谷朊粉活性肽的分离及其抗氧化性研究

为制备具有抗氧化活性的生物活性肽,采用中性蛋白酶和胰蛋白酶同时处理谷朊粉,对酶解产物进行超滤和葡聚糖Sephadex G-25凝胶柱层析分离,并对其各组分的抗氧化性进行研究,对抗氧化活性高的肽段进行分子量测定和氨基酸组成分析。结果显示,分子量小于3000Da的组分经葡聚糖Sephadex G-25凝胶柱层析以后得到2个肽段,其中WG-1具有最佳的DPPH.清除作用,清除率达到93%,氨基酸组成分析该组分中谷氨酸的含量较高。     

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

赤魟鱼肉蛋白酶解产物的制备及抗氧化活性研究

目的:研究赤魟鱼肉酶解产物的制备工艺及抗氧化活性.方法:以DPPH清除率为指标,通过单因素和正交试验确定木瓜蛋白酶的最佳酶解条件;用葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)分离、提纯并检测各组分的抗氧化活性.结果:木瓜蛋白酶酶解赤虹鱼肉蛋白制备抗氧化肽的最佳酶解条件是:温度55℃、pH 7.0、酶解时间5h、加酶量0.6%;酶解产物的抗氧化活性大于酶解前粗蛋白的抗氧化活性;酶解产物经Sephadex G-25纯化后,得到组分F1、F2、F3,其中组分F2的抗氧化活性最高,当其质量浓度为5 mg/mL时DPPH清除率、还原力、羟自由基清除率分别为31.54%、0.274和17.91%;组分F2的相对分子质量小于307.结论:酶解并经Sephadex G-25纯化制备的赤魟鱼肉多肽具有较强的抗氧化能力.     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。     

凝胶过滤色谱分离大豆抗氧化肽活性的研究

利用木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽的水解液,水解液经Sephadex G-25凝胶过滤色谱进行分子量分级,根据分离图谱确定柱层析的最佳条件。在最佳条件下绘制标准曲线,并根据标准曲线判断分离组分的分子量分布。采用铁离子还原/抗氧化能力测定法(FRAP)、二苯基苦基苯肼法(DPPH)以及金属铜离子螯合能力测定法研究不同分子量大豆肽的抗氧化能力,并对抗氧化活性最佳的肽段进行进一步的HPLC分离和氨基酸组成分析。     

鲢鱼骨胶原多肽的制备及其抗氧化活性研究

以鲢鱼骨为原料,经蛋白酶酶解、Sephadex G-25凝胶色谱分离纯化制备具有高抗氧化活性的胶原多肽。首先以胶原多肽得率和水解度为评价指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和复合蛋白酶中筛选最优酶,并采用单因素实验、响应面优化实验确定鲢鱼骨胶原多肽的最佳制备工艺;然后采用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成;以ABTS⁺·清除能力和还原能力为指标,考察鲢鱼骨胶原多肽各组分的抗氧化活性。结果表明,酶解鲢鱼骨的最优酶为复合蛋白酶,制备胶原多肽的最佳工艺:酶添加量为8 220 U/g、酶解温度为51丈、酶解时间为4.5 h,此时胶原多肽得率为49.00%;经Sephadex G-25分离得到5个组分,其分子质量为14～9 788 Da,氨基酸组成符合胶原蛋白的特征;抗氧化实验表明组分Ⅳ具有最强的ABTS⁺·清除能力和还原能力,其IC₅₀/OD_1.0分别0.02 mg/mL和19.16 mg/mL。该研究为鱼骨资源的开发利用提供了技术参考...     

海参酶解产物的分离及其体外抗氧化作用的研究

从海参酶解产物中分离制备海参肽.并研究其体外抗氧化作用。采用超滤、冷冻干燥方法分离不同分子质量范围的海参肽;采用二苯代苦味酰基自由基(DPPH),研究海参肽的抗氧化活性;经Sephadex G-25和反相高效液相色谱对抗氧化海参肽进行进一步分离。结果表明,分子质量在1000～3000u的海参肽表现出很强的抗氧化作用,对DPPH自由基的清除能力强于V_E,其再经Sephadex G-25分离得到海参肽Ⅰ的抗氧化活性最强,对DPPH自由基的清除率达56.3%(1mg/mL),海参肽Ⅰ经反相高效液相色谱将分离得到2个海参多肽组分.     

杨梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性研究

研究杨梅蛋白模拟体内消化后形成的活性肽所具有的抗氧化及降血糖活性。采用碱溶酸沉法提取杨梅粗蛋白,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解,获得酶解产物,经分子质量截留管获取不同分子质量段多肽,探究其总抗氧化、抑制羟基自由基、抗超氧阴离子、DPPH自由基清除能力和对α-葡糖糖苷酶的抑制能力。进一步分离纯化获取最佳活性肽段,研究其分子质量及氨基酸组成。结果表明:杨梅蛋白酶解肽具有良好的抗氧化和α-葡糖糖苷酶抑制活性,且活性最佳分子质量段为MW5 ku。此段多肽经G-25、G-10葡聚糖凝胶两步分离纯化所得小肽分子的分子质量分布范围为174~561 u,共由9种氨基酸组成,其中His、Arg、Asp和Ile4种氨基酸含量最高。     

柴鱼蛋白肽的酶法制备、分离纯化及结构鉴定

以柴鱼为原料,酶解制备柴鱼蛋白肽,并以抗氧化活性和蛋白质回收率为指标对柴鱼蛋白肽酶解工艺进行了优化研究,用离子交换层析法和凝胶层析法对酶解液进行分离纯化,最后用基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)串联质谱法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对分离组分进行结构鉴定。研究显示,1、最佳用酶为木瓜蛋白酶;最适加酶量为1.0%;最佳预处理条件为100℃、5 min;最佳酶解时间为4 h。2、经过DEAE-52纤维素层析后,分离出A、B、C三个组分,其中A组分的抗氧化活性最好,后对A组分用Sephadex G-15葡聚糖凝胶进一步分离纯化,分离出A1、A2两个成分,其中A1的抗氧化活性最好。3、用MALDI-TOF-MS质谱对A1、A2进行分子量鉴定,检测发现,A1、A2组分的分子量主要集中在378.830 Da,进一步做氨基酸分析后,推测其可能含有的氨基酸组成为Lys、Leu、Pro。     

抗氧化活性花生肽的氨基酸组成及质谱分析

目的：研究具有抗氧化活性花生肽的氨基酸组成及分子质量。方法：采用葡聚糖凝胶G-25、G-15对花生蛋白酶解液进行分离纯化,得到具有抗氧化活性花生肽组分J22和F22,通过氨基酸分析仪和液相色谱-飞行时间质谱联用仪进一步分析氨基酸组成及分子质量关系。结果：与在花生蛋白中的含量相比,J22组分中Ile从3.75%上升至13.34%,Met从0.79%上升至5.18%,Tyr由3.44%上升到45.84%,His由2.68%上升到12.53%;F22组分中Ile从3.75%上升至6.12%,Met从0.79%上升至3.78%,Tyr由3.44%上升到11.53%,His由2.68%上升到51.13%。J22组分主要是由分子质量为291.9D和391.3D的短肽组成的混合物,F22组分主要是由分子质量为205D和391.3D的短肽组成的混合物。结论：花生肽组分J22和F22中Tyr、His含量较高,分子质量小,易于吸收,且有一定分子质量及氨基酸残基决定的结构,是花生肽抗氧化活性较高的重要原因。     

黄粉虫抗氧化活性肽的分离纯化研究

为制备具有抗氧化活性的黄粉虫生物活性肽,采用双酶水解黄粉虫蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25 凝胶柱层析和阳阴离子交换柱层析分离纯化,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,纯化得到的抗氧化多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有很强的清除作用,清除率可分别达到74.20% 和87.32%。     

Reducing,Radical Scavenging,and Chelation Properties of Fermented Soy Protein Meal Hydrolysate by Lactobacillus plantarum LP6

Fermented soybean protein meal hydrolysate (FSPMH) was fractionated by gel filtration on Sephadex G-15. The fractions obtained were subjected to various antioxidant assays, amino acid and molecular weight determinations. Among the seven fractions, the highest antioxidant activity was found in fraction F2, with significant differences (P < 0.01) 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, hydroxyl radicals (^.OH) scavenging and Cu²⁺ chelating activity. Fraction F2 exhibited scavenging of DPPH (59.43%), ^.OH (72.80%) and 44.47% Cu²⁺ chelating activity. All other fractions showed variable activities in different assays. Amino acid analyses of F2 fraction with the strongest antioxidant activity also had the highest percentage of related antioxidative amino acids content (Histidine 3.46, Serine 5.78, Valine 4.08 and Lysine 11.49 g/100 g protein) compared with other six fractions. The molecular weight distribution of F2 was found to vary from 170 to 1500 Da.     

蟹抗氧化肽的分离纯化及活性研究

酶解梭子蟹下脚料获得抗氧化肽粗品。采用葡聚糖凝胶G-50 与G-25 进行分离纯化,对纯化样品的相对分子质量分布、抗氧化特性和氨基酸组成进行测定。结果表明：经分离得到的组分3 抗氧化性较强,其相对分子质量在1096.5 左右,经HPLC 分析其已基本达到纯化;经氨基酸分析其由11 种氨基酸组成,其中具有抗氧化能力的酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸所占比例很高。     

榛子粕抗氧化肽的分离纯化及序列分析

为研究榛子粕抗氧化肽的抗氧化性和氨基酸组成的关系,本实验通过中性蛋白酶水解榛子粕蛋白得到榛子粕抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,采用超滤分离和葡聚糖凝胶纯化,获得DPPH自由基清除率高的榛子粕抗氧化肽P2,采用超高压液相色谱串联四级杆质谱(LC-MS/MS)测定榛子粕抗氧化肽的氨基酸序列。P2中7个短肽的氨基酸序列分别为His-ILe/Leu-Pro(362 Da)、ILe/Leu-Val-Asp-Glu(475 Da)、Thr-Pro-Pro-His-Lys(588 Da)、His-ILe/Leu-His-Ser-Ala-Thr(662 Da)、Cys-His-Ser-ILe/Leu-Met-ILe/Leu(701 Da)、Thr-His-Ala(327 Da)、Phe-ILe/Leu(279 Da)。由此得出结论,疏水性氨基酸和芳香性氨基酸可以提高榛子粕抗氧化肽的抗氧化性。     

鳙鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

采用优化酶法从鳙鱼肉蛋白中制备具有清除Fenton体系产生的羟自由基(·OH)活性的抗氧化肽.应用响应面分析法以酶解液对Fenton体系产生的羟自由基(·OH)的清除率为指标优化最佳酶解工艺;酶解液相对分子质量分布采用凝胶层析法测定.复合蛋白酶是水解鳙鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适合酶,最佳酶解条件为:温度40℃、酶解时间30 min、PH=7.0、酶加量为600 U/g底物、底物:水=1:2;活性肤相对分子质量范围为519～1088.响应面分析法是优化酶解工艺可行的方法;具有清除羟自由基活性的肽是一些寡肽.     

麦麸多肽的分离纯化及抗氧化功能研究

采用碱性蛋白酶Alcalase 水解麦麸蛋白制备麦麸多肽,利用SephadexG-25 和DEAE-32 对麦麸多肽进行纯化,醋酸纤维素薄膜电泳法测定麦麸多肽纯度,用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、脱氧核糖法检测其对超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)的清除能力,分光光度法测定小鼠红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度。结果表明,分离纯化的麦麸多肽对O2·和·OH 的清除率别为53.16%、62.39%,并且具有明显抑制氧化溶血现象和·OH 诱导线粒体肿胀的作用,说明麦麸多肽具有较强的抗氧化功能。