澳洲坚果糖蛋白的分离纯化及其体外抗氧化能力

为充分利用澳洲坚果资源,采用弱碱水提法提取澳洲坚果脱脂粉中的糖蛋白,分别用DEAE-52阴离子交换柱和Sephadex G-100凝胶柱分离纯化,得到组分M-1,经紫外光谱扫描、红外光谱扫描和高效液相色谱等方法确定其结构,并评价其体外抗氧化活性。结果表明:M-1组分的分子质量为472 kDa,含有55.81%的多糖和34.13%的蛋白;红外扫描显示存在糖和蛋白的特征吸收峰;澳洲坚果糖蛋白的糖肽键主要为O-糖肽键;M-1的单糖组成主要是鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖,摩尔比为1∶2∶4∶6。M-1具有较好的抗氧化能力,当M-1质量浓度为10 mg/mL时,总还原力吸光值为0.286,DPPH自由基的清除率达到78.67%。     

大豆β-伴球蛋白脱糖基化及其酶解物抗原活性变化

大豆蛋白的抗原性是影响其食用安全性的重要因素。为了探讨大豆主要抗原蛋白β-伴球蛋白中的糖基化在其抗原反应中的地位和作用,本文用N-糖苷酶PNGase F对β-伴球蛋白脱糖基化处理后,脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在相同条件下用风味蛋白酶水解, 用SDS-PAGE电泳和专用β-伴球蛋白酶联免疫试剂盒分别测定了脱糖和未脱糖β-伴球蛋白在酶解过程中的蛋白质组分和抗原性变化。结果表明,β-伴球蛋白分子中不仅含有N-糖肽键连接,也有O-糖肽键连接。脱糖后β-伴球蛋白抗原活性降低到原来的60.1%;脱糖和不脱糖两种β-伴球蛋白及其酶解产物电泳谱带和抗原性变化均有显著差异。酶解180min时,β-伴球蛋白抗原活性下降为43.4%,脱糖β-伴球蛋白抗原活性仅剩25.0%。此结果揭示了糖链存在影响β-伴球蛋白抗原活性和酶解时的降解行为,为探讨有效消除大豆蛋白抗原性提供一定的理论基础。     

马铃薯淀粉汁水中Patatin的纯化及结构研究

马铃薯淀粉汁水经分离与纯化后得到马铃薯糖蛋白Patatin。通过对Patatin纯度、结构的测定与分析表明:Patatin纯度在90%以上,分子量为40.6 k Da。Patatin是糖和蛋白质的复合物。单糖组成为:鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。Patatin中含有α-糖苷键,糖苷类型为吡喃型;糖链和肽链之间由O-型糖肽键连接。Patatin的热变性温度为75℃。      

芸豆蛋白与糖基化芸豆蛋白结构与功能特性研究

方法:将芸豆蛋白与氨基葡萄糖进行糖基化反应,通过糖基化和辅助糖基化对芸豆蛋白结构修饰,研究其对功能性质的影响。目的:探讨糖基化蛋白功能性质与结构之间的关系。结果:糖基化改性使芸豆蛋白的溶解性、乳化性、起泡性均有明显改善,利用超声辅助糖基化芸豆蛋白和糖基化芸豆蛋白的溶解性、乳化性、起泡性分别提高了17.30%,10.10%,20.89%,12.59%,2.5%,1.25%;而泡沫稳定性、表面疏水性和热变性温度均有所降低,分别下降了14.23%,9.73%,280Ho,110Ho与3.1,1.95℃。与芸豆蛋白相比较,其二级结构上α-螺旋和β-折叠呈增加趋势,β-转角结构和无规则卷曲呈下降趋势。经糖基化处理的芸豆蛋白分子呈易结合状态,更易暴露蛋白质分子结构内部的结合位点。结论:通过对芸豆蛋白和改性芸豆蛋白的功能性质与空间构象的比较分析,明确糖基化处理可使蛋白质分子链内部外露,糖基化改性对芸豆蛋白二级结构主链有影响。这为制备芸豆蛋白特定产品以及分子设计和重组提供了依据。     

青刺果抗氧化肽的分离纯化、结构鉴定及其分子对接解析

采用超滤、强阴离子交换层析法分离并纯化青刺果蛋白酶解物,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除率为评价指标,筛选具有较好抗氧化活性的肽组分。通过LC-MS/MS鉴定肽序列,结合生物信息学方法分析其理化特性,并进一步利用红外光谱、分子对接技术解析其二级结构特征及与Keap1蛋白的对接位点。研究结果表明,分离得到的4个组分中F-1组分具有更好的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率达到27.67%。选择活性更高,且分子质量小于1 kDa的肽组分,测定得到的3条肽(TALDVPPPR、TLSDAGVGGL和DLINGGKDA)的DPPH自由基清除率,其IC₅₀值分别为0.43、0.83、0.51 mg/mL,其中TALDVPPPR的抗氧化活性相对较高。二级结构分析结果表明,3条抗氧化肽均由α-螺旋、β-折叠和β-转角构成,其中TALDVPPPR的α-螺旋含量相对较低,使其更易与自由基结合。分子对接结果显示,TALDVPPPR、TLSDAGVGGL、DLINGGKDA以氢键和疏水作用与Keap1蛋白...     

糖基化对大豆7S球蛋白凝胶流变性质的影响(Ⅱ)

基于Maillard反应的机理,采用干热法分别制备出β-伴大豆球蛋白和不同分子量葡聚糖(67 kDa、150 kDa、500 kDa)的三种糖基化产物,从大豆7S球蛋白的热致凝胶性质出发,通过对不同链长糖基化产物的流变学性质和微观结构的研究,研究糖基化对于大豆7S球蛋白热致凝胶的影响机理,结果显示,葡聚糖以非共价键接入蛋白质肽链和以共价键接入的糖链所起的空间位阻作用给予大豆7S球蛋白热致凝胶体系的作用机制不同,并且以共价键结合的葡聚糖能够和蛋白质分子均匀的分布在凝胶网络结构中,不会引起相分离。     

3种己糖糖基化修饰对豌豆蛋白结构和抗氧化活性的影响

目的 探究3种己糖糖基化修饰对豌豆蛋白结构和抗氧化活性的影响。。方法 通过自由氨基含量测定、内源荧光及表面疏水性变化、ABTS+·清除能力、DPPH·清除率、Fe2+螯合能力和超氧阴离子自由基清除能力分析研究豌豆蛋白糖基化产物的结构和 抗氧化活性。结果 经糖基化处理后,豌豆蛋白的自由氨基含量降低,空间结构发生改变,其中以半乳糖制备的豌豆蛋白糖基化产物（Pea protein-galactose conjugated compound,PP-gal）糖基化程度最大。就抗氧化性而言,PP-gal具有更好的ABTS+·清除能力、DPPH·清除率、Fe2+螯合能力和超氧阴离子自由基清除能力,即抗氧化活性最强。结论 本研究可为具有良好抗氧化活性的豌豆蛋白制备提供参考。     

澳洲坚果叶片酚类物质提取及抗氧化活性研究

以新鲜澳洲坚果叶片为原料,以总酚提取量为考察指标,利用传统溶剂浸提法结合正交试验优化澳洲坚果叶片酚类物质提取工艺条件;以水溶性维生素E(Trolox)为阳性对照,评价其体外抗氧化活性。正交试验结果表明:澳洲坚果叶片酚类物质最佳提取工艺条件为:乙醇浓度40%,提取温度60℃,料液比1∶60(g/mL),提取时间25 min,在此条件下,澳洲坚果叶片总酚提取量为1 176 mg/100 g。抗氧化试验结果表明:澳洲坚果叶片总酚与Trolox对DPPH自由基的半数清除率IC50分别为7.23、10.15 mg/L;当澳洲坚果叶片总酚浓度和Trolox浓度均为200 mg/L时,FeSO4当量浓度分别为2.40、1.72 mmol/L。由此可知,澳洲坚果叶片酚类物质具有较强抗氧化活性。     

不同分子质量的人参糖肽复合物增强小鼠免疫功能的研究

研究不同分子质量的人参糖肽复合物对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的影响。制备人参糖肽总提取物并采用膜分离技术得到重均分子质量为14、11 kDa和<1 kDa的3种人参糖肽,构建BALB/c小鼠注射环磷酰胺致免疫低下动物模型,通过小鼠碳廓清实验、小鼠迟发型变态反应以及外周白细胞总数及自然杀伤细胞(natural killer cell, NK)活性测定实验,对人参糖肽总提取物及不同分子质量的人参糖肽增强小鼠免疫力功能进行评价。结果显示,人参糖肽总提取物及不同分子质量的人参糖肽均具有增强细胞免疫功能、提高单核-巨噬细胞吞噬功能和提升NK细胞活性的作用,<1 kDa的人参糖肽对细胞免疫和增强NK细胞活性有较好的作用,而14 kDa的人参糖肽对改善巨噬细胞吞噬功能有较好的作用。综上所述,人参糖肽复合物以及14、11 kDa和<1 kDa的人参糖肽均具有提高小鼠免疫力的作用,且分子质量较低的人参糖肽复合物作用更明显,可作为开发增强免疫力作用的药品或保健食品的潜在功效成分。     

澳洲坚果青皮多酚提取工艺优化及其抗氧化活性

以新鲜澳洲坚果青皮为原料,研究了澳洲坚果青皮多酚的提取工艺及抗氧化活性。在单因素实验的基础上,通过4因素3水平的正交实验优化澳洲坚果青皮多酚提取工艺,并以Trolox为对照,研究其对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力以及总抗氧化能力。正交实验结果表明:提取时间为90 min、料液比为1∶50（g/m L）、提取温度为50℃、乙醇体积分数为40%为最佳提取工艺条件,在此条件下澳洲坚果青皮多酚提取量达到（1027.47±10.76）mg/100 g。抗氧化实验结果表明:澳洲坚果青皮多酚对DPPH自由基和ABTS+自由基的半数清除率IC50分别为4.13、112.94 mg/L,且其总抗氧化能力约为Trolox的1.7倍。由此可知,澳洲坚果青皮多酚具有很强的抗氧化能力,可用于制备天然抗氧化剂。      

澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽（macadamia nut peptide-0,MNP-0）,以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201-C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明：超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP-4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP-4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽（macadamia nut purified peptide,MPP）组...     

糖链长度对于大豆7S球蛋白糖基化产物构象及乳化特性的影响

本文研究了3种糖链长度的葡聚糖和大豆7S球蛋白的糖基化产物,分析糖链长度对Maillard反应程度、产物构象和产物乳化性方面的影响机制,研究显示,分子量在67~150 u范围的葡聚糖反应程度明显高于分子量为500 u葡聚糖和蛋白质的糖基化反应;以共价键形式结合入蛋白质肽链的葡聚糖,不会改变大豆7S球蛋白二级结构的主要结构（β-结构）,主要增加了蛋白质二级结构中的无规则卷曲结构,三级结构中,随着糖链的延长,较大程度地屏蔽掉近紫外区有信号的芳香族氨基酸圆二信号,尤其是苯丙氨酸特征信号逐渐减少;随着糖链的延长,糖基化产物的空间位阻效应增加,乳化性逐渐提高,分子量为500 u葡聚糖链长与另外两种相差比较大。     

绿豆蛋白酶解物抗氧化活性与其结构、氨基酸组成的相关性

本试验以碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶四种不同来源的蛋白酶酶解绿豆蛋白,测定酶解物的抗氧化能力,结合傅里叶红外光谱技术（FTIR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、圆二色谱（CD）以及氨基酸分析仪,分析酶解物的氨基酸组成以及抗氧化活性与结构变化的相关性。结果表明,绿豆蛋白4 h中性蛋白酶酶解物抗氧化能力最强,其DPPH自由基清除率、羟自由基清除率分别达到71.03%、51.94%,TBARS值达到0.4045 mg/L,Fe2+螯合率达到52.31%;结合SDS-PAGE、FTIR、CD等分析得出:绿豆蛋白酶解物的抗氧化能力与其分子量大小、二级结构构象及氨基酸组成变化紧密相关,与绿豆蛋白相比,绿豆蛋白酶解物的α-螺旋结构含量增加了4.12%、β-折叠结构含量降低了19.99%,而抗氧化活性与其α-螺旋含量的增加、β-折叠含量的降低密切相关;影响抗氧化活性的疏水氨基酸增加了0.208 g/100 g,芳香氨基酸增加了0.207 g/100 g,分子量低于10 kDa的小分子量酶解物具有更好的抗氧化性。综合以上研究结果证实绿豆蛋白酶解物活性与其α-螺旋、β-折叠的相关性较大。     

糖基化对罗非鱼皮胶原蛋白肽热滞活性及结构特征的影响

为提高罗非鱼皮胶原蛋白肽作为绿色抗冻剂的实用性,采用湿法糖基化反应对其热滞活性进行改良。以糖基化接枝度为指标,利用正交试验对糖基化反应进行工艺优化,并对糖基化前后胶原蛋白肽的热滞活性及结构特征进行比较分析。结果显示,罗非鱼胶原蛋白肽葡萄糖糖基化最佳工艺为温度70℃、胶原蛋白肽质量浓度90 g/L、糖肽比4∶1、反应时间90 min,该条件下糖基化接枝度达(52.06±1.50)%;与胶原蛋白肽相比,糖基化产物的热滞活性上升了1.1℃,提高47.8%,冰晶含量降低29.94%,属于“极度活跃”抗冻肽;糖基化后胶原蛋白肽的质荷比由300～700变化为400～800,二级结构的大部分β-转角转变为β-折叠,且增加了羟基的含量。葡萄糖糖基化对罗非鱼皮胶原蛋白肽的热滞活性具有显著的增强作用,葡萄糖糖基化罗非鱼皮胶原蛋白肽具有开发成新型、高效绿色抗冻剂的潜力。     

不同分子质量葡聚糖对玉米醇溶蛋白糖基化产物结构和功能性的影响

采用湿热法将玉米醇溶蛋白（Zein）与不同分子质量（6、20、40、70 kDa）的葡聚糖（dextran,DX）制备成Zein-DX糖基化产物,探讨不同分子质量DX对Zein糖基化产物结构和功能性的影响。随着DX分子质量的增加,Zein-DX糖基化产物的接枝度和褐变强度降低,说明低分子质量DX更容易与Zein发生糖基化反应,且糖基化产物具有更高的溶解度和更低的表面疏水性。糖基化反应能够提高Zein的乳化活性（emulsifying activity index,EAI）和乳化稳定性（emulsifying stability index,ESI）,随着DX分子质量的增加,Zein-DX糖基化产物的EAI逐渐降低,ESI逐渐增加。此外,高分子质量DX的共价结合能够使Zein的二级结构由有序的α-螺旋结构转变为无序的β-折叠和无规则卷曲结构,导致蛋白质构象变得更加灵活和松散。     

基于生物质谱技术解析食源性糖蛋白糖基化位点的研究进展

糖蛋白作为生物体内重要的生物大分子,参与细胞的识别、粘着及迁移,并调控细胞的增殖及分化。目前已有大量研究表明,糖蛋白广泛存在于食品原料中,且发挥多种生理活性。鉴于糖蛋白糖基化的复杂性,解析糖基化位点成为糖蛋白结构表征的关键。本文对糖蛋白N-糖基化、O-糖基化以及部分糖链结构进行介绍,以N-糖基化作为主要研究对象,对核磁共振技术和质谱技术这两种糖基化位点的检测方法进行对比分析,归纳获得去糖基化和完整糖肽检测两种糖基化位点的检测方法,并阐释质谱碎裂方式、去糖基化分析机制以及基于糖肽的糖基化位点解析机理。本文旨在为通过生物质谱技术确定糖基化位点的策略提供参考,并为深入研究食源性糖蛋白的性质和功能奠定基础。     

β-葡聚糖糖基化对裸燕麦蛋白功能性质及抗氧化活性的影响

使用β-葡聚糖对裸燕麦蛋白进行糖基化处理,测定裸燕麦蛋白糖基化反应前后的功能性指标,观察糖基化改性过程中复合物的生成情况,分析糖基化改性作用机理,进行体外抗氧化实验。结果表明:在pH5、7、9、11环境中,糖基化反应后的裸燕麦蛋白溶解性均得到改善,pH5环境下提高了3.06倍,pH3~11范围内糖基化裸燕麦蛋白的起泡性提高明显,pH5环境下提高了5倍,在pH5环境下,糖基化裸燕麦蛋白的乳化性及乳化稳定性分别提高了2.48及2.59倍;SDS-PAGE凝胶电泳发现,糖基化改性后有大分子物质生成,内源荧光光谱分析表明糖基化反应过程中体系环境转向亲水性,红外光谱分析反映了蛋白与糖分子之间的共价结合,在圆二色谱中观察到糖基化反应改变了蛋白的二级结构;浓度为10 mg/mL时,糖基化裸燕麦蛋白DPPH·清除率是原蛋白的2.13倍,浓度为2.5 mg/mL时,糖基化裸燕麦蛋白ABTS+·清除率是原蛋白的2.09倍。裸燕麦蛋白与β-葡聚糖的糖基化反应改变了蛋白质的结构,复合物转向亲水性,功能性得到改善,且抗氧化活性也强于原裸燕麦蛋白。     

小米蛋白的分子组成及结构特性

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、扫描电子显微镜、差示扫描量热法以及傅里叶红外光谱（Fourier transform infrared spectrometer,FTIR）对小米中4 种蛋白组分进行结构特性分析。研究表明,醇溶蛋白是由低分子质量亚基（11～25 kDa）构成,而清蛋白、球蛋白和谷蛋白亚基分布较广（11～180 kDa）,其中清蛋白所含亚基数目最多,醇溶蛋白、清蛋白以及球蛋白分子之间连接紧密,以聚集状态存在,而谷蛋白分子连接松散,表面光滑。球蛋白在71.33 ℃条件下发生变性;醇溶蛋白的变性温度最高,达到110.67 ℃。FTIR研究表明,醇溶蛋白、谷蛋白和球蛋白的二级结构主要由β-折叠构成,其含量分别为37.72%、43.39%、42.23%;β-转角以及β-反平行折叠结构含量最丰富的是醇溶蛋白,分别为16.64%和12.73%。4 种蛋白组分结构含量差异显著（P＜0.05）。     

糖基化改性对英国红芸豆抗氧化肽抗氧化活性的影响

为了提高英国红芸豆抗氧化肽的抗氧化活性,利用木糖对其进行糖基化改性。首先利用单因素和正交试验对糖基化改性条件进行优化,然后利用荧光光谱、紫外-可见光谱和傅里叶中红外光谱对糖基化改性产物进行分析。研究结果表明,糖基化改性的最佳反应条件为：抗氧化肽浓度 10 mg/mL、反应温度 90℃、pH 7、反应时间 4 h、糖肽比为 1:1；在此条件下制备的糖基化产物的羟基自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力和亚铁离子螯合能力分别提高了80.9%、75.1%、135.7%、27.2%,褐变程度为 0.52,接枝度为 39%。糖基化改性产物的荧光和紫外吸收特性增强,产物的 -OH 含量增加,在 N-H、C=O 和 C-N 键都发生了伸缩和振动。糖基化改性可以显著提高英国红芸豆抗氧化肽的抗氧化活性。     

不同还原糖糖基化对超声波预处理α-乳白蛋白结构和抗氧化活性的影响

超声预处理的α-乳白蛋白（α-lactalbumin，α-LA）分别与D-葡萄糖、D-甘露糖和D-阿洛糖在55 ℃、6 h干热条件下进行糖基化处理，对其分子质量、接枝度、粒径、二级结构、三级结构和抗氧化活性的变化进行研究。结果表明，糖基化影响了α-LA的结构和抗氧化活性，超声预处理促进了糖基化反应。在这3 种还原糖中，D-阿洛糖修饰的α-LA具有最低的自由氨基相对含量，其糖基化反应程度最高，抗氧化活性增强程度最高，且超声预处理进一步增强其抗氧化活性。因此，糖基化程度的增强和蛋白质构象的改变是α-LA抗氧化活性提高的重要原因。超声波协同糖基化是一种很有前景的提升α-LA功能特性的方法。