米曲霉KFRI 888产中性蛋白酶、a-淀粉酶酶学性质的研究

通过对米曲霉KFRI888产中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶学特性进行了研究,实验发现,当温度高于40℃时,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着温度的升高而下降。而中性蛋白酶的最适作用pH为7.0～8.0,淀粉酶的最适作用pH为6.0～7.0,中性蛋白酶、a-淀粉酶的酶活都随着NaCl浓度的升高而下降,但a-淀粉酶耐盐性能比中性蛋白酶强。金属离子Ca2+、K+、Mg2+对a-淀粉酶有激活作用,且基本不影响蛋白酶的酶活。      

米曲霉40188产中性蛋白酶、α-淀粉酶特性的研究

通过对米曲霉40188产酶特征及中性蛋白酶及α-淀粉酶酶学特征的研究,得出米曲霉40188制曲最佳时间为50～72 h,中性蛋白酶和α-淀粉酶酶活在40℃稳定,随着温度升高酶活降低,但α-淀粉酶的热稳定性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶的最适pH为7～8,α-淀粉酶的最适pH为6～8,α-淀粉酶的耐盐性较中性蛋白酶强,中性蛋白酶酶活随着盐浓度的增加呈下降趋势。     

米曲霉产中性蛋白酶条件的优化

以豆瓣酱中分离的米曲霉M1为出发菌株,研究了该米曲霉产蛋白酶的分布及最佳培养温度、时间、pH值等,优化了米曲霉最佳培养基的组成.结果表明,米曲霉产中性蛋白酶的能力最强.产中性蛋白酶适宜的培养条件为:麸皮∶水=1∶1 (w/w),最佳培养温度为30℃,培养时间为72h.培养基的组成为:酵母粉添加量2.0％,蛋白胨添加量0.2％,硝酸钾添加量0.1％,麦芽糖添加量0.1％,葡萄糖添加量0.1％,硫酸铵添加量2.0％.在此条件下培养,最高酶活达到12113.85U/g干基,比优化前提高22.98％.     

酿造酱油米曲霉产中性蛋白酶提取与酶学性质研究

对米曲霉菌种F-81所产中性蛋白酶的提取及部分性质进行了研究.结果表明硫酸铵分级沉淀的饱和浓度范围为40%～80%;该中性蛋白酶的最适作用温度为 60 ℃,最适pH 值为 7.0.40 ℃下酶稳定性较好,60℃下处理 20 min,粗酶中几乎检测不到酶活力;中性蛋白酶pH 稳定范围为 6.0～8.0.Km值为2.84 mg/mL;最大反应速度Vmax为0.32 mg/(min·mL).Mg2 对酶活有激活作用,Cu2 、Fe3 、Zn2 、Mn2 不同程度抑制酶活性,其中Cu2 、Fe3 强烈抑制酶活性.     

高产蛋白酶和淀粉酶米曲霉菌株的选育

从J2、M2和Q2三株米曲霉菌中选择出总酶活力最高的J2作为出发菌株,通过紫外诱变后,得到突变菌株Y3,其酸性蛋白酶活力由出发菌株的313 U/g提高至986 U/g,提高了215％,碱性蛋白酶活力由出发菌株的6936 U/g提高至10385 U/g,提高了49.7％,中性蛋白酶活力由出发菌株的5675 U/g提高至9034 U/g,提高了59.2％,且淀粉酶活力也由出发菌株的284 U/g提高至412U/g,提高了45.1％.经传代实验表明,突变菌株Y3的遗传特性稳定.     

米曲霉(Aspergillus oryzae FAFU)淀粉酶的分离纯化及其酶学性质研究

从米曲霉(Aspergillus oryzae FAFU)发酵产物中提取淀粉酶,通过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶柱层析等纯化步骤,回收活性组分,结合十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,共分离纯化出3种酶:酶Ⅰ、酶Ⅱ、酶Ⅲ。通过酶解淀粉实验,酶解产物经薄层层析(TLC)分析,鉴定出酶Ⅰ、酶Ⅱ为液化酶,酶Ⅲ为糖化酶,经SDS-PAGE电泳确定分子量大小分别为:48.6、49.7、93.5 k Da。对酶Ⅰ、酶Ⅱ的酶学性质进行初步的探究:酶Ⅰ的最适反应温度为50℃,温度在50℃以下稳定性好,55℃的半衰期是40 min,最适反应p H为6.0,在p H7.2~9.6范围内稳定性好;酶Ⅱ的最适反应温度为50℃,温度在45℃以下稳定性好,50℃的半衰期是30 min,最适反应p H为6.6,在p H8.6~10.0范围内稳定性好。     

米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

米曲霉M3中性蛋白酶的提取及酶学特性研究

采用硫酸铵沉降法分离纯化米曲霉M3所产中性蛋白酶，并对其酶学性质进行了研究。结果表明：用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达159781．1μ／g；该酶的最适反应温度为50℃，最适作用pH值为7．5；该酶在30～40℃时具有良好的热稳定性，在pH值6．5—7．5的条件下酶是稳定的；NH4^1 ，K^1 对该蛋白酶有明显的激活作用，Fe^3 则对其表现出强烈的抑制作用。     

米曲霉高产生淀粉酶菌株的诱变选育

以米曲霉y18为出发菌株,通过紫外诱变(UV)和硫酸二乙酯(DES)2次诱变,获得产生淀粉酶活力酶较高的菌株y18-U-36-D-40,酶活达到434.5U/mL,比出发菌株提高153.35%,菌株经过7次传代,酶活稳定。     

米曲霉固态发酵麻疯树籽饼产中性蛋白酶条件的研究

以实验室筛选出的米曲霉(Aspergillus oryzae)Asp-1为菌种,麻疯树籽饼为发酵主料,采用固态发酵法生产中性蛋白酶.考察了固态发酵培养基液固比、初始pH、接种量等发酵条件,以及麻疯树籽饼中添加麸皮、碳源、氮源对该菌株产酶能力的影响.经单因素和正交实验获得最佳发酵条件为:培养基液固比1:1,初始pH 6,接种量每10 g培养基含有1×108个孢子,培养基中麸皮添加量10%、葡萄糖添加量0.5%、蛋白胨添加量1%.最佳条件下发酵2 d酶活可达3 759.8 U/g.     

米曲霉今野菌株所产α-淀粉酶性质的研究

采用硫酸铵盐析 ,再透析提纯得到米曲霉今野菌株的α -淀粉酶 ;该酶能耐受 5 0～ 65℃的高温 ,在 65℃处理 2小时后剩余酶活力为 85 % ;采用正交实验得其在反应过程中所受因素影响大小为酶液浓度 >底物浓度 >pH值 >温度 ,酶反应的最适pH为 6 0 ,最适温度为 60℃ ;以可溶性淀粉为底物时 ,该α -淀粉酶的Km值为 5 8× 10 - 1mol/L ;当NaCl浓度超过 30 %时 ,对酶活有明显的抑制作用 ,剩余酶活力只有 15 %。当NaCl浓度在 18%以下时 ,剩余酶活力在 90 %以上     

Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮

介绍了Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮的具体做法。采用麸皮保藏法可以使Xi-3米曲霉保藏18年之久且菌种优良性状不变；行之有效的复壮措施，提高了保藏菌株的优良性状和生产性能，为种质资源的可持续发展作出了贡献。     

不同酱油米曲霉制曲过程中的酶活变化分析

米曲霉是酱油酿造过程中的关键微生物,其蛋白酶活的高低及其它酶系的健全程度直接影响到酱油产率及品质的高低。研究对国内外三种优良酱油生产米曲霉菌株的制曲性能进行研究,分析了中性蛋白酶、酸性蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和果胶酶等重要酶系的酶活力变化趋势。结果表明:沪酿3.042的中性蛋白酶活高于RB-A,RB-C;而RB-C在其它酶系方面则具有更高的活力。其中,沪酿3.042、米曲霉RB-A在制曲39h时酶活力最高,米曲霉RB-C在制曲42h时酶活力最高。研究对米曲霉制曲时间的控制具有一定的指导意义。     

米曲霉1228产α-淀粉酶特性的研究

对米曲霉1228产α-淀粉酶的特性及部分酶学性质进行了研究.结果表明,在发酵培养基中豆粕含量20%、NaCl浓度2%、初始pH6.6的条件下,采取3%的接种量,31 ℃培养108 h,此时的酶活最大.该酶的最适作用温度为55 ℃,最适pH为5.0,Ca2+对酶有激活作用,Fe2+、Fe3+、Mn2+、Ba2+和Cu2+对其有不同程度的抑制.     

产中性蛋白酶种曲培养基的优化及酶学特性研究

以中性蛋白酶活力为检验指标,采用响应面法对米曲霉产中性蛋白酶的种曲培养基进行优化,确定其最佳配方组成为：面粉用量2．24g,花生粕用量8．46g,氯化钙用量0．028g,种曲中性蛋白酶活力高达15559．40U／g。经研究纯化后中性蛋白酶酶学特性,发现中性蛋白酶的最适pH为7．0,在pH5．0-7．0范围内具有良好的稳定性;最适作用温度为50℃,在40-55℃条件下能保持较高的酶活力;试验金属离子对蛋白酶没有显著的激活作用,Ba^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋和Cu^2＋具有显著的抑制作用。     

一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术,从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶,经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13,属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50?℃;最适pH值为6.5;稳定温度为40?℃;稳定pH值为7.0;Mn2＋促进蛋白酶活力,Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋、Ca2＋、K＋、Na＋抑制蛋白酶活力,以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响;米氏常数Km为2.43?g/L,最大反应速率Vm为103.09?mg/（L·min）。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl质量浓度条件下,蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力,因此具有潜在的工业应用价值。     

He-Ne激光和NTG复合诱变米曲霉提高其蛋白酶和淀粉酶酶活力

以分离自豆酱中的米曲霉(Aspergillus oryzae)HDF-C14为出发菌株,采用He-Ne激光和亚硝基胍复合诱变的方法获得高产蛋白酶和淀粉酶的突变株HDF-C14-HN5,并将其应用到豆酱发酵中,测定酱曲发酵时蛋白酶和淀粉酶的酶活力。所得成曲中干基蛋白酶酶活力最高可达1572.64U/g,淀粉酶酶活力最高可达2815.23U/g。此生产性发酵实验可以为该菌株投入工业化生产提供技术支撑。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

酱油发酵用2种米曲霉中性蛋白酶的酶学性质比较

米曲霉产蛋白酶的性质对酱油品质有重要的影响。研究以一株产中性蛋白酶的米曲霉CICIM F0899为研究对象,首先对其进行扫描电镜观察,与米曲霉沪酿3.042比较表明F0899的分生孢子头较小,分生孢子大于沪酿3.042。其次对F0899和沪酿3.042产蛋白酶酶学性质研究表明F0899产蛋白酶在20～40℃保持稳定,最适反应温度为60℃,在pH 6.0～8.0时保持稳定,最适反应pH为8.0,在盐浓度为18%的条件下,仍能保留20%的酶活,可达沪酿3.042的2.2倍,Ag+对F0899有严重的抑制作用,Fe3+没有明显的抑制。因此,米曲霉CICIM F0899产的蛋白酶在耐高温、耐低pH和耐高盐的性能优于沪酿3.042。     

白曲霉产中温酸性α-淀粉酶组成成分分析及酶学性质的研究

对高产白曲霉菌株产生中温酸性α-淀粉酶进行了酶学性质研究,试验表明该酶最适作用温度为60℃,最适作用pH为5.0,该酶在pH4.5～7.0范围内酶活较稳定,金属离子对此酶几乎没有激活作用,Hg＋、Fe3＋对酸性α-淀粉酶有明显的抑制作用。酸性α-淀粉酶的Vmax为311.53mg/（u·min）,Km为2.18mg/（u·min）。该酶具有较好的耐热性和耐酸性,能在同一pH条件下进行淀粉的液化和糖化作用,具有较好的应用前景。