芽孢皮层裂解酶的提取与SDS-PAGE分析

使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱导萌发的作用,且DPA诱导枯草芽孢杆菌芽孢萌发效果最好。进行SDS-PAGE电泳时,进样量为15μL,分离胶浓度为10%的凝胶板跑出的蛋白条带分离的较好,凝胶板上有4条蛋白条带,通过蛋白质分子量标准曲线可得出,目标蛋白分子量大约分别为:61.10、48.64、43.25、31.28 k Da。本研究初步提取纯化了皮层裂解酶,为后继进一步提纯皮层裂解酶、研究HPTS对该酶活性和结构的影响提供试验材料,有助于阐明高压热处理下芽孢死亡的机理,推动HPTS技术在食品工业中的应用。     

中温乳化肠中凝结芽孢杆菌芽孢萌发及热致死规律

从中温乳化香肠中筛选出一株凝结芽孢杆菌芽孢,以20种氨基酸、D-果糖、D-葡萄糖、氯化钾为萌发剂,通过相差显微镜及生长曲线测定仪测定600 nm波长下光密度值,研究该芽孢萌发规律,同时研究7种防腐剂对芽孢萌发效果影响及不同温度热胁迫处理后的芽孢致死率。结果表明:葡萄糖可以促进凝结芽孢杆菌芽孢萌发,增大其浓度对芽孢萌发率无影响;绘制了芽孢萌发率标准曲线,相关系数为0.977 8;亚硝酸钠、山梨酸钾、乳酸链球菌素(nisin)和脱氢乙酸钠对芽孢萌发无影响,乳酸钠、葡萄糖酸-δ-内酯和双乙酸钠可以抑制芽孢萌发;采用90℃及95℃对芽孢热胁迫致死效果较差,100℃热处理最高致死率可达92.09%,105~120℃热胁迫处理对该芽孢致死率在15 min内可以接近100%。     

超声协同诱导剂对枯草芽孢杆菌芽孢致死的作用

为延长食品货架期,实现中温条件下的芽孢杀灭,以枯草芽孢杆菌为对象,研究了超声处理、热处理和不 同种类诱导剂协同作用对枯草芽孢杆菌芽孢致死的最适条件。结果表明：采用温度60 ℃、功率600 W、频率25 kHz 的超声方式,辅以50 mmol/L L-丙氨酸和6 mmol/L肌苷共同作用,可以使芽孢萌发率达到98.23%。进一步改变超 声处理模式,同等条件下,采用900、600、300、100 W的功率递减超声处理,能够有效提高芽孢萌发时的处理效 率,实现体系内芽孢的大量萌发和杀灭,保证食品安全和品质。     

不同浓度芽孢萌发剂对肉毒梭菌芽孢萌发的影响

肉毒梭菌（Clostridium botulinum）及芽孢是真空包装、冷冻食品及罐装食品中的主要杀菌对象,其抗逆性强,生长速度快,而成为食品中毒的主要原因之一。本试验采用单因素试验和响应面分析法研究芽孢萌发剂L-丙氨酸和KCl添加浓度,处理温度和处理时间对肉毒梭菌芽孢萌发条件的影响,探究影响肉毒梭菌芽孢萌最适条件,并结合常压100 ℃,20 min杀菌,研究最终肉毒梭菌的杀灭效果。结果显示,当处理温度为75.5 ℃,处理时间为25.0 min,添加L-丙氨酸浓度为15.4 mmol/L,KCl浓度为0.53%时,芽孢萌发率最大,可达89.91% ± 1.31%,经过两次100 ℃杀菌20 min,肉毒梭菌杀灭率可达98%。研究结果可为食品工业中罐头的常温杀菌提供一定的技术指导。     

采用高通量微生物法检测四种抗生素在鸡蛋中的残留

建立了-种采用高通量微生物法测定鸡蛋中土霉素、四环素、金霉素和新霉素的方法.样品预处理后在96孔微板上采用嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌蕈状变种进行检测,枯草芽孢杆菌的检测限为0.32mg/kg～0.64mg/kg,蜡样芽孢杆菌蕈状变种的检测限为0.64 mg/kg～1.28 mg/kg,嗜热脂肪芽孢杆菌...     

超高压结合化学萌发诱导剂对枯草杆菌芽孢的灭活作用

采用化学萌发诱导剂(AGFK、肌苷、L-丙氨酸、DPA)来诱导枯草杆菌芽孢萌发,然后用超高压处理将萌发的芽孢杀灭,用平板菌落计数法、分光光度计和相差显微镜检测诱导剂对该芽孢的萌发诱导效果,并用透射电镜观察超高压处理前后芽孢内部结构的变化。结果表明:以上诱导剂能迅速诱导芽孢萌发,使用DPA时,芽孢萌发率约为95%,组合使用DPA和营养素时,芽孢萌发率约为87%,单独使用DPA时萌发率更高,这一特异现象表明目前关于芽孢萌发机制的认识还不完善。萌发后芽孢的内部结构变成了类似营养体的结构,再经压力处理后其内部结构严重受损,超高压结合化学萌发诱导剂能有效杀灭绝大部分芽孢。     

拟蕈状芽孢杆菌Gxun-30产角蛋白酶液体发酵条件优化

为提高海洋来源拟蕈状芽孢杆菌(Bacillus paramycoides)Gxun-30产角蛋白酶的能力,该文利用单因素及响应面法对该菌产酶的培养基和培养条件进行了优化.先利用单因素试验对羽毛浓度、碳源、氮源、无机盐、初始pH值、发酵时间及接种量等影响菌株产酶条件进行了优化.结果 表明,羽毛15 g/L、果糖10 g/...     

NaCl对嗜热脂肪芽孢杆菌耐热性影响的研究

为了确定在100℃以下NaCl对嗜热脂肪芽孢杆菌耐热性的影响,本研究以体积个数为107 CFU/mL的嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液为热处理时的初始菌液,在菌悬液的中心温度在约150 s达到70℃、80℃、90℃条件下,研究不同浓度的NaCl制备的菌悬液经热处理后,嗜热脂肪芽胞杆菌的残存体积个数和热致死率,并对嗜热脂肪芽孢杆菌的残存体积个数初步建立各温度和各NaCl浓度条件下的热失活模型。研究结果表明,嗜热脂肪芽孢杆菌菌悬液在各条件下的失活曲线均可用Origin 8.0软件中Dose Resp模型拟合,且判定系数R2均可达到0.96以上。对嗜热脂肪芽孢杆菌在不同温度、不同时间点和不同浓度NaCl下的热致死率进行单因素方差分析,空白在不同热处理温度前40 s致死率均达到95%以上,而不同浓度氯化钠在70℃下前120 s均达到95%以上,在80℃下前60 s均达到93%以上,在90℃下前60 s均达到98以上,可见不同浓度的NaCl对嗜热芽孢杆菌具有保护作用,其中2%NaCl的保护作用显著大于其它浓度的NaCl。     

嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢作为低酸性饮料杀菌指示菌的研究

采用毛细管法测定并分析不同温度条件下嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在植物蛋白饮料、咖啡饮料和中性磷酸盐缓冲液3种不同基质中的耐热参数,分析嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢作为低酸性饮料杀菌指示菌的可行性。结果表明,嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在上述3种基质中耐热性不同,D121℃分别为1.5、1.3 min和2.1 min,Z值分别为8.6、7.9℃和8.3℃;嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在同一温度同一基质中耐热性稳定,D值重现性好,可作为低酸性饮料杀菌指示菌。     

不同芽孢杆菌对烟株根际土壤细菌群落及根结线虫防控效果的影响

为筛选出可有效防治烟草根结线虫的微生物菌剂,选用3株不同种类的芽孢杆菌（B3蜡样芽孢杆菌、B9蜡样芽孢杆菌和S2蕈状芽孢杆菌）微生物菌剂施于烟田,利用宏基因组测序技术分析了不同芽孢杆菌对烟株根际土壤细菌群落的影响及其对根结线虫的防控效果。结果表明,芽孢杆菌可增加土壤中细菌种数,且施用B3蜡样芽孢杆菌的土壤中细菌种数最多。相比施用清水（对照）,B3蜡样芽孢杆菌能增加土壤中有益菌门硝化螺旋菌门（Nitrospirae）、有益菌属贪噬菌属（Variovorax）和罗思河小杆菌属（Rhodanobacter）的丰度,B9蜡样芽孢杆菌能增加有益菌属亚硝化螺菌属（Nitrosospira）的丰度,S2蕈状芽孢杆菌能增加有益菌属红假单胞菌属（Rhodopseudomonas）、中慢生根瘤菌属（Mesorhizobium）的丰度。假单胞菌科（Pseudomonadaceae）对根结线虫的防治有益,且在B3蜡样芽孢杆菌处理中其丰度显著高于对照。3种芽孢杆菌对烟株根结线虫病害均有一定的防治效果,但B3蜡样芽孢杆菌的效果最好。      

生孢梭菌芽孢萌发条件的优化

本文研究了不同温度、时间和pH值条件下,生孢梭菌芽孢萌发所需的最佳条件.本研究将活化传代好的生孢梭菌菌液培养7 d,多次离心后,加入无菌水制成生孢梭菌芽孢悬浮液,处理温度为70℃～90℃,处理时间为5～25 min,处理pH值为4～8,用平板计数法观察计算不同条件处理后的芽孢萌发率,用响应面优化法对影响生孢梭菌芽孢萌发...     

产气荚膜梭菌芽孢萌发剂筛选及其萌发特性研究

目的 研究产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)芽孢的萌发特性。方法 本研究以C.perfringens芽孢为研究对象,研究L-丙氨酸、L-谷氨酰胺、L-赖氨酸、L-天冬酰胺(L-asparagine)、氯化钾(KCl)、钙离子与2,6-吡啶二羧酸(pyridine-2,6-dicarboxylic acid,DPA)的螯合物(a chelate of Ca2+with DPA,Ca²⁺-DPA)、十二烷胺、L-asparagine和KCl的混合物(a mixture of L-asparagine and KCl,AK)、L-asparagine、D-葡萄糖、D-果糖和KCl的混合物(a mixture of L-asparagine,D-glucose,D-fructose and KCl,AGFK)、脑心浸液肉汤(brain heart infusion broth,BHI) 10种萌发剂对芽孢萌发的影响,选取处理后芽孢DPA释放量、热抗损失、芽孢溶液吸光度(optical density at 600 n...     

凝结芽孢杆菌发酵乳的工艺优化

该研究对凝结芽孢杆菌发酵乳生产工艺进行了优化。以凝结芽孢杆菌13002、保加利亚乳杆菌CGMCC 1.290、嗜热链球菌CGMCC 1.2741共发酵的新型发酵乳为研究对象,以不同菌种复配比、菌种接种量、发酵基低聚果糖添加量进行单因素实验,再以感官评分为响应值,通过Box-Behnken中心组合建立数学模型研究发酵乳的最佳生产工艺。结果表明,菌种复配比（凝结芽孢杆菌：（嗜热链球菌:保加利亚乳杆菌=1:1））3:1、低聚果糖添加量1.50%、接种量1.50%为最佳工艺条件。在该优化条件下,测定发酵乳的平均滴定酸度值为90.59,与模型预测酸度值（93.25）拟和率达97.15%,说明此凝结芽孢杆菌发酵乳具有一定的竞争优势,为新型发酵乳研发提供理论基础和拓展思路。     

胀桶番茄酱中腐败微生物的分离及鉴定

为了研究胀桶番茄酱中腐败微生物种类,采用梯度稀释法、选择性培养法和划线纯化法对番茄酱中主要的腐败微生物进行分离纯化,利用形态学特征观察、16S rDNA和ITS序列分析,并结合生理生化性质对分离菌株进行鉴定。结果显示编号为B001、B002、B003、B004的4株细菌有1株厚壁类芽孢杆菌(Paenibacillus cineris)、2株蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)和1株蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)。标号为F001的1株酵母为奥默毕赤酵母(Pichia kudriavzevil)。因此,胀桶番茄酱中的主要腐败微生物为厚壁类芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、蕈状芽孢杆菌和奥默毕赤酵母。     

提高固态发酵培养基灭菌效率的研究

为解决固态发酵培养基的灭菌拖尾问题,在分析固态培养基原料的杂菌污染情况的基础上,采用促进芽孢萌发的方法对培养基进行预处理。结果表明,在培养基中添加1.5%的100 mmol/L L-丙氨酸之后,经过65℃热激活20min的促芽孢萌发处理可以明显提高培养基的灭菌效率,消除拖尾现象,并且不影响菌种的培养质量。     

苏云金芽孢杆菌发酵上清液抑菌谱及稳定性

对苏云金芽孢杆菌Bt185和HD-1菌株发酵上清液中生物活性物质抑菌作用和稳定性进行了初步研究。采用牛津杯法测定发酵上清液中活性物质的抑菌活性,供试菌为草生欧文氏杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、普通变形球菌、谷氨酸棒状杆菌、乙型副伤寒杆菌、绿脓杆菌等9种细菌。结果表明,发酵上清液对9种细菌均具有不同程度的抑制作用,其对草生欧文氏杆菌的抑制性最强。发酵上清液对热、酸、紫外线照射和连续超声波刺激均较稳定;发酵上清液在50℃以上抑菌活性开始下降,在pH 3.0~9.0条件下抑菌活性稳定,紫外光照射2.5 h之内抑菌活性稳定,在连续360 W超声波条件下2 h之内抑菌活性稳定。     

UHT乳非商业无菌原因分析及质量控制

分析了UHT奶非商业无菌的原因。依据GB/T4789.26-2003和ATD细菌生化鉴定义对UHT奶进行检测及细菌鉴定。结果表明,同一品牌不同品种的6种UHT奶中,有5种为非商业无菌;分别检出蕈状芽孢杆菌短小芽孢杆菌。结论:UHT乳质量把关须从原料乳,生产工艺,生长环境控制。     

蛋清溶菌酶对枯草芽孢杆菌芽孢萌发的影响

研究了在不同培养温度下溶菌酶对枯草芽孢杆菌芽孢萌发的抑制作用.溶菌酶浓度为0.5mg/mL,采用胰蛋白胨大豆营养肉汤培养基进行培养,用稀释平板计数法测定36h内的生长曲线.结果表明:在33℃条件下添加溶菌酶的处理组的迟滞期比对照组延长了8h,传代时间延长了15min;在25℃条件下,处理组的迟滞期比对照组延长了10h,传代时间延长了12min.到达稳定期后,处理组的菌落总数始终低于对照组水平.在10℃条件下,对照组芽孢的萌发也经历了较长的迟滞期,传代时间延长至194min;但在36h内处理组始终没有观察到芽孢萌发后的指数生长期,芽孢一直处于被抑制的状态.研究结果表明,溶菌酶对枯草芽孢杆菌芽孢的萌发具有明显的抑制作用,而且在低温条件下溶菌酶仍然具有抑菌活性.     

利用重组大肠杆菌发酵甘油合成L-丙氨酸

本文探究以甘油为唯一碳源发酵合成L-丙氨酸的可行性。以删除了乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸、乳酸代谢产物合成途径的Escherichia coli B0016-050为出发菌株,用λpL启动子及其调控下的嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)来源的丙氨酸脱氢酶基因(ala D)替换B0016-050菌株染色体上丙氨酸消旋酶基因(dad X),获得温度控制型L-丙氨酸合成菌株B0016-060BC。菌株B0016-060BC以甘油为唯一碳源进行两阶段发酵(包括菌体生长阶段和L-丙氨酸合成阶段),表明在菌体生长至对数后期起始L-丙氨酸合成或者提高L-丙氨酸发酵阶段的通气量可提高L-丙氨酸合成水平。进一步经5 L发酵罐发酵,可合成63.64 g/L L-丙氨酸,整个发酵阶段体积生产强度达到1.91 g/L h、转化率达到62.89 g/100 g甘油,仅合成少量的乙酸(1.73 g/L)等副产物。实现了以甘油为唯一碳源高效合成L-丙氨酸,为工业应用提供了重要参考。     

利用重组大肠杆菌发酵甘油合成L-丙氨酸

本文探究以甘油为唯一碳源发酵合成L-丙氨酸的可行性。以删除了乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸、乳酸代谢产物合成途径的Escherichia coli B0016-050为出发菌株,用λpL启动子及其调控下的嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)来源的丙氨酸脱氢酶基因(ala D)替换B0016-050菌株染色体上丙氨酸消旋酶基因(dad X),获得温度控制型L-丙氨酸合成菌株B0016-060BC。菌株B0016-060BC以甘油为唯一碳源进行两阶段发酵(包括菌体生长阶段和L-丙氨酸合成阶段),表明在菌体生长至对数后期起始L-丙氨酸合成或者提高L-丙氨酸发酵阶段的通气量可提高L-丙氨酸合成水平。进一步经5 L发酵罐发酵,可合成63.64 g/L L-丙氨酸,整个发酵阶段体积生产强度达到1.91 g/(L·h)、转化率达到62.89 g/100 g甘油,仅合成少量的乙酸(1.73 g/L)等副产物。实现了以甘油为唯一碳源高效合成L-丙氨酸,为工业应用提供了重要参考。