世界卫生组织乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会

2006年6月1至2日,在瑞士日内瓦WHO总部召开了非正式乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会.     

甲型肝炎灭活疫苗的研制

甲型肝炎病毒8347毒株在人二倍体细胞（2BS株）中增殖4周，收获的病毒液经冻融、超声、过滤．德液用1：4000福尔马林、37℃灭活6天以上制成灭活疫苗，病毒灭括前的滴度（TCID50／ml）至少可达6．5左右．疫苗免疫豚鼠和小鼠三针后，75％～100％的动物甲肝抗体阳转。经超声处理后疫苗免疫原住可大幅度提高，三针后动物血清中的中和抗体效价可达1：20以上．     

SARS-CoV-2非结构蛋白兔抗血清的制备及其在灭活疫苗质量监控中的应用

目的 制备SARS-CoV-2非结构蛋白1(non-structure protein 1,NSP1)兔抗血清,并用其检测SARS-CoV-2NSP1在灭活疫苗生产过程中的含量变化,为建立灭活疫苗纯度、工艺质量监控方法奠定基础。方法 选择带DE3的E. coli原核表达系统表达SARS-CoV-2 NSP1全长蛋白,纯化后免疫日本大耳白兔,共免疫6次,每次间隔14 d,采集全血,获得NSP1兔抗血清;以纯化的NSP1蛋白为抗原,Western blot法鉴定兔抗血清纯度,同时利用RD细胞表达NSP1-eGFP融合蛋白,裂解后作为抗原对NSP1兔抗血清进行特异性鉴定;以SARS-CoV-2灭活疫苗生产过程中1～4 d细胞裂解液及纯化后病毒颗粒为抗原,NSP1兔抗血清及M、S、E、N兔抗血清为一抗,Western blot法鉴定样品中抗原蛋白的含量变化。结果 成功表达带有GST标签的NSP1蛋白,并获得相应的兔抗血清,且抗原纯度较高;制备的兔抗血清能正确识别真核表达的NSP1-eGFP融合蛋白,并能鉴定灭活疫苗生产过程中蛋白含量的变化;灭活疫苗成品中不含NSP,疫苗纯度高;E蛋白与其他3种...     

2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发质量分析

目的 对2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发进行质量分析。方法 企业按照《中国药典》三部（2015版）规定的方法对47批森林脑炎灭活疫苗的效价、氢氧化铝含量及硫柳汞含量进行测定;中国食品药品检定研究院（简称中检院）抽取16批森林脑炎灭活疫苗进行效价测定,6批进行氢氧化铝含量测定,6批进行硫柳汞含量测定。对上述检测结果进行趋势分析,评价疫苗相关指标的批间一致性。结果 企业效价测定结果中有2个不连续批次超出行动下限,但均在质量标准范围内,其他数据无过高或过低的情况,也未见连续3批超出警戒限的批次;中检院效价测定结果中有1批疫苗超出警戒下限,未见超出行动限和连续3批超出警戒限的批次。企业测定氢氧化铝及柳硫汞含量的结果均未超出警戒限,均在其质量标准的范围内;中检院的测定结果均符合其质量标准。结论 2015—2019年森林脑炎灭活疫苗批签发的效价、氢氧化铝和硫柳汞含量测定结果均符合相关质量标准,具有较好的批间一致性,该疫苗的生产工艺和产品质量较稳定。     

WHO主持我国SARS疫苗临床研究专项研讨会

由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究，取得了较好的预期结果。同时WHO对我国的SARS疫苗临床研究进展非常重视和关心，为此，由WHO疫苗基础研究部（IVR）主持的我国SARS疫苗Ⅰ期临床研究总结和Ⅱ期临床研究方案国际专项讨论会于2005年6月1日在日内瓦WHO总部M220会议室召开。会议由WHO IVR负责人Marie-Paule Kieny教授主持，参加会议的有WHO和特邀专家7人，中国药品生物制品检定所王军志副所长、董关木主任作为WHO的特邀专家参加了会议，北京科兴生物制品有限公司王楠、高虹博士出席会议。     

2009～2016年脊髓灰质炎灭活疫苗批签发汇总及质量分析

<正>脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒引起的一种急性肠道传染病,口服脊灰减毒活疫苗(oral poliovirus vaccine,OPV)对控制和消灭脊灰作出了巨大贡献[1]。但OPV使用后有极低的概率引起疫苗相关麻痹型脊灰(vaccine associated paralytic poliomyelitis,VAPP)和疫苗衍生脊灰病毒(vaccine deri-ved polio     

2018年肠道病毒71型灭活疫苗国家监督抽验质量分析及评价

<正>手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)已成为世界范围特别是西太区的重大公共卫生问题^[1]。研究显示,多种肠道病毒可引起HFMD^[2],其中肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是导致重症及死亡病例的主要病原体^[3-4],可引起5岁以下婴幼儿出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、心衰     

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的制备及免疫试验

目的利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)安徽分离株制备油乳剂灭活疫苗,并进行免疫试验。方法PRRSV经Marc-145细胞传代增殖,制备油乳剂灭活疫苗;物理性状、无菌试验及安全性试验合格后,经肌肉注射免疫健康仔猪,并进行攻毒;分别检测免疫仔猪的血清抗体水平及保护力,并进行免疫程序及与市售疫苗的免疫效果的比较试验。结果制备的灭活疫苗的适宜免疫剂量为2ml/头,免疫后14d血清抗体水平可达高峰;使用同一病毒攻毒,保护率为80%(4/5)。采用灭活疫苗2次免疫及灭活疫苗与弱毒疫苗交替2次免疫,免疫效果均较好。制备的灭活疫苗免疫效果与1号市售灭活疫苗相比,差异无统计学意义,且优于2号市售灭活疫苗。结论已成功制备了PRRSV安徽分离株油乳剂灭活疫苗,该疫苗安全可靠,免疫效果好,适于推广使用。     

SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应

目的评价SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应。方法用SV40灭活疫苗经肌肉注射免疫0.5~1周岁的恒河猴,分别于第1次和第2次免疫后2周,检测血清中和抗体效价,免疫18个月后检测SV40基因组成分。结果免疫的12只恒河猴在第1次免疫后2周,血清抗体全部阳转,平均抗体滴度为1∶16,第2次免疫2周后血清抗体滴度明显增长,平均达到1∶64~1∶128。用PCR方法未检测到SV40基因组成分。结论SV40灭活疫苗可以有效诱导恒河猴产生特异性抗体反应。     

剃须泡沫气雾剂的研制与质量控制

介绍了剃须泡沫气雾剂的特点和功用。根据国内普通消费者开发一种方便生产的剃须泡沫气雾剂,分别从如何选用化妆品原材料、气雾罐和阀门、应用性能等方面进行试验,并根据国内最新的化妆品卫生规范和行业卫生要求,制订产品的质量控制标准。     

乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究

将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。     

脊髓灰质炎灭活疫苗免疫效果观察

目的 了解脊髓灰质炎灭活疫苗（ＩＰＶ）的免疫效果。方法 对２－３月龄婴幼儿免疫ＩＰＶ,并采集 双份血样１１８份。来用特异性抗原抗体中和法,分别对血清中抗脊髓灰质炎病毒３个型的中和抗体进行测定。结 果 要幼儿免疫后其脊髓灰质炎 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒中和抗体阳转率分别为 １００％、９８．７３％和 ９７．９８％,几何平均滴度分别为２８２．４１、１５４．８８和３４０．８４。结论　ＩＰＶ在初免儿童中免疫效果良好。     

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热（ＨＦＰＳ）疫苗的免疫效果和减少副反应。方法用ＥＬＩＳＡ检测ＨＦＲＳ 病毒抗原的方法,比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果;比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果。结果用 孔径３０万相对分子质量滤膜浓缩时,过滤液中仍有部分病毒抗原检出,经１０万相对分子质量滤膜过滤后,过滤液 中检测不到病毒抗原;用 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ凝胶柱层析浓缩时,经波长 ２８０ ｎｍ检测到 ３个吸收峰,其中仅在第 １峰中检 测到病毒抗原,收集第１峰,几乎回收全部病毒抗原,去除杂蛋白约９０％左右。结论本纯化方法适合于ＨＦＲＳ疫 苗的规模化生产。     

肾综合征出血热灭活疫苗毒种的选育及其生物学特性的研究

肾综合征出血热（HFRS）家鼠型病毒株237,经过酶斑选育后,获得的237七毒株,与原来的毒株相比,其生物学特性发生较大的变化,表现在沙鼠肾细胞上增殖的病毒滴度由原来的106.0TCID50／ml增至107.5TCID50／ml;培养液中的抗原量由原来的RPHA1：16增至1：04,由它制成的疫苗免疫家兔的血清,对UR病毒的中和抗体滴度,由原来的≤1:10,增至1：10～≥1:40。表明Z37－5毒株适用于制造灭活疫苗。     

甲型肝炎灭活疫苗免疫原性的猴体实验

甲型肝炎病毒TZ84毒株经 2BS二倍体细胞培养制备成甲型肝炎灭活疫苗。采用普通狨猴和恒河猴进行疫苗的保护性研究。结果均有较好的抗体反应 ,而且对甲型肝炎病毒鲁兴株 (强毒株 )的攻击亦均有保护作用。表明该疫苗有较好的免疫效果。     

篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗

目的建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法利用7.5L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24h取样,检测病毒滴度。收获的病毒液经纯化后,制备乙脑灭活疫苗,检测各项指标。结果Vero细胞培养至96h,葡萄糖消耗量达高峰,细胞密度达峰值;接种病毒后72h,葡萄糖消耗量达高峰,灌流量为7L/d,连续收获7～9d,共可收获(40±5)L病毒液;96h病毒滴度达高峰,为10.0LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2005版)要求。结论已建立了篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。     

应用金黄地鼠进行流行性出血热灭活疫苗效力试验的研究

以流行性出血热灭活疫苗原苗或稀释苗免疫地鼠，首针免疫后4周用野鼠型病毒A537株或家鼠型病毒L99株攻击，攻击后第7天取肺和脾以IFA检查EHF病毒抗原。所检测的3批疫苗均具有较好的保护效果，并有一定的规律性。表明该动物敏感，可作为流行性出血热疫苗效力试验的动物模型。     

冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂的筛选

目的筛选冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂,以替代传统的动物源性稳定剂。方法取同一批乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)原液,分别加入A、B、C、D稳定剂(非动物源性),制备成冻干剂型,分别检测其外观、水分、有效抗原含量和效力等,以传统稳定剂作对照,并考察其稳定性。结果冻干前后,疫苗的有效抗原含量及效力与对照无明显差异。加入D稳定剂(不含人血白蛋白和明胶)的冻干乙型脑炎灭活疫苗于37℃放置6个月,效力降低15.1%;于2～8℃放置2年,效力仍高于参考品。其他检测指标均符合要求。结论D稳定剂可替代传统稳定剂,用于制备冻干乙型脑炎灭活疫苗。