双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

酶法制备鱿鱼皮胶原蛋白肽工艺

利用酶工程技术,以鱿鱼皮为原料,研究制备鱿鱼皮胶原蛋白肽粉。选用胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和alcalase蛋白酶进行试验,以产品得率和肽及氨基酸含量为评价指标,从5种蛋白酶中筛选中性蛋白酶作为水解用酶。进行不同料液比、不同加酶量和不同酶解时间的单因素试验,初步确定料液比1︰6 (kg/L),加酶量600 U/g,酶解时间6 h。在此基础上进行加酶量、温度、pH和时间的四因素三水平正交试验,确定最佳酶解条件:加酶量600 U/g,温度45℃, pH 6.0,酶解时间4 h。酶解得到的胶原蛋白肽粉呈淡黄色粉末状,糖含量为3.9%,总脂肪含量为0.19%,蛋白含量为73.57%,肽粉中的羟脯氨酸含量为6.35%,说明该肽粉营养价值较高,达到胶原蛋白肽粉的行业标准要求,在实际生产中有广阔的应用前景。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

酶法制备鱿鱼皮胶原蛋白肽工艺的条件优化

研究了鱿鱼皮胶原蛋白肽的酶解加工工艺条件。在单因素试验基础上,通过正交试验的方法对碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及风味蛋白酶制备鱿鱼皮胶原蛋白肽工艺进行优化。优化的提取工艺条件如下:先用0.3%蛋白酶在p H10.5、温度47.5℃条件下水解4 h,再用0.4%木瓜蛋白酶复合风味蛋白酶按1∶2(质量比)的比例在p H 7.5、温度50℃的条件下继续水解4.5 h,结果酶解液的水解度可达28.89%、DPPH·清除率为88.24%,多肽转化率为49.74%,同时84.56%的胶原蛋白肽分子量分布介于180 Da~2 000 Da之间。在优化的酶解条件下,可以得到较好品质的胶原蛋白肽产品。     

胶原三肽促皮肤胶原蛋白合成功效研究

本试验研究胶原三肽(CTP)对NIH3T3细胞增殖的影响,并采用"D-半乳糖皮下注射制备小鼠衰老模型",取受试小鼠皮肤测定羟脯氨酸(HYP)含量,观察皮肤胶原蛋白含量的变化。结果表明,CTP能增强NIH3T3细胞活性,显著增加皮肤胶原蛋白含量。这告诉我们,CTP有助于促进成纤维细胞的增殖,从而加强皮肤胶原蛋白的合成,最终增加皮肤中胶原蛋白的含量。     

草鱼鱼鳞胶原蛋白提取及活性肽制备研究

以草鱼鱼鳞为原材料,探讨其胶原蛋白酸-酶组合提取工艺,并进一步研究相应抗氧化活性肽和血管紧张素转换酶抑制(ACEI)活性肽的制备方法。结果表明,草鱼鱼鳞胶原蛋白提取的最优工艺为:乙酸浓度0.3 mol/L、乙酸提取固液比1∶15(g/m L)条件下低温下提取24 h;离心后剩余残渣再按1∶10(g/m L)的比例浸入浓度为2%的胃蛋白酶溶液中低温下提取48 h;在该条件下鱼鳞胶原蛋白提取得率可达49.58%。以草鱼胶原蛋白粗提液为原料,制备抗氧化活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度12.5 mg/m L,按10∶1(体积比)的比例加入浓度为4%的木瓜蛋白酶,60℃下酶解75 min,所得酶解液对ABTS~+自由基的抑制率可达45.7%;制备ACEI活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度20 mg/m L,pH值调节为4.0,每10 m L加入6 000 U的酸性蛋白酶,37℃酶解3 h,所得酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性可达98.8%。本研究结果,有望为水产品加工副产物的资源化利用提供参考。     

鱼源胶原蛋白肽的制备及其生理活性研究进展

本文综述了鱼源胶原蛋白肽制备的常用方法及其生理活性研究进展,为胶原蛋白肽的提取制备及市场化应用提供理论依据.     

黄海海燕体壁胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性

以黄海海燕体壁为原料提取胶原蛋白,采用SDS-PAGE电泳检测胶原蛋白的纯度;再分别用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶在各自最适条件下水解胶原蛋白,经10 ku的超滤膜超滤后,制备出分子量小于10 ku的胶原蛋白肽;并应用电子自旋共振波谱技术检测胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明,提取的胶原蛋白纯度高,具有完整三螺旋结构;胃蛋白酶与木瓜蛋白酶对胶原蛋白的水解度分别为(5.46±0.14)%和(5.04±0.37)%;胶原蛋白肽对DPPH自由基的清除能力随着浓度的升高而提高,浓度为20 mg/mL,胶原蛋白肽(胃蛋白酶组)和胶原蛋白肽(木瓜蛋白酶组)对DPPH的清除率分别为(52.10±0.10)%和(46.78±0.09)%。     

皮肤老化及胶原蛋白肽在皮肤抗老化中的研究进展

皮肤老化是口服美容领域的一个重要课题,胶原蛋白肽是一款在皮肤抗老化方面应用较多的口服美容原料。它安全性高,分子量小,溶解性好,腥味、苦味低,具有皮肤保湿、减少皮肤皱纹等功能。文章主要综述皮肤老化的机理及影响皮肤老化的环境因素,胶原蛋白在生命周期中的变化及胶原蛋白肽在皮肤抗老化中的研究新进展,以期为胶原蛋白肽在皮肤抗老化中的应用提供参考。     

牛骨胶原蛋白肽体外清除自由基活性的研究

对经碱性蛋白酶Alcalase 2.4L水解的牛骨胶原蛋白肽清除自由基活性进行了研究。根据对羟基自由基、超氧阴离子自由基、二苯代苦味酰基自由清除能力的测定,以及还原能力、脂质抗氧化能力等抗氧化活性指标的测定,确定了水解度为7.9%左右的胶原蛋白肽清除自由基的综合效果最好,此时酶解产物的平均分子量为2025Da,含15个左右的氨基酸。在此条件下,超氧阴离子（O2-·）的清除率为63.86%,羟基自由基（·OH）的清除率为99.55%,二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）的清除率为27.03%,对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率为74.78%。      

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

酶解技术提取动物组织中的胶原蛋白及其肽的研究进展

胶原蛋白是哺乳动物各组织器官中含量最丰富、覆盖面最广,与生物体组织和器官功能息息相关的蛋白质,胶原蛋白经蛋白酶水解可形成胶原蛋白肽。本文综述了酶提胶原蛋白的原材料、所用酶的种类、相关酶提辅助技术和产物性质的检测方法,从而为胶原蛋白及胶原蛋白肽提取工艺的优化和应用市场的扩展提供理论依据。     

木瓜蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的研究

以新鲜猪皮为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备胶原多肽,并对影响木瓜蛋白酶水解过程的各个因素进行研究.通过对猪皮水解度的测定,确定木瓜蛋白酶水解猪皮制备胶原多肽的最适pH为5,最适温度为60℃,最适酶量为0.9%,最适底物浓度为30%,水解时间3h.在此水解条件下,水解度达到14.91%.     

促成骨细胞增殖活性骨胶原蛋白肽的靶向筛选及活性分析

酶法制备的骨胶原蛋白肽为混合肽,通常具有多种潜在的生物活性,但目前缺乏基于促成骨细胞增殖活性的靶向性研究。本实验以酶法制备的牦牛骨胶原蛋白肽为原料,采用高效液相色谱法与纳米液相色谱-串联质谱法分别测定混合肽的分子质量与序列构成,基于与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的CDOCKER半柔性对接,靶向筛选具有潜在促成骨细胞增殖活性的骨胶原蛋白肽,并进行体外细胞增殖培养验证。结果表明,共鉴定得到78 条牦牛骨胶原蛋白肽,主要以低分子质量肽段为主（小于3 000 Da的组分占91.8%）,通过与EGFR对接发现,多肽GPAGPQGPRGDKGETGEQ（GP-18,1 736.815 Da）、TPEVDDEALEKFDK（TP-14,1 634.775 Da）、GPAGPQGPRGDKGETGE（GP-17,1 608.757 Da）、GKSGDRGETGPAGPAGPIGPV（GK-21,1 875.951 Da）和GKSGDRGETGPAGPAGPIGPVG（GK-22,1 932.973 Da）具有潜在促成骨细胞增殖活性。小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞培养实验结果表明,3.0 mg/mL GK-22促成骨细胞相对增殖率达106%,显著高于空白组（P＜0.05）。本研究可为促成骨细胞增殖活性肽的靶向筛选和工业化制备提供理论参考。     

双酶水解法制备鹿胎盘活性多肽

采用双酶水解的方法制备鹿胎盘生物活性肽。以水解度和酸溶性肽得率为指标,确定了木瓜蛋白酶与胰蛋白酶为最优酶系组合。通过正交实验得出酶解工艺条件为:pH 7.0、温度52℃、酶活添加量6 000u/g(料)、底物浓度10%、酶比为1∶1,水解时间3 h,在此条件下对鹿胎盘进行水解,水解度为34.5%,酸溶性多肽得率为81.56%。     

酶法制备乳铁蛋白抗菌肽的工艺

乳铁蛋白具有抗菌活性,胃蛋白酶酶解乳铁蛋白时得到的乳铁蛋白多肽的抗菌活性远高于其自身。通过响应面回归分析,得到了胃蛋白酶酶解乳铁蛋白的优化条件为:底物浓度30 mg/mL、水解时间2 h、温度45℃、加酶量1%(w/w)、pH 2.5。在优化酶解条件下,水解度约为11%,抑菌率为98.8%。高效液相排阻色谱分析表明,多肽的分子质量主要分布在200～6 000 u。     

玉米醇溶蛋白高水解度酶解制备短肽

以高水解度水解蛋白为目标,对酶解玉米醇溶蛋白制备短肽的工艺进行了研究。选择了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶,采用均匀试验设计法对三种酶的酶解工艺进行了考察,同时还对复合酶水解、理化前处理技术的作用进行了探讨。实验结果对三种酶的酶解工艺条件进行了优化;明确了三种酶复合水解时,得到的水解度均显著高于单酶水解结果,且其中以"碱性蛋白酶+中性蛋白酶+胃蛋白酶"顺序的复合酶组合得到的水解度最高达(29.95±0.87)%;考察的加热、添加亚硫酸钠、超声等三种理化前处理技术,对玉米醇溶蛋白水解度没有明显的影响。总而言之,应用合适的蛋白酶及酶解方式,玉米醇溶蛋白水解制备短肽,可以达到较高的水解度。     

罗非鱼皮胶原蛋白肽制备的工艺优化

以罗非鱼鱼皮为原料,研究利用酶法制备胶原蛋白肽制品。测定了罗非鱼皮的基木组成成分,利用低温连续相变萃取技术进行脱脂处理;以水解度、水解产物分子量和感官评定为指标,研究蛋白酶种类对酶解的影响;以水解度为指标,研究酶解条件对水解度的影响,并采用响应面试验对鱼皮胶原肽制备工艺进行优化;用凝胶过滤色谱法测定酶解液分子质量分布。结果表明:采用碱性蛋白酶水解鱼皮效果最好,酶解的最佳工艺条件为:时间7 h、加酶量7%、温度60℃、pH值10.38,在此条件下碱性蛋白酶水解罗非鱼皮的水解度最高可达23.01%。由本法所得胶原肽是以分子质量180~1000 u之间的寡肽(约2~8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的生理活性,可作为功能因子广泛应用于保健食品、化妆品、医药等各个行业当中。