脱硫枯草芽孢杆菌的筛选

为了有效脱除石油及其产品中的有机硫,从天津大港油田被原油污染的土壤中驯化、分离出对二苯并噻吩具有一定脱除能力的枯草芽孢杆菌。该菌种可生长的pH范围是3－11,NaCl浓度27 g/L时可生长;在30℃,pH为7,NaCl浓度为10 g/L的条件下,生长状况较好。由油品的循环脱硫实验可知,该脱硫菌种可脱除催化裂化柴油中71.56%的硫,原油中67.22%的硫,可以直接应用于油品脱硫,有一定的实际应用价值。     

枯草芽孢杆菌B.subtilisML中性蛋白酶基因的克隆及鉴定

以蛋白酶高产菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＭＬ为供体菌，提取其染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全酶切后，插入枯草杆菌载体ｐＮＱ１２２的相同酶切位点，连接后转化中性碱性蛋白酶基因双缺陷型菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。从含有氯霉素的酪蛋白平板上获得了２０个具有蛋白酶活性的克隆。     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

枯草芽孢杆菌产木聚糖酶发酵条件的研究

通过单因素和正交试验,对芽胞杆菌产木聚糖酶的发酵条件进行了研究.结果显示最佳产酶条件是:2%麸皮、0.5%(NH4)2HPO40、.1%K2HPO4、0.02%MgSO4.2H2O、0.2%吐温80、1mmol/L微量元素(Fe2 ,Zn2 )、pH9.0、35℃和振荡培养48 h.其木聚糖酶活力可达到2.67 IU/mL.     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

抗黄瓜灰霉病的枯草芽孢杆菌筛选及其抑菌活性的初步研究

结合涂布平板法和温室盆栽植株法,测定了41株枯草芽孢杆菌发酵液对灰霉病病原菌及黄瓜灰霉病的抑制效果,以此筛选出针对灰霉病的生防菌株．结果表明,抑菌效果最好的枯草芽孢杆菌为BS01和BS03．采用涂布平板法研究了菌株BS01和BS03抑菌活性,结果表明,抑菌效果均为50％时,BS03比BS01的菌体浓度低,得到抑菌效果最好的菌株BS03．采用温室盆栽植株法测试了菌株BS03的抑菌活性,结果表明,菌悬液比发酵滤液的抑菌效果好,并且在菌悬液处理黄瓜苗后的第3天抑菌活性最高．     

产纤维素酶枯草芽孢杆菌B29的鉴定与培养条件研究

从近海土壤中分离1株产纤维素酶的菌株,经形态和生理生化指标鉴定为枯草芽孢杆菌。对产酶菌株经碳源、氮源、金属元素、培养温度、pH和接种量进行优化,确定最佳培养组分和条件为：20g／L葡萄糖,10g/L胰蛋白胨,3g／LK2HPO4,3g/LNaH2PO4,2g／L氯化铁,pH6．5,培养温度32℃,接种量为2％（v／v）。优化后纤维素酶系中以羧甲基纤维素酶活性为最高,为72．37U／mL,其次是β-糖苷酶和微晶纤维素酶。     

青霉素酰化酶（PGA）在枯草芽孢杆菌基因组上的整合表达

将巨大芽孢杆菌的青霉素酰化酶(PGA)基因整合进枯草芽孢杆菌的基因组,筛选获得可以使PGA稳定表达的枯草芽孢杆菌菌株,克服了枯草芽孢杆菌中质粒表达不稳定的缺点.分别构建了含不同PGA基因拷贝数的3种枯草芽孢杆菌菌株,同时分析了这些菌株中PGA表达量的差异.37℃试管培养36 h菌株B.subtilis/xhoI-,aprE-,vpr--的酶活力为3U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga为6 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga为14 U/L,菌株B.subtilis/xhoI::pga,aprE::pga,vpr::pga为23 U/L.结果表明,整合的拷贝数越多,PGA的表达量越高.     

枯草芽孢杆菌对猴头菇发酵液糖类成分降解规律研究

以猴头菇子实体为主要原料配制培养液,接入纯培养后的枯草芽孢杆菌,在36℃、46℃下分别进行发酵培养,测定0~60 h内发酵液中总糖、还原糖浓度及枯草芽孢杆菌的菌落数。结果表明:总糖和多糖含量的变化均呈先下降后上升再下降的趋势,还原糖含量的变化均呈先上升后下降再上升的趋势。整个发酵过程中,36℃发酵条件下发酵液的总糖、多糖的含量高于46℃发酵条件下总糖、多糖的含量。两种发酵条件下菌落数的变化趋势是先上升后下降再上升。从可溶性多糖浓度、活性菌体数量、成本核算方面确定枯草芽孢杆菌发酵猴头菇子实体培养液的最佳工艺为发酵温度36℃,发酵时间24 h。     

枯草芽孢杆菌产果胶裂解酶培养基优化研究

通过Plackett-Burman试验设计,从葡萄糖、果糖、豆粕粉、氯化铵、乙酸铵、硫酸铵、蛋白胨、酵母提取物、K2PHO4、KH2PO4、CaCl2等11个相关因子中筛选出对枯草芽孢杆菌产果胶裂解具有显著影响的因子——果糖、豆粕和酵母提取物,选取因子豆粕和酵母提取物进行响应面设计分析,研究结果表明当豆粕和酵母提取物含量分别为100 g/L,25 g/L时,果胶裂解酶活性最大为22.69 U/mL。     

纤维素酶EGA基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其产物性质研究

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis是一种高效的外源蛋白表达菌株,能将目的蛋白分泌到细胞外的培养基中.从福寿螺胃液共生菌株Bacillus sp.Strain AC-1基因组中克隆纤维素酶EGA的基因序列,利用基因工程技术构建纤维素酶EGA的重组枯草芽孢杆菌表达载体pAUsp-ega.该载体含有一个强启动子和一段信号肽,经淀粉诱导能表达外源蛋白.以枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失型菌株WB700为宿主菌,表达得到的重组纤维素酶EGA以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物得到的培养基上清酶活力达到1 120 U/L.该纤维素酶在pH 6.0表现最大水解活力,最适反应温度为60℃,在酸性条件下稳定性良好,具有较好的应用前景.     

枯草芽孢杆菌对有害真菌的生防作用及最佳发酵条件研究

运用平板对峙法初步研究了枯草芽孢杆菌BS-02对部分有害真菌的拮抗效果,结果显示:BS-02菌株对砖红镰刀菌的拮抗作用明显,对黑曲霉、黄曲霉、青霉等有害真菌无拮抗作用.显微观察结果表明:BS-02对砖红镰刀菌的生防机制主要是分泌抗菌物质抑制病原菌生长.通过单因素试验和正交试验,得到BS-02最佳拮抗活性的发酵条件为:12 h种龄、1.0%蔗糖、1.0%酵母膏、0.5%NaCl、初始pH 5.0、5%接种量、装液量50 mL/250 mL、210 r/min、31℃、48 h.     

枯草芽孢杆菌D—核糖摇瓶发酵条件的研究

对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）S21进行了摇瓶条件下的D－核糖发酵条件的研究,主要考察了添加木糖、pH、溶氧水平以及采用补糖方式对发酵的影响,确定了D－核糖发酵的最佳工艺条件：D－木糖50g／L初始pH7.0,初始葡萄糖浓度为150g／L,碳酸钙20g/L,并在发酵36h后,在装液置为35mL的500mL三角瓶中添加0.75g/mL的葡萄糖溶液2mL,S2菌可积累D－核糖达51.1g/L.     

枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的发酵条件优化分析

为获得枯草芽孢杆菌产旷β-甘露聚糖酶的最佳发酵条件,分别对碳源、氮源、碳氮质量比、发酵时间和培养温度进行了单因素实验,在此基础上对发酵温度、接种量、培养基初始pH值和发酵时间四因素进行了L9（3^4）正交优化试验．结果表明枯草芽孢杆菌分泌β-甘露聚糖酶的最佳碳源为40g／L魔芋精粉,最佳氮源为5g／L酵母抽提物,两者最佳质量比为5：1,最佳发酵条件为30℃的条件下摇瓶培养28h;最佳发酵参数组合为发酵温度30℃、接种量5％、培养基初始pH6．5、发酵时间28h;各因素对枯草芽孢杆菌产β－甘露聚糖酶的影响程度大小依次为发酵时间〉发酵温度〉接种量〉培养基初始pH,其中发酵时间对产酶的影响最为显著。     

响应面法优化重组枯草芽孢杆菌生产纤维素酶EGA的研究

通过响应面优化法（response surface methodology,RSM）对分泌表达纤维素酶EGA重组枯草芽孢杆菌的发酵条件进行优化。利用Plackett-Burman实验设计对淀粉、酵母粉、蛋白胨等8个因素对枯草芽孢杆菌产纤维素酶EGA的显著影响与否进行评估分析,筛选得到淀粉、酵母粉和MgSO4·7H2O为3个显著影响的因素,再利用Box-Behnken实验设计对这3个因素进行进一步优化,确定最佳培养基的配比为淀粉21g/L,酵母粉11.26g/L,蛋白胨25g/L,MgSO4·7H2O 1.52g/L,KH2PO40.395g/L,NaCl 3.25g/L,CaCl20.1g/L,FeSO4·7H2O 0.005g/L。在最优条件下,利用小型发酵罐对重组菌进行扩大培养,其最高酶活力达到1 264U/L。     

枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的纯化和性质

本文以魔芋粉为碳源培养枯草芽孢杆菌S-88获得一种β-甘露聚糖酶粗酶液,粗酶液通过硫酸铵梯度盐析、超滤、HiprepTM 26/10脱盐柱脱盐、HiprepTM 16/10 DEAE FF阴离子树脂和G-75凝胶柱的纯化,该枯草芽孢杆菌S-88产的甘露聚糖酶的酶活力达到61697.52 IU/mL。用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纯化后酶的分子量为30 kda,比其它细菌产的β-甘露聚糖酶分子量(50 kda)小。β-甘露聚糖酶在pH 6.0和50℃的酶活性最大。它在pH 4.4~6.8之间有很好的稳定性,37℃水浴2 h酶活保持在80%以上。55℃以下水浴2 h,酶活力保持在90%以上,该酶有较好的耐热性,煮沸80 min该酶活力才能基本上消失。     

响应面法优化重组枯草芽孢杆菌生产纤维素酶EGA的研究

通过响应面优化法(response surface methodology,RSM)对分泌表达纤维素酶EGA重组枯草芽孢杆菌的发酵条件进行优化。利用Plackett-Burman实验设计对淀粉、酵母粉、蛋白胨等8个因素对枯草芽孢杆菌产纤维素酶EGA的显著影响与否进行评估分析,筛选得到淀粉、酵母粉和MgSO4·7H2O为3个显著影响的因素,再利用Box-Behnken实验设计对这3个因素进行进一步优化,确定最佳培养基的配比为淀粉21g/L,酵母粉11.26g/L,蛋白胨25g/L,MgSO4·7H2O 1.52g/L,KH2PO40.395g/L,NaCl 3.25g/L,CaCl20.1g/L,FeSO4·7H2O 0.005g/L。在最优条件下,利用小型发酵罐对重组菌进行扩大培养,其最高酶活力达到1 264U/L。     

胞外脂肪酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其性质

枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis是一种高产的外源基因表达菌株,外源蛋白能大量分泌到细胞外培养基中.从地衣芽孢杆菌ATCC 14580基因组中克隆胞外脂肪酶全基因序列,并构建枯草芽孢杆菌表达载体pACC-pUB110,得到脂肪酶基因重组载体.该表达载体有一个强启动子,经淀粉诱导能高效表达外源蛋白,以枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶缺失型菌株WB700和野生型菌株B.subtilis168为宿主菌,得到的脂肪酶以对硝基苯棕榈酸酯为底物,测得培养基上清总活力达到76.8 μ/mL.该脂肪酶在pH10~10.5表现最大水解活力,最适反应温度为37℃,在强碱条件下稳定性很好.