cpcB与CT融合蛋白表达质粒在大肠杆菌中的表达和纯化

将人和鲑鱼嵌合型降钙素基因与藻蓝蛋白的β亚基基因相连,插入融合表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21。融合蛋白cpcB-CT基因在IPTG诱导下获得高效表达。超声破碎后,经SDS-PAGE分析,在48kD处有新增条,灰度扫描测定,过表达蛋白量占50％～60％,85％为包涵体。包涵体经变性、复性,过Glutathion-Sepharose-4B亲和吸附柱,获含有GST。的融合蛋白,该蛋白经凝血酶消化和截留分离,获得纯化的融合蛋白cpcBCT。Western blotting分析表明,产物具有与合成人降钙素相似的抗原决定簇部分;ELISA-受体法和大鼠降血钙试验表明,其具有降血钙作用。提示该融合蛋白可能具有良好的应用前景。     

藻红蛋白含量可见光吸收光谱的测量

藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)是衡量水体中藻类富营养化的一个重要指标,可见光吸收法具有测量快速、准确、无二次污染、可实现在线和原位测量等优点。因此,本文提出采用可见光吸收法测定水中藻红蛋白含量。以藻红蛋白标准液为研究对象,采集5~250 mg/L不同浓度标准液的可见光吸收光谱,对藻红蛋白进行定性定量分析。同时,对光谱的不同谱区预处理后,运用偏最小二乘法(PLS)建立可见光吸收光谱下的藻红蛋白校正分析模型,并与主成分回归法(PCR)进行比较。实验结果表明,采用PLS算法在谱区480~570 nm建立的校正分析模型的相关系数R2可达0.993,校正标准差RMSEC与相对标准差RSD最小,分别为5.578 3和3.92%。     

两株海洋聚球蓝细菌(Synechococcus spp.)的16s rDNA系统发生及生理生态特征分析

利用流式细胞仪分析了黄海近海水样中聚球蓝细菌(Synechococcus)种群的组成,发现主要由藻红蛋白含量不同的两个类群组成.流式细胞仪分选后,用SN培养基培养纯化得到两株聚球蓝细菌IOCAS0401和IOCAS0402.荧光显微镜下镜检,两株菌在蓝色激发光(450～490nm)下发橘红色荧光,并且IOCAS0401的荧光较IOCAS0402强.扫描电镜观察发现IOCAS0401呈椭圆形,长轴大约1.2μm;IOCAS0402近似球形,直径约0.6μm.吸收光谱的检测表明,两者都有叶绿素a和藻红蛋白的特征吸收峰.其中IOCAS0401有藻尿胆素(PUB)和藻红胆素(PEB)吸收锋,而IOCAS0402只有PEB的吸收峰,两者均无藻蓝蛋白(PC)吸收锋.通过16s rDNA测序分析,结果表明两株菌都位于MC-A中的clade II类群,与从日本海域分离获得的MBIC10224菌株有较高的亲缘关系,虽然这三株菌都归为clade II,但单独成一分支,表明它们带有明显的西太平洋特色.     

吸血蝙蝠纤溶酶原激活剂α2的原核表达及抗体制备

利用人工合成的吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂α2(DSPAα2)基因,研究了其在细菌中的表达及表达产物的纯化和抗体制备.首先人工合成DSPAα2基因,并构建原核表达载体转化大肠杆菌.经IPTG诱导后,DSPAα2在细菌中得到了高效表达.SDS-PAGE结果显示,以包涵体的形式存在的DSPAα2重组蛋白占到细菌总蛋白的32%.包涵体裂解后经亲合层析柱纯化,100mL菌液中能得到2.2mg纯的重组蛋白.用纯化的DSPAα2分别免疫大鼠和小鼠,经ELISA检测,获得了效价达到1∶12800以上的高质量的抗血清.Western blot结果显示抗体能与DSPAα2特异性地结合.     

海带配子体叶绿素a/c结合蛋白基因lhcf6的序列特征与系统发生分析

通过根据糖海带(Laminaria saccharina)叶绿素 a/c 结合蛋白基因 lhcf6 的 cDNA 序列设计的引物和 PCR 方法获得了海带(L.japonica)配子体 llwf6 基因的 cDNA 全长序列(GenBank 登录号:DQ250739).该序列的开放阅读框(ORF)与糖海带 lhcf6 编码序列的相似性高达 99%,而两非翻译区(UTR)序列的相似性只有94%.经推测,海带配子体 lhcf6基因序列的 ORF 编码一个含 218 个氨基酸的前体蛋白 LHCF6,其氨基端的 40 个氨基酸组成跨质体内质网和叶绿体膜的信号肽,跨膜酶切后变为含 178 个氨基酸的成熟蛋白,它的分子量为 19.3 kD,等电点为 4.88.预测的成熟蛋白 IJ-ICF6 高级结构存在 2 个保守性的β折叠和 3 个跨类囊体膜的 a 螺旋区.根据海带配子体 LHCF6 成熟蛋白以及 GenBank 中 12 个同源蛋白质的氨基酸序列所构建的 Neighbor-joining 分子进化树,显示藻类在光捕获蛋白氨基酸序列水平上存在着蓝藻与红藻、杂色藻类、裸藻与绿藻等三个方向的演化途径,其中裸藻和绿藻与高等植物的亲缘关系更近.     

红球菌R04气囊蛋白的表达

目的：探讨红球菌R04在联苯培养条件下气囊蛋白的表达。方法：使用实时荧光PCR对红球菌R04在联苯培养条件下气囊蛋白进行定量分析,以明确基因表达水平的变化。结果：与对照相比较,红球菌R04在联苯培养条件下气囊蛋白表达水平整体上调,在对数期上调尤为显著,而到稳定期时表达水平下降。结论：联苯培养的红球菌气囊蛋白表达上调,为研究其气囊蛋白生理功能提供参考数据。     

藻蓝蛋白对Hela细胞CD59基因表达调控作用的研究

探讨了钝顶螺旋藻藻蓝蛋白(PC)对Hela细胞CD59基因表达的调控作用.以正常人CD59cDNA基因为模板,经PCR扩增后重组入真核表达质粒载体pALTER-MAX,然后利用阳离子脂质体(Lipfectamine-2000)将重组质粒和PcDNA共转染人子宫颈癌细胞(Hela)和对照用正常中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)进行表达.用不同浓度的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白作用于转染细胞,通过核酸分子杂交技术、免疫荧光标记法和ELISA法对细胞中CD59分子的表达进行检测.结果表明:成功构建了重组质粒pALTER-MAX-CD59,并将其导入真核细胞(Hela,CHO),经G418筛选获得了CD59分子高效表达的细胞克隆.用藻蓝蛋白作用于筛选出的转基因细胞,证实藻蓝蛋白可促进Hela细胞表面CD59蛋白的表达并抑制Hela细胞的增殖,而对于正常CHO细胞无明显作用.     

WSSV-VAP1基因克隆及在毕赤酵母中的表达

根据WSSV-黏附蛋白(VAP1)基因序列设计了一对引物,在5‘引物和3‘引物中分别引入EcoRI和XbaI酶切位点。经PCR扩增,将VAP1基因克隆至穿梭载体pGAPZαA之GAP启动子下游位点,构建成含α-factor信号肽的重组表达载体,获得的重组质粒pGAPZαA-VAP1经线性化后转入毕赤氏酵母SMD1168菌株,构建成分泌型表达VAP1的酵母工程菌株。SDS-PAGE和Western-blot及结合活性检测分析表明,VAP1基因在该体系中得到成功表达,表达产物与对虾细胞膜具明显的结合活性。     

α和β-成核作用硅灰石对聚丙烯结晶行为的共同作用

α/β复合成核剂改性聚丙烯(PP)已有研究,但α和β-成核作用无机粒子填充PP的结晶行为有待探索。文中通过制备α和β-成核作用硅灰石填充PP复合材料,考察了硅灰石所具有α和β-成核作用和成核效率对PP结晶行为、熔融特性和β-晶含量的影响及规律。结果表明,当2种硅灰石成核效率相差较大时,具有较高成核效率的硅灰石在PP成核结晶过程中发挥主导作用;而当2种硅灰石成核效率相近时,α和β-成核作用硅灰石之间存在竞争成核作用,最终形成β-晶含量由两者的质量比决定。     

低水平α、β放射性测量仪器计量性能的测试分析

低水平α、β放射性测量仪器通常采用闪烁体探测器和流气正比计数器探测器。参照JJG1100-2014流气正比计数器总α、总β测量仪检定规程和JJG 853-2013低本底α、β测量仪检定规程,实验测量了流气正比计数器和闪烁体型共15个型号的低水平α、β放射性测量仪器的本底、探测效率、串道比等主要性能参数,结果显示流气正比计数器总α、总β测量仪的本底较低、β探测效率较高,低本底α、β测量仪的α对β串道比较低,表明前者对β放射性的测量下限更低,后者较适用于α、β放射性混合样品的测量。     

Estimation of Parameters of Universal Distribution of Moments of Failure of Products

A method is proposed for estimating the parameters of a mixture of exponential and Weibull distributions for which the accuracy of preliminary estimates obtained by graphical analysis is refined in accordance with the criterion of maximum likelihood. The efficiency of the proposed method is supported by the results of statistical modeling.     

水三相点复现的不确定度评定

水三相点是开尔文热力学温度的唯一基准点，也是ITS-90国际温标重要的定义固定点。因此，水三相点不确定度分析对整个温标的建立、温度量值传递起着至关重要的作用。近3年来，中国计量科学研究院研制出一系列高质量的水三相点容器，加强了水三相点的研究，为不确定度的分析提供了更为可靠的实验依据。同时，不确定度的分析也是客观评价新研制容器性能的一个重要指标。因此，根据实验结果对新研制容器所复现的水三相点进行了不确定度评定。评定结果表明，其扩展不确定度为0．16mK(k=2．69，P=0．99)。     

Assurance of the Uniformity of Measurements of the Power of Laser Radiation

On the basis of an analysis of the principle underlying the construction of standards and systems designed for reproduction of the unit of mean power and energy of laser radiation, it is shown that these standards consist of unified subsystems that carry the principal metrological load. By means of such a division, it is possible to realize a systems-engineering synthesis of standards with preassigned error. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 20–23, November, 2005.     

方波幅度的测量不确定度

介绍了用众数法评价方波幅度时的不确定度分析和评价过程;讨论了主要的不确定度来源,包括众数判别区间的影响、波形测量系统幅度测量误差的影响等等;给出了减小不确定度的主要措施,并结合一个实例,给出了方波幅度的不确定度评价结果。     

Assurance of the Uniformity of Measurements of Energy of Short-Pulse Coherent Radiation

Ways of creating unified automatized reference (calibration) and standard measurement equipment for the purpose of developing a subsystem for the assurance of the uniformity of measurements of the energy of short-pulse laser radiation are considered. __________ Translated from Izmeritel'naya Tekhnika, No. 11, pp. 24–28, November, 2005.     

水线震荡对斜拉桥拉索风雨激振稳定性的作用

从理论和试验两个方面研究了水线震荡对斜拉桥拉索风雨激振稳定性的作用。建立了拉索和水线的运动方程，应用李雅普诺夫函数给出了水线不平衡角的判别公式。设计了一种新型的带有可运动人工水线的拉索模型，并进行了风洞试验。理论和试验结果表明，水线震荡是导致拉索风雨激振具有较大不稳定范围的主要原因。试验结果证明了理论模型和分析的结果是正确的。     

二硝基重氮酚重氮化反应机理再探

文中依据杂化理论分析了亚硝酸的结构特点，主要以分子结构理论为基础，从理论上指出在ＤＤＮＰ重氮化反应中，可能是氯化亚硝酰作为重氮反应的亲电试剂，其进攻发生在氨基的氮上，从而推测了获得ＤＤＮＰ的反应历程。     

逻辑分析仪部分参数测量结果的不确定度评定

介绍了逻辑分析仪部分参数测量结果的不确定度分析评定方法,评定过程及结论,可应用在对于计量标准进行相应指标的不确定度评定分析上。     

空压机轴承箱蜗壳温度探头油封改造

由于空压机进气侧轴承箱蜗壳温度探头密封效果不好,使空压机及其后续管道受到油污染。后将温度探头的O形圈密封改为骨架油封,杜绝了轴承箱漏油问题。文章简介空压机的结构和技术参数,详细介绍了骨架油封的制作和优点。     

Calculation of the Heat of Combustion of Hydrocarbon Components of Fuels

Development is continued of the empirical method for the calculation of the heat of combustion of organic compounds and, in particular, of hydrocarbons of different structures by the additive scheme based on their chemical structure.