sol-gel法固定化漆酶及其性质

采用sol-gel法固定化漆酶,最佳固定化条件为:聚乙二醇分子量PEG600;聚乙二醇添加量1.5%;酶液浓度15mg/mL;水/前驱体质量比1:6;缓冲液pH值4.5。固定化漆酶活性保持在游离漆酶的50%以上,最适反应温度为60℃,最适pH值为pH4.5。同时,热稳定性、酸碱稳定性和贮存稳定性都有明显的提高。当以ABTS为底物时,固定化漆酶的K_m值(122.8μmol/L)比游离漆酶的K_m值(32.9μmol/L)高,与底物的亲和力有所降低。     

转谷氨酰胺酶的固定化及其酶学性质的研究

转谷氨酰胺酶（TGase;EC2．3．2．13;全称为蛋白质-谷氨酰胺γ-谷氨酰胺基转移酶）是一种能催化多肽或蛋白质的谷氨酰胺残基的γ-羟胺基团（酰基的供体）与许多伯胺化合物（酰基受体）之间的酰基转移反应的酶。     

MTG酶催化羊毛固定化溶菌酶的酶学性质及抗菌性能

利用新型的生物催化剂微生物谷氨酰胺转胺酶（MTG）催化溶菌酶在羊毛织物上的固定化。采用SDS-PAGE法探讨了溶菌酶作为MTG催化底物的可行性以及固定化溶菌酶的酶学性质及抗菌性能。研究结果表明,羊毛织物经过高锰酸钾预处理后可以实现溶菌酶的固定化。固定化酶的pH值稳定性和温度稳定性优于游离酶;与物理吸附法相比,MTG催化法可赋予固定化溶菌酶的羊毛织物更好的耐水洗性和操作稳定性;此外,固定化酶的低温（4 ℃）干储藏稳定性良好,30天内酶活仍维持在80%以上。抗菌测试结果表明,MTG催化法固定化溶菌酶的羊毛织物对金黄色葡萄球菌的抑菌率达73.23%,抗菌效果良好。     

固定化L-天门冬酰胺酶的性质及其填充床反应器的研究

利用海藻酸钙包埋、戊二醛交联的方法对L-天门冬酰胺酶进行固定化。研究了固定化L-天门冬酰胺酶的最适pH、最适温度、米氏常数、半衰期等酶学性质,并考察了影响固定化酶柱式填充床反应器转化率的因素。结果表明:固定化酶最适pH值为8.5,最适温度为67°C,固定化酶的米氏常数Km增大,固定化酶半衰期随着温度的增加而逐渐减小;温度、反应柱内径、底物溶液浓度、流速等因素对填充床反应器转化率均有显著影响。     

转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上的固定化

研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上的化学固定化的影响因素,确定了最佳固定化工艺条件,即为:第一步光照反应6 min,单体质量分数为20%,第二步光照时间25 min,接枝率最高可达35.2%;己二胺质量分数为25%,胺烷基化时间150 min,胺烷基化温度60℃;戊二醛质量分数3%,戊二醛作用时间45 min;酶液浓度10 mg/mL,固定化时间20 h,固定化温度4℃,固定化酶膜的活力最高可达游离酶的45%.并研究了温度、pH、金属离子对固定化酶膜的酶学性质的影响,其贮存性能和操作稳定性也做了初步研究.     

天冬氨酸转氨酶及其酶学性质

从大肠杆菌中提取了天冬氨酸转氨酶 ,并对其酶学性质进行了系统的研究 ,得出该酶的最适反应温度为37℃、最佳反应 p H范围为 8.0～ 8.5、最佳氨基供体为 L -天冬氨酸、转化反应动力学常数 Km,同时对影响该酶作用的其它因素 (辅酶、金属离子 )作了研究。利用几种α-酮酸 ,考察了该酶在转化制备相应的芳香族 L -氨基酸过程中的作用。为该酶的工业化应用提供了理论上的依据     

灰树花漆酶的酶学性质及其脱色作用研究

通过对液体发酵灰树花漆酶的酶活、Km常数、温度和p H值的测定,探讨了Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶酶活的影响,观察了漆酶对5种染料的脱色作用效果。结果表明:灰树花发酵液中漆酶氧化ABTS的Km为1.35×10-5mol·L-1,在p H值2~6的范围内均表现酶活,最适p H值为3.0,在25~70℃温度时范围内均有酶活,在50~55℃时酶活性最高。Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶的活性均有抑制作用,Ca2+离子的抑制作用较弱。灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿、甲基蓝和亚甲基蓝染料的脱色率分别为85.77%,81.10%,72.68%,22.02%和4.22%。介体ABTS对漆酶处理甲基蓝的脱色有促进效果,而对亚甲基蓝、溴甲酚绿和甲基红的脱色促进效果较弱,对甲基橙的脱色无促进作用。结论:本研究中灰树花漆酶最适p H值为3.0,在50~55℃时酶活性最高;灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿染料的脱色效果理想。     

固定化细胞延胡索酸酶性质的研究

探讨了海灌酸钠固定化普通变形杆菌延胡索酸酶的性质。研究结果表明：酶催化延胡索酸为Ｌ－苹果酸的最适温度为４０℃,最适ｐＨ为７．０。在温度低于４０℃和ｐＨ５。０～８．０的条件下,固定化细胞酶活力稳定性好,显示其热稳定性和ｐＨ稳定性明显优于游离细胞。Ｃｙｓ对固定化细胞酶活力无影响,ＧＳＨ对前激活作用。     

AS1.398中性蛋白酶的固定化研究

利用壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，对AS1．398中性蛋白酶进行了固定化研究，固定化反应的最佳条件是采用1％的戊二醛浓度，壳聚糖和戊二醛的交联反应时间为4h，加入酶固定化反应12h，固定化酶的最适温度35℃，最适pH值8．0。得到的固定化酶的活力回收平均为82．5％，固定化酶的稳定性能好于游离酶。     

超氧化物歧化酶的固定及其活性检测

目的探讨超氧化物歧化酶(SOD)的固定及固定化SOD活性的检测方法。方法以淀粉为载体,对SOD进行固定,采用改进的邻苯三酚测活法(以Vc为终止剂),并结合过滤或离心的方法去除沉淀,测定固定化SOD的活性。比较过滤法与离心法,及过滤法与经典邻苯三酚法测定酶活性的差异,并检测过滤法的线性、精密性和准确性。结果过滤法检测SOD活性的精密性较离心法高,与经典邻苯三酚法检测结果差异无统计学意义,在SOD浓度为6~60μg/ml范围内,SOD活性值与浓度线性关系良好(r=0.999 5),精密性及准确性良好。固定化SOD的比活性为1 730.07 U/g,酶活回收率为53.3%。结论以淀粉为载体固定化SOD效果好,经改进的邻苯三酚法可用于固定化SOD的活性测定。     

稳态荧光光谱法分析超氧化物岐化酶溶液的稳定性

目的考察超氧化物岐化酶(SOD)溶液在不同影响因素下的活性及构象变化。方法通过邻苯三酚自氧化速率法测定SOD溶液的活性,利用稳态荧光光谱法分析在不同影响因素(pH值、超声、变性剂盐酸胍)下SOD三、四级结构的变化与荧光光谱特征变化的关系。结果溶液pH值降低,SOD稳定性增加;在pH2.2～pH7.0的范围内,pH值与SOD比活力呈线性相关;随着pH值的降低,普通荧光最大发射波长由336nm蓝移至325nm。超声次数的增加使同步光谱谱带蓝移,SOD活性下降。随着盐酸胍浓度的升高,SOD活性逐渐下降;在盐酸胍浓度达2.1mol/L时,SOD最大荧光发射峰蓝移至312nm;经盐酸胍变性后,酶的荧光强度比天然态酶有所增加。结论采用稳态荧光光谱法可分析SOD溶液的稳定性。     

壳聚糖涂层亲和层析在超氧化物歧化酶纯化中的应用

1前言亲和层析是蛋白质纯化中分离效率最高的技术之一。亲和配基有多种形式如单机、底物、活性染料、金属离子等。固定化金属离子亲和层析（Immobilizedmetalionaffinitychromatog’“PhyIMAC）是Porath在1975年首先研究的一种高效分离技术［‘3。IMAC和普通的亲和层析相比,具有一些优点,如亲和配基Cu’”、Zn’“价廉;可在高盐浓度下操作;稳定,容易再生。Sulkowke曾用IMAC技术分离纯化干扰素,一步可纯化产品几十倍【“,收率达90％。目前IMAC介质制备是先在软基质SePharose或SePhadex上用化学交联法弓卜螫合剂IDA（Imino…     

高效液相色谱法纯化超氧化物歧化酶的新工艺

建立了丙酮沉淀-高效液相色谱法制取高纯度超氧化物歧化酶(SOD)的新工艺.利用此法制得电泳级的SOD,总活性回收率为86.0%,纯化倍数提高52倍.小规模的生产实验表明该法具有工艺简单、成本低、效率高、生产周期短等优点.     

大蒜中SOD的提取研究

对从大蒜中提取超氧化物歧化酶（SOD）进行了探索性实验.通过不同的方法提取、纯化SOD,从而找到活性高、纯化倍数高的较好方法.     

超氧化物歧化酶缓释片的制备及体外释放度检测

目的制备超氧化物歧化酶缓释片,并研究其体外释放。方法采用邻苯三酚自氧化法检测超氧化物歧化酶的释放度,并进行影响因素研究。结果超氧化物歧化酶缓释片体外释放曲线符合一级动力学方程,骨架材料的种类、用量、粒度及压片压力对药物释放有明显影响。结论制备的超氧化物歧化酶缓释片具有明显缓释作用。     

石榴叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

利用有机溶剂分级沉淀法从石榴叶中分离出超氧化歧化酶(SOD),研究了分离纯化的最佳工艺条件,并对其性质进行了探讨。结果表明,当石榴叶(g)与磷酸缓冲液(mL)之比为1∶2,磷酸缓冲液pH值为7.6,提取时间为1.5 h。氯仿-乙醇混合物量为提取液的0.25倍,丙酮量为粗酶液的1倍时,分离效果最佳。温度0~60℃,pH 4~9范围内酶的活性稳定。过氧化氢和乙醇-氯仿试验表明,该酶属Cu.Zn-SOD。研究结果为SOD提供了新的酶源。     

海藻糖对重组人铜锌SOD酶的保护作用

目的　考察不同工艺处理过程中不同糖类对rhCuZn SOD活性的影响。方法　酶液与不同保护介质均匀混合后 ,研究冷藏、反复冻融、真空干燥、冷冻干燥和保存等工艺过程前后酶活性的变化。结果　与其他糖类相比 ,海藻糖具有最好的抗冷冻、抗脱水能力。保护作用与工艺过程具有一定的相关性。海藻糖的最适添加量为 5 %～ 10 % (w/v)。结论　为设计最佳的生物活性保护体系提供依据。     

细胞外超氧化物歧化酶基因转移及活性调控的研究进展

超氧化物(O2.-)与许多病理过程有关,通过细胞外超氧化物歧化酶(ecSOD)基因转移除去细胞外的超氧化物,对于治疗因氧化应激反应过强而引发的血管疾病具有广阔的前景。最近的研究已揭示了ecSOD的表达调控以及肝素取代等方面的相关机制,为探讨ecSOD如何与其他因素协同作用,从而调节血管功能的机理提供了新的思路。本文对ecSOD基因转移及活性调控的最新研究进展作一综述。