牙鲆肌肉赖氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究

通过DEAE-Sephacel阴离子葡聚糖纤维素交换层析,Phenyl Sepharose6-Fast Flow苯基葡聚糖凝胶疏水层析和DEAE Sepharose-Fast Flow阴离子葡聚糖凝胶交换层析,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)肌肉中分离纯化得到1种赖氨酸氨肽酶,并对其生化性质进行研究。牙鲆赖氨酸氨肽酶的分子质量约为100 ku。该酶的最适温度45℃,最适pH 7.5,二价金属离子对酶活性有较大影响,EDTA和EGTA等金属螯合剂对其活性有抑制作用。该酶对荧光合成底物Lys-MCA分解作用最强,而对内肽酶对应的荧光底物没有分解作用。免疫印迹反应结果显示,该酶与鲤鱼肌肉中亮氨酸氨肽酶同源性较高,并在牙鲆多种器官中均有分布。     

毛霉亮氨酸氨肽酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析、凝胶层析及超滤方法对毛霉胞外蛋白酶组分进行分离纯化,从毛霉的发酵麸曲中分离纯化得到氨肽酶组分,并对其性质进行探讨。结果表明：纯化的毛霉氨肽酶是亮氨酸氨肽酶,其对小肽N端的亮氨酸有非常强的水解活性;该氨肽酶在40℃、pH6.5有最大催化活性,在40℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所实验的几种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、E-64、Pepstatin A)中,仅EDTA可以完全抑制该氨肽酶的活性,由此说明,纯化的毛霉氨肽酶是一种金属蛋白酶;常见的金属离子中,Ca2+对该氨肽酶有激活作用,而Zn2+、Cu2+及Mn2+对其有强的抑制作用;该氨肽酶对大豆多肽的苦味有明显的去除效果,大豆多肽脱苦处理4h后其苦味基本消除。     

毛霉AS3.2778脯氨酸氨肽酶的部分纯化及性质研究

毛霉蛋白酶对大豆蛋白有较高的水解效率并对蛋白水解物有良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,实验中P采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析及凝胶层析等方法对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉AS3.2778的发酵麸曲中部分纯化得到一氨肽酶组分,并对其性质进行了探讨。纯化的毛霉氨肽酶是一典型的脯氨酸氨肽酶,它对小肽N端的脯氨酸有非常强的水解能力;该氨肽酶在40～45℃、pH6.5有最大催化活性,在30℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所试验的几种蛋白酶抑制剂中,仅1 mmol/L的苯甲基磺酰氟(PMSF)对毛霉氨肽酶有抑制作用,由此说明纯化的毛霉氨肽酶可能是一种丝氨酸蛋白酶;常见金属离子对该氨肽酶活性的影响不明显;脱苦实验结果表明,纯化的毛霉氨肽酶对于大豆蛋白水解物的苦味有明显的去除效果。     

一种枯草芽孢杆菌氨肽酶的纯化及酶学性质

利用乙醇分级沉淀(37.5%～60%)、SephadexG75凝胶过滤、Phenylsepharose6FF疏水色谱三步分离使一种枯草芽孢杆菌氨肽酶得到纯化,比活1.5567×106U/mg;SDSPAGE鉴定为纯酶,分子质量75ku,全酶含2个亚基。纯酶最适温度60℃,温度稳定范围20～70℃。最适pH8.5,pH稳定范围8.0～10.0。Zn2+、Ni2+有较大的抑制作用,Co2+则对酶活有较强的激活作用。酶活性中心可能结合了2个Zn2+,米氏常数Km为1μmol/L,最大反应速度Vmax为5000μmol/(L·min)。     

牡蛎糖原的研究(Ⅰ)--牡蛎糖原的分离提取和化学组成

用热碱法提取牡蛎中的糖原，经纯化后得到几乎不含有蛋白质的糖原样品。凝胶过滤色谱结果表明，牡蛎糖原相对分了质量在数百万至数千万之间。气相色谱测定结果表明，牡蛎糖原只含有葡萄糖残基，是一种均一多糖。     

牡蛎血浆及其纯化蛋白抗氧化活性研究

用配有针头的注射器从牡蛎的闭壳肌静脉窦抽取血液,低温条件下离心所得上清液即为牡蛎血浆。上清液经95%硫酸铵沉淀后通过凝胶过滤法分离提纯获得一种小分子蛋白质,SDS-PAGE电泳为单一带,相对分子质量约为15ku。牡蛎血浆及其纯化后蛋白均具有一定的还原能力和清除超氧阴离子自由基的能力,并在30～50℃温度下具有良好的稳定性。     

牡蛎蛋白的纯化及酶解条件的研究

本文利用(NH4)2SO4分级沉淀,透析脱盐,DEAE52纤维素柱层析对牡蛎蛋白质进行分离纯化,通过SDS凝胶电泳可知,55%饱和度的(NH4)2SO4沉淀可获得以牡蛎特征蛋白为主的纯化蛋白,其分子量约为55kD.在酶解实验分别采用胃蛋白酶、胰蛋白酶来进行,考察不同条件对水解度的影响.结果是胃蛋白酶酶解的最适酶用量为3%,pH2,温度40℃,水解时间5h,料水比为1:4;而胰蛋白酶的最适酶用量为2%,pH8,温度45℃,水解时间6h,料水比为1:3.     

牡蛎肽的提取纯化及生物活性研究进展

牡蛎蛋白中含有丰富的生物活性肽,研究发现这些生物活性肽具有多种生理调节功能,包括抗氧化、抗高血压、促进儿童生长发育、改善男性生殖功能等生物活性.文章介绍了国内外提取纯化牡蛎肽的相关技术,比较了它们之间的差异性,并对牡蛎肽的生物活性以及应用现状进行了概述.     

牡蛎过敏原肌浆钙结合蛋白的分离纯化和鉴定

利用质谱鉴定从太平洋牡蛎肌浆里提取的单一蛋白,通过免疫印迹分析诱导表达的重组蛋白和之前已鉴定的天然蛋白的分子质量一致性,利用圆二色光谱分析两蛋白在二级结构上的一致性,鉴定牡蛎肌浆钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein,SCP)糖蛋白类型并测定其多糖含量.结果表明,从牡蛎粗提...     

牡蛎糖原的研究(I)——牡蛎糖原的分离提取和化学组成

用热碱法提取牡蛎中的糖原,经纯化后得到几乎不含有蛋白质的糖原样品。凝胶过滤色谱结果表明,牡蛎糖原相对分子质量在数百万至数千万之间。气相色谱测定结果表明,牡蛎糖原只含有葡萄糖残基,是一种均一多糖。     

海参自溶酶的分离纯化和部分性质研究

采用硫酸铵分级盐析 ,Sephadex 1 0 0分子筛柱层析从新鲜海参肠中分离纯化海参自溶酶。研究发现 ,所纯化的酶为酸性蛋白酶 ,分子质量约为 68 5ku ;最适作用温度为 3 5℃ ,对热不稳定 ;酶的最适作用pH为 7 0 ;金属离子Pb2 + 、Hg2 + 、Cd2 + 、Mn2 + 对酶的活性有抑制作用 ;Zn2 + 、Mg2 + 、Cu2 +则对酶有不同程度的激活作用     

罗汉果蛋白酶的分离纯化和部分性质研究

对罗汉果蛋白酶的分离纯化和部分性质进行研究.利用硫酸铵盐析、离子交换和凝胶过滤柱层析对罗汉果蛋白酶进行了分离纯化,对纯化所得的酶进行了分子量和等电点测定.结果表明,纯化酶为电泳纯,回收率为4.2％,纯化倍数为31.1,凝胶过滤层析和SDS-PAGE电泳测得酶的分子量分别为40.3 ku和39.0 ku,等电聚焦电泳测得其等电点为8.55.     

猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化和性质研究

通过离心、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Superdex-200层析等步骤,从猪脑中获得电泳纯乙酰胆碱酯酶,该酶比活力和纯化倍数分别为2.05 U/mg和26.97,酶活回收率为11.95%;该酶分子质量为257.30 kD,亚基为66.94 kD;以碘化硫代乙酰胆碱为底物时,酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH值为7.4,且在40 ℃以下,pH 6.0～8.0有较好的稳定性;最适底物浓度为4.0 mmol/L,Km为0.94 mmol/L。Ba2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,而低浓度Mg2+对该酶有激活作用。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

氨肽酶脱苦效果的研究

目的研究从豆腐乳中筛选到的一种枯草芽孢杆菌所产的氨肽酶脱除大豆蛋白质水解物苦味的效果。方法用高效液相色谱法和感官评定。结果1%的大豆蛋白质溶液经胰蛋白酶水解,水解液呈苦味,添加氨肽酶可较好地脱苦,水解液中游离氨基酸的总量增加了28.8%,疏水氨基酸的量也明显增加。结论枯草芽孢杆菌氨肽酶具有较好的脱苦效果。     

绿豆酸性磷酸酶的分离纯化和部分性质研究

从绿豆芽中提取酸性磷酸酶粗酶液。经分段盐析,DEAE-琼脂糖柱离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤后,得到经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带的酸性磷酸酶。提纯倍数为156.3,酶液比活力为347.0 U/mg。凝胶过滤法测定酶分子质量为34.6 ku,SDS-PAGE测定酶的亚基分子质量为33.1ku。证明绿豆酸性磷酸酶为单亚基酶。该酶最适pH为5.2 ku,最适温度为40℃。以pNPP作底物时Km为4.28×10-3mol/L。Mg2+、Co2+对酶有激活作用,而Hg2+,Cu2+,Pb2+和Zn2+对该酶有明显的抑制作用,依次为:Hg2+>Cu2+>Pb2+>Zn2+。K+,Ca2+对酶影响不明显。     

大鲵胃蛋白酶分离纯化及其性质的研究

通过研究大鲵胃蛋白酶,可以了解大鲵消化机能,同时为食品加工提供新的材料.经80％硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析以及HPLC,得到大鲵胃蛋白酶电泳纯制品.纯化倍数为239.87,回收率为4.4％,经SDS-PAGE测得该胃蛋白酶分子量为31ku,大鲵胃蛋白酶的最适温度是40℃,低于40℃稳定,当温度上升,活性迅速下降;最适pH为2,在pH2～6有很好的稳定性.EDTA、BrAc、NBS使该酶活性下降.以酪蛋白为底物,在pH2.0、40℃时测得米氏常数Km值为7.3×103mg/L,V…是2.674 μg/min.     

大鲵胃蛋白酶分离纯化及其性质的研究

通过研究大鲵胃蛋白酶,可以了解大鲵消化机能,同时为食品加工提供新的材料。经80%硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换层析、SephadexG-100凝胶过滤层析以及HPLC,得到大鲵胃蛋白酶电泳纯制品。纯化倍数为239.87,回收率为4.4%,经SDS-PAGE测得该胃蛋白酶分子量为31ku,大鲵胃蛋白酶的最适温度是40℃,低于40℃稳定,当温度上升,活性迅速下降;最适pH为2,在pH2～6有很好的稳定性。EDTA、BrAc、NBS使该酶活性下降。以酪蛋白为底物,在pH2.0、40℃时测得米氏常数Km值为7.3×103mg/L,Vmax是2.674μg/min。      

裂褶菌(Schizophyllu.commune)酯酶的分离纯化及酶学性质研究

酯酶（esterase,EC3.1.1.1）在食品工业应用广泛。裂褶菌（Schizophyllum commune）ZM37.8的发酵液经85%饱和度的硫酸氨沉淀、DEAE Cellulose52处理后分离纯化得到一种酯酶,该酶分子量大小约为41.2ku;最适反应温度为50℃,70℃保温30min酶活保留70%,有较好的热稳定性;最适作用pH为6.4,pH在5.4～7.4之间较稳定,有较好的耐酸性;Co2＋、Cu2＋、Zn2＋、Li＋、Hg2＋对酯酶有强烈的抑制作用,而Mn2＋、Ca2＋和Fe3＋对其的促进作用明显;该酯酶属于无底物特异性的非特异性酯酶。酶学性质研究表明该酯酶在食品工业有良好的应用前景。