们的超微结构明显不同。正常皮肤的成纤维细胞多数处于相对静止状态,增生性烧伤瘢痕成纤维细胞则大部分呈活跃状态,可分为4种与其功能相适应的超微结构形态,包括迁移、分裂、合成和收缩表型。研究增生性烧伤瘢痕成纤维细胞的超微结构对于探讨瘢痕增生的机理、鉴别诊断、预后和治疗具有重要意义。     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养及生物学行为研究

目的:建立可靠的人瘢痕疙瘩成纤维细胞培养方法,为瘢痕疙瘩体外研究提供平台.方法:采用组织块贴壁法进行瘢痕疙瘩成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基,37℃,5%CO2,饱和湿度下培养;描述其生长曲线、分裂指数、形态及波形蛋白表达.结果:瘢痕疙瘩成纤维细胞培养成功率43%(6/14),48～65天可传第一代,以后每5～10天可传一代,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性.结论:培养出的瘢痕疙瘩成纤维细胞可用作体外实验研究.     

瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的研究进展

瘢痕疙瘩确切的发病机制尚不清楚,但大量研究发现瘢痕疙瘩的形成与成纤维细胞的凋亡基因变化有着密切的关系,利用光化学基因转移技术促进成纤维细胞凋亡有望成为解决这一难题的新途径。     

青紫心甘薯黄酮减轻60Co辐射诱导的小鼠胸腺淋巴细胞损伤的超微结构研究

目的:观察青紫心甘薯黄酮对60Co辐射损伤体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞超微结构的影响.方法:建立单次60Co辐射损伤体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞的病理模型,应用透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果:在强度为3Gy 60Co辐射情况下,小鼠胸腺淋巴细胞超微结构在3 h后即出现核膜消失、核异染色质浓缩及边集、核碎裂、胞内空泡形成、线粒体嵴断裂、基质空泡化、粗面内质网扩张等典型细胞凋亡改变.2.500 g/L青紫心甘薯黄酮能抑制60Co辐射所致淋巴细胞的损伤,细胞的正常超微结构保存良好.结论:青紫心甘薯黄酮可有效地保护小鼠胸腺淋巴细胞对抗60Co的辐射损伤.     

兔声带成纤维细胞的体外分离培养、鉴定与标记

目的探讨体外培养兔声带成纤维细胞(Vocal Fold Fibroblasts,VFFs)的培养及标记方法。方法消化培养法分离、培养兔声带成纤维细胞,倒置显微镜观察其生长和形态特征,并传代、鉴定。增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体(Ad-EGFP)标记体外培养的VFFs,取12只新西兰兔,以1×100万/0.1ml分别注入损伤模型左侧声带,观察注入VFFs的生长情况。结果兔声带成纤维细胞可以在体外原代和传代培养,具有成纤维细胞的典型形态。波形蛋白免疫荧光染色阳性,Ad-EFGP可以成功转染VFFs。将VFFs诸如声带后15d,组织学切片未发现成活细胞。结论用消化培养法可成功获得VFFs,Ad-EGFP是一种理想的示踪标记物。     

增强型绿色荧光蛋白基因转染对原代培养的人成纤维细胞细胞周期的影响

目的:观察转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因后对原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的变化,建立原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞的示踪方法.方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,采用电转仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用荧光显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞仪检测其转染效率和细胞周期的变化.结果:增强型绿色荧光蛋白基因在转染24h后得到了明显表达,48h后流式细胞仪检测其表达率为32.6%,细胞周期无明显的变化,且未影响成纤维细胞的贴壁过程.结论:经pEGFP-N1质粒转染的原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞仍能在体外存活,对成纤维细胞的生长没有明显的影响.pEGFP-N1是转染原代培养的人成纤维细胞较为理想的瞬时表达载体,是研究成纤维细胞生物学行为的良好示踪剂.     

实验动物瘢痕模型经90Sr照射后超微结构的变化

目的观察实验动物微型猪瘢痕模型经90Sr照射后的超微结构改变,从形态学角度探讨90Sr防治瘢痕的作用机制以及最有效治疗时间和剂量,为临床应用提供形态学基础.方法采用西双版纳微型猪,于面部、背部两侧制作1cm×2cm、深达皮下组织的创口数个,随机分为实验组和对照组.实验组于术后1周用90Sr敷贴器照射,剂量分别为200、400、600、800、1000、2000、4000cGy.然后在照射后1,3,7,11周(即术后2,4,8,12周),分别切取对照组和实验组的瘢痕组织,进行透射电镜(TEM)观察.结果小、中剂量(200～600cGy)90Sr显著促进伤口毛细血管和成纤维细胞增生,成纤维细胞表现为数量多,体积大、粗面内质网增多并扩张,胶原纤维排列致密;大剂量(800～2000cGy)90Sr照射能显著抑制成纤维细胞增生,表现为数量少,体积小,粗面内质网欠丰富,核异染色质丰富,胶原纤维排列稀疏.结论小中剂量90Sr照射能促进成纤维细胞合成胶原纤维,从而促进伤口愈合,临床上可在伤后早期进行照射,剂量为200～600cGy;大剂量90Sr照射可抑制成纤维细胞合成胶原纤维的能力.为防治瘢痕过度增生,临床上可在伤口愈合后进行照射,剂量为1000～2000cGy.     

氦氖激光对人胚皮肤成纤维细胞诱发转化的研究

本文首次报道用35mW氦氖激光辐照体外培养的人胚皮肤成纤维细胞,间日一次,每次10分钟,共15次,诱发了与致癌剂甲基硝基亚硝基胍相似的形态学转化。提示氦氖激光对人的体细胞可能具有潜在致癌性。     

0.1 THz辐照对成纤维细胞迁移及细胞骨架的影响

近年来太赫兹技术的发展和广泛应用使得太赫兹的生物效应引起了人们的广泛关注。研究连续波0.1 THz对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3细胞迁移及细胞骨架的影响。采用划痕实验研究0.1 THz辐照对NIH3T3细胞迁移能力的影响,通过荧光染色的方法观察细胞骨架F-actin的形态,通过细胞免疫荧光染色方法检测细胞黏附相关蛋白Paxillin和E-cad-herin的表达水平。划痕实验结果表明,0.1 THz辐照能显著促进NIH3T3细胞迁移,增加细胞增值率;荧光染色结果表明,0.1 THz辐照能够改变NIH3T3细胞F-actin的形态,发生细胞收缩和变形;细胞免疫荧光染色发现,0.1 THz辐照显著降低细胞骨架相关蛋白Paxillin和E-cadherin的表达水平。0.1 THz辐照能够改变成纤维细胞NIH3T3细胞黏附状态,促进细胞迁移及增殖。     

电穿孔法转染原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的条件优化

目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等.方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,选择不同的电压梯度、脉冲长度及DNA剂量,采用电转仪将pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,用荧光显微镜观察转染后不同时间pEGFP-N1瞬时表达情况及细胞存活情况,流式细胞仪检测其转染效率.结果:在电压为250v、脉冲数1、脉冲长度15μs、DNA质粒6μg时,电穿孔法将pEGFP-N1质粒导入瘢痕疙瘩成纤维细胞转染率最高,细胞存活率最高,转染后24h明显表达,48h后表达最强.结论:在适当的电压、脉冲长度下,选择适当的DNA用量,在转染后一定的时间范围内,电穿孔法转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少.电穿孔法是研究原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为较为理想的转染方法.     

锌减轻顺铂诱发肝损伤的超微结构研究

本实验用大鼠对顺铂诱发的肝素性作用及锌对肝细胞是否有保护舴作用进行了实验超微病理学研究。结果显示单纯给大鼠腹腔内注射顺铂7mg/kg，可致肝细胞的严重损伤，但加用醋酸锌后，可明显减轻由顺铂诱发的损伤作用。表明锌能有效地保护肝细胞，是肝细胞很好的保护剂。