两种分子标识在酵母分子鉴定中的比较

rDNA序列同源性分析是一种通用的酵母分子鉴定方法,26S rDNA D1/D2区域和rDNA内部转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)是rDNA序列同源性分析中最为常用的两种分子标识。同时使用这两种分子标识对20株分离自水果表面的酵母菌株进行分子鉴定,结果显示19株酵母分离物的鉴定结果相一致,两种分子标识序列在认定酵母种内和种间关系时都拥有足够的差异,能将大部分酵母菌株直接鉴定到种一级水平。      

两种分子标识在酵母分子鉴定中的比较

rDNA序列同源性分析是一种通用的酵母分子鉴定方法,26S rDNA D1/D2区域和rDNA内部转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)是rDNA序列同源性分析中最为常用的两种分子标识。同时使用这两种分子标识对20株分离自水果表面的酵母菌株进行分子鉴定,结果显示19株酵母分离物的鉴定结果相一致,两种分子标识序列在认定酵母种内和种间关系时都拥有足够的差异,能将大部分酵母菌株直接鉴定到种一级水平。     

鉴定乳制品中厌氧芽胞杆菌的3种方法比较

鉴定乳制品中的革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌。方法 采用生化鉴定、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rDNA测序三种方法,对乳制品中5株革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌进行鉴定。结果 生化方法鉴定出3株菌,而飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序法对5株菌都给出了鉴定结果。3种方法仅对其中1株菌的鉴定结果一致;飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序的鉴定结果一致性程度高,共有4株菌的鉴定结果一致;而生化方法的鉴定结果与这两种方法差异较大。结论 飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序可作为生化方法的补充,用于革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌的快速鉴定。     

多点位分型技术在婴幼儿配方乳粉中克罗诺杆菌的鉴定与溯源中的应用

克罗诺杆菌属是肠杆菌的独立新属,即阪崎肠杆菌属。传统的分子分型方法如随机扩增多态性DNA标记(RAPD)不能将克罗诺杆菌鉴定到种,且辨识度较低、重复性不高、容易混淆,而近几年发展较快且更高效快捷的分型方法多位点序列分型(MLST),能清晰地分辨出克罗诺杆菌每个基因的差别。对婴儿配方乳粉工厂的克罗诺杆菌属进行分子分型研究,并对克罗诺杆菌属的鉴定和溯源,在婴幼儿配方乳粉企业在克罗诺杆菌属在监控、预警、控制方面具有重要意义。选取具有代表性的婴儿配方乳粉中分离菌株24株,经API20E试剂条鉴定为克罗诺杆菌属,再经过MLST分型找出其中有22株有克罗诺杆菌ST分型,其中19株属于C.sakazakii,2株属于C.turicensis,1株属于C.dublinensis。通过构建进化树能清楚地识别进化关系和亲缘关系,能够很好地定种和追根溯源。     

婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌污染调查及分子分型研究

目的了解温州市市售婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌污染情况及分子分型特征,分析不同菌株间亲缘相关性。方法参照GB 4789.40—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》方法在食品中分离鉴定克罗诺杆菌。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对克罗诺杆菌进行分型研究。结果 2013—2017年共采集737份婴幼儿食品和配方奶粉,克罗诺杆菌总检出率为6.1%(45/737)。其中婴幼儿谷类辅助食品检出率最高(23.4%,37/158)。45株克罗诺杆菌属于阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)、丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus)和莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。其中阪崎克罗诺杆菌最多(73.3%,33/45),其次为丙二酸盐克罗诺杆菌(24.4%,11/45)。MLST共分为25个ST型,其中ST64、ST1、ST40、ST4和ST7为优势型别。45株克罗诺杆菌PFGE分型得到38个带型,未发现有明显的优势分型和聚集现象。PFGE型和MLST型结果分析表明,绝大数具有相同PFGE型的菌株也有相同的MLST型,而相同MLST型却不一定具有较高的亲缘关系。结论温州市市售婴幼儿食品和配方奶粉中克罗诺杆菌的污染状况较轻,其中婴幼儿谷类辅助食品检出率最高。食品来源的克罗诺杆菌图谱具有高多态性和离散性。     

蜡样芽孢杆菌ERIC-PCR分子分型方法的建立

为建立简单快速的蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)的分子分型方法,该研究以B.cereusCMCC 63303的基因组DNA为模板,并采用正交设计L16(45)对影响ERIC-PCR反应体系的五个因素(模板DNA、Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物)在四个浓度水平上进行优化,并通过单因素试验确定最佳退火温度,最后以优化后的反应体系对50株B.cereus分离株进行ERIC-PCR分子分型和聚类分析验证其稳定性和分型效果。结果显示应用建立的ERIC-PCR反应体系对50株分离株扩增均得到了9-17条、大小在200-4000 bp之间的条带,并可将其分为47个型,且分辨力达到0.996,具有较高稳定性和分辨能力。表明ERIC-PCR技术对B.cereus分型,具有简便和分辨力高等优点,可用于食源性B.cereus分离株的多样性研究。     

市售婴幼儿米粉中克罗诺杆菌的分子分型和耐药分析

为了解婴幼儿配方米粉中克罗诺杆菌的污染情况、分子分型特征及耐药性情况,采集广西区内市售6个厂家和品牌不同配方的婴幼儿米粉进行克罗诺杆菌分离及fusA基因的扩增、测序和MLST数据库比对分析。并应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对菌株进行分型鉴定及微量肉汤稀释法测定分离株对8种常见抗生素的最小抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentrations,MICs）。采集的268份婴幼儿米粉共分离到32株克罗诺杆菌,检出率为11.94%,菌株鉴定结果显示32株分离株包括22株C.sakazakii、6株C.malonaticus、3株C.dublinensis和1株C.muytjensii。不同添加成分的婴幼儿配方米粉污染情况差异明显,其中添加淮莲和果蔬的米粉污染率最高为17.78%和15.38%。PFGE分析显示32个菌株共分成32种不同的分子型,相似度为61.20%~92.30%,所有分离株对环丙沙星、庆大霉素和头孢噻肟都敏感,部分菌株（6.25%~43.75%）对氯霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲基异恶唑、头孢西丁和萘啶酸表现为中等敏感,有2个菌株对氯霉素表现为抗性。结果表明市售婴幼儿配方米粉中存在一定的克罗诺杆菌污染,尤其是添加营养成分的米粉。婴幼儿配方米粉中克罗诺杆菌污染来源广泛,部分菌株对一些抗菌药表现为中等敏感甚至是抗性,提示克罗诺杆菌对抗菌药的敏感性呈现减弱的趋势。     

基于RFID技术构建乳制品溯源系统的初步研究

基于无线射频识别(Radio Frequency Identification,RFID)技术来初步构建乳制品的溯源系统。利用RFID技术能够自动识别、精准且快速采集和储存实时信息等特点,对乳制品生产销售整个过程进行详细的追溯管理,从而做到能在乳制品发生安全风险时快速找到源头,追究责任,实现对乳制品重大安全风险进行预警并控制,能够及时避免发生重大食品安全事故。     

学生宿舍和食堂环境中克罗诺杆菌污染状况及分子分型和耐药特征分析

目的 了解徐州市某学校学生宿舍和食堂环境中克罗诺杆菌污染状况、分子分型及耐药特征,为预警食源性克罗诺杆菌病暴发提供参考.方法 采集徐州市某学校学生宿舍和食堂环境样品156份,分离并鉴定克罗诺杆菌,并利用基于O-抗原的血清分型和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对分离株进...     

3 种发酵乳制品流变性质的比较与分析

用流变仪分析评价发酵乳制品的流变学特性。分别测定以牛乳和豆乳以及二者的混合乳为原料制备的3种发酵乳制品的流变学特性。结果表明：3种发酵乳制品均是正触变性流体,其滞后环面积之比为1:0.56:0.69。黏丝性指数之比为1:0.63:0.91;恒温恒速下表观黏度初始值之比分别为1:0.99:1.28,发酵豆乳表观黏度下降速率最慢;应变扫描中发现3种发酵乳制品的稳定性从高到低依次为：发酵豆乳、发酵混合乳和发酵牛乳;在温度扫描中发现发酵豆乳耐温度变化的能力最强,发酵混合乳的表观黏度值最高。通过比较三者的流变学特性说明发酵牛乳的稳定性较差,发酵豆乳的表观黏度值较低,但其稳定性较好。发酵混合乳不仅表观黏度值较高,而且其稳定性也高于发酵牛乳。     

三种基因分型技术对一起食物中毒事件的分析比较

分别应用ERIC-PCR、PFGE和Sau-PCR方法对一起食物中毒事件中分离自患者和食物的5株福氏志贺氏菌进行溯源分析.结果3方法显示5株菌的指纹图谱均一致,证明患者是由于食用了被志贺菌污染的食物而致病.其中ERIC-PCR操作最简便,但重复性较差;PFGE是"金标准",但设备昂贵,技术要求高,且不能高通量分析;新发展的Sau-PCR不仅易操作,而且结果稳定,便于在流行病学研究中的推广应用.     

2018年江西省婴幼儿食品中克罗诺杆菌污染状况及分子分型和耐药特征分析

目的 了解2018年江西省婴幼儿食品中克罗诺杆菌的污染情况、分子分型及耐药特征,为市售婴幼儿食品致病菌的溯源积累数据并为临床用药提供参考数据。方法 共采集市售婴幼儿食品337份,按照GB 4789.40—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》方法进行分离和鉴定,并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法对分离株进行验证,采用微量肉汤稀释法和脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行药敏试验和分子分型试验。结果 168份婴幼儿配方奶粉中未检出克罗诺杆菌;169份婴幼儿谷类辅助食品中有24份检出克罗诺杆菌(24株),阳性率为14.2%。药敏试验显示,24株分离株共对8种抗生素耐药,头孢唑啉(62.5%,15/24)和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(29.2%,7/24)耐药率较高,全部菌株均对环丙沙星和亚胺培南敏感,其中1株分离株最高耐7种抗生素。PFGE结果显示分离株共有22种分子型别,相似度为46.6%～100.0%。结论 2018年江西省婴幼儿食品中克罗诺杆菌的污染情况与国内部分地区相似,克罗诺杆菌在婴幼儿谷类辅食中普遍存在,分离菌株对一、二代头孢菌素呈现不敏感趋势,PFGE型别高度多样化。     

PubMLST数据库克罗诺杆菌中外分离株的分型比较

为了解中国与全球其他地区克罗诺杆菌（Cronobacter）分离株的差异,从PubMLST数据库下载具有完整序列型（ST）的菌株信息进行分离源、种、序列型及克隆复合体（CC）分析,并深入分析国内外食品及临床分离株。结果显示,具有完整ST型的中国克罗诺杆菌分离株（907株）最多,来源主要是婴儿配方奶粉、香料和即食食品。克罗诺杆菌中国分离株具有高度遗传多样性,我国的食品分离株（580株）中,CC4和CC7型菌株占比较高;但我国及其他东亚和南亚国家都没有临床株的信息。我国分离株明确致病型信息与欧美国家的差异较大,仅ST256（1株）、ST60（2株）、ST83（2株）与新生儿脑膜炎相关,欧美国家则主要包括ST4、ST1、ST12、ST7,说明我国的克罗诺杆菌与其他国家地域的菌株在系统进化和毒力可能具有差异,或与克罗诺杆菌的感染对象-人种的差异有关。     

两种酪胺磁性分子印迹聚合物的制备及比较

以酪胺为模板分子,分别以羧基化葡聚糖和硅烷偶联剂修饰的磁性纳米粒子为载体成功合成两种酪胺磁性分子印迹聚合物(dex-MMIPs和MPS-MMIPs)。通过透射电子显微镜(TEM)和傅里叶变换红外光谱(FT-IR)结果表明,两种磁性纳米粒子均成功制备。动态吸附中dex-MMIPs在20 min左右达到吸附平衡,而MPS-MMIPs在60 min左右达到吸附平衡,通过对静态吸附实验结果进行Scatchard分析,得到Q_m分别为7.4、6.4 mg·g^-1。以上结果证明以羧基化葡聚糖修饰的磁性纳米粒子为载体合成的dex-MMIPs在吸附性能,传质效率要优于MPS-MMIPs。     

一种基于PCR技术的沙门氏菌血清分型试剂盒与传统血清分型方法比较

目的 评估一种基于PCR技术的沙门氏菌快速血清分型试剂盒效用,并与传统血清学分型鉴定方法进行对比,为研究人员提供一种更高效、简便的沙门氏菌血清学鉴定分型方法。方法 从本实验室菌株库中选取59株沙门氏菌,分别采用沙门氏菌血清分型PCR试剂盒和传统血清凝集法对所有菌株进行分型鉴定,比对两种分型方法的符合率。结果 59株沙门氏菌均通过传统血清凝集方法完成分型,分型率100%。59株菌株均通过沙门氏菌血清分型PCR试剂盒成功分型,分型率100%,两种方法鉴定沙门血清型符合率100%。结论 沙门氏菌血清分型PCR试剂盒能达到较高的分型率,大大缩短检测时间,减少常规血清分型的工作量及昂贵的血清消耗,节约成本,可以作为一种沙门氏菌快速血清分型方法进行应用。     

离心分离机在乳制品生产上的应用

叙述了离心分离机的原理、结构,牛奶的分离过程和影响分离效果的因素,同时介绍了离心分离机在乳制品加工中的应用.     

两种方法测定食品中蜡样芽胞杆菌含量的比较

比较两种方法测定食品中蜡样芽胞杆菌含量的结果有无差异,并分析两种方法的优缺点。采用选择性培养基甘露醇卵黄多黏菌素(MYP)琼脂平板倾注法与涂布法,对含一定浓度蜡样芽胞杆菌检验菌悬液以及加菌样液的进行计数。结果显示,两种方法计算检验菌悬液以及加菌样液含量的检验结果在统计学上并无显著差异(p值均大于0.05)。因此采用平板倾注法测定食品中蜡样芽胞杆菌具有快速、简便的优点。在实际检测工作中,应该根据需要,可考虑使用倾注法替代涂布法进行蜡样芽胞杆菌的检测。     

离心分离机在乳制品生产上的应用

叙述了离心分离机的原理、结构,牛奶的分离过程和影响分离效果的因素,同时介绍了离心分离机在乳制品加工中的应用。      

分子分型技术在乳酸菌鉴定及多态性研究中的应用

分子分型技术迅速发展与革新已在乳酸菌鉴定及多态性研究方面得到广泛应用。研究发现,遗传变异是产生乳酸菌多态性的根本原因,对遗传变异的检测与分析有助于人们从分子层面理解乳酸菌的各种生物学现象;分子分型及其与表型特性的相关性为我们解释遗传变异提供了丰富的材料。基于基因或DNA基础的分子分型技术(如16S rRNA,RAPD,PCR-PFLP,AFLP等)常被用于乳酸菌的分类鉴定、多态性分析、生态学研究及进化研究等。近几年,随着分子生物学技术的进步,这些常规的分型技术体系逐渐得到发展和完善,它们的优缺点及应用范围也被人们所掌握。本研究概述了几种常用于乳酸菌分类鉴定及多态性研究的分子分型技术(16S rRNA,16S-23S rRNA,RAPD,PCR-PFLP,PFGE,AFLP,rep-PCR),并对这些技术的原理、方法、优缺点及其近几年在乳酸菌研究中的应用进行了介绍。