牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性变迁及β内酰胺类药物耐药基因分析

采用肉汤微量稀释法,对203 株源于2006—2011年四川牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)进行10 种常用抗生素药敏性检测,多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,M-PCR)法对其耐甲氧西林基因(mecA)和β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ)进行分析,了解Sa耐药性变迁。结果表明:牛乳源Sa菌株对青霉素、氨苄西林耐药率一直居高不下;对阿莫西林/克拉维酸、红霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率有增强趋势;对林可霉素、四环素耐药率呈降低趋势;对环丙沙星耐药率不定;对苯唑西林和头孢噻呋敏感;Sa分离株多重耐药率介于72.1%～100.0%,显示出不尽相同的耐药谱,却呈现出不断增宽的趋势。M-PCR检测显示,2006—2011年分离Sa菌株未从基因水平扩增出mecA基因;不同年度分离株均不同程度携带blaZ基因,不同年度分离株blaZ+检出率介于49.1%～87.5%。药敏实验结果与相关耐药基因检测结果存在对应关系,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,推测还存在其他耐药机制。结论:四川地区牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性不容乐观。     

用于PCR检测的乳品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法比较研究

比较了乳品中金黄色葡萄球菌DNA的6种提取方法的效果,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA的方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA,作为模板进行PCR检测,检测效果良好,对UHT全脂乳、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为10、10CFU/mL和55CFU/g。     

鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌污染及耐药性和毒力基因分析

目的 了解鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌的检出情况、耐药性以及毒力基因分布特征。方法 从湖北省襄阳市、十堰市、随州市三地共采集303份食物样品进行金黄色葡萄球菌筛查,通过聚合酶链式反应(PCR)法进行耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的鉴定和毒力基因检测,并用K-B纸片扩散法进行耐药性测定。结果 303份样品中共有41份检出金黄色葡萄球菌,阳性率为13.53%,其中生肉制品检出率最高(23.91%,22/92)。在产肠毒素菌株中以携带产肠毒素基因sea的菌株最多,占87.80%(36/41)。携带表皮剥脱素基因eta和中毒性休克综合征毒素基因tst的菌株分别占97.56%(40/41)和7.32%(3/41)。同时携带3种及以上肠毒素基因的菌株占17.07%(7/41)。同时含有eta和tst的菌株占2.44%(1/41)。药敏结果显示,分离菌株对青霉素、四环素、红霉素和多西环素的耐药率分别为78.05%(32/41)、43.90%(18/41)、31.71%(13/41)和21.95%(9/41),对其他8种抗菌药物的耐药率均<20%。mecA基因检测表明,19.51%(8/41)的菌株为MRSA,且7株MRSA菌株来源于生肉制品和未加调料的素卤菜。结论 鄂西北地区食源性金黄色葡萄球菌具有较高的检出率,而且产毒株较多,并且存在多重耐药现象,相关部门需加强食品安全监测以控制该菌株的流行与扩散。     

多重PCR检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的研究

目的:为了建立一种简单、快速检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法。方法:根据相关文献和Genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E、H的基因序列,选择合成了6对特异性引物,建立多重PCR体系,并对反应条件进行了优化。结果:6对引物能同时特异地扩增出120、478、257、319、170、375bp的目的片段,表明6对引物具有良好的特异性。结论:成功地建立了一种同时检测金黄色葡萄球菌六型肠毒素基因的多重PCR方法,在金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查方面具有良好的应用前景。     

食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及耐药性分析

为了解金黄色葡萄球菌对食品的污染情况 ,采集 6类 2 0 4件食品 ,进行金黄色葡萄球菌检测。采用GB 4 789— 1994食品卫生检验方法检测金黄色葡萄球菌 ,用minVIDAS全自动免疫分析仪测定肠毒素 ,用K B法进行药敏试验。在 2 0 4件食品中检出 4 4件金黄色葡萄球菌 ,总检出率2 1 5 6 % ,其中生奶的检出率最高 (39 39% ) ,生肉、水产品次之 (33 33% ) ,熟肉制品、乳制品检出率分别为 6 0 %和 5 0 % ,冰激凌中未检出金黄色葡萄球菌。 4 4株金黄色葡萄球菌有 2 7株产生肠毒素 ,占 6 1 36 %。在药敏试验中 4 4株金黄色葡萄球菌 10 0 %对苯唑西林耐药 ;93 18%对青霉素G耐药 ;86 4 0 %对阿莫西林耐药 ,对丁胺卡那、头孢三嗪、头孢唑啉、万古霉素敏感。金黄色葡萄球菌对奶、肉、水产品的污染比较严重 ,特别是产生肠毒素的菌株存在着引起食物中毒的可能性。     

食品中金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的研究

以耐热核酸酶基因nuc、纤维蛋白原结合蛋白基因clfA和SmaI限制性酶切片段特异序列为靶基因,设计筛选引物,建立并优化了检测金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,SA)的多重PCR体系。采用10株SA和46株非SA验证了该多重PCR具有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到1.197 3 ng。人工污染样品,当起始污染量为1.2个/g时,37℃增菌培养6 h即可检出。一共检测了43份样品,检出3份阳性样品,其中有2份阳性样品与传统方法一致,另外一份阳性样品用测序验证。作者建立的多重PCR方法可特异、快速地实现对SA的检测。     

2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的 掌握北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药谱和耐药趋势。方法 收集2015?2018年北京市食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌103株, 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种常用抗生素的敏感性。结果 103株菌中有102株表现为对至少1种抗生素耐药, 耐药率排在前三位的是青霉素、红霉素和克林霉素, 其中对青霉素的耐药率最高, 为99.0%。检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌8株, 占7.8%, 未见万古霉素耐药株。45.6%(47/103)的菌株同时耐受3类和3类以上抗生素, 表现为多重耐药, 同时耐受抗生素种类最高为7类。共存在26种耐药谱, 优势耐药谱为青霉素、青霉素-红霉素-克林霉素-复方新诺明-庆大霉素和青霉素-红霉素。结论 2015~2018年北京市食源性金黄色葡萄球菌整体耐药水平较高, 且多重耐药情况严重, 并出现MRSA株, 应继续加强北京市食源性金黄色葡萄球菌的耐药性监测。     

2010~2011年四川省部分地区牛乳生产链金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因的分布

2010~2011年间从四川省部分牛乳生产企业采集生产环节(生鲜牛乳-车间半成品牛乳-成品牛乳)牛乳样品893份,用GB 4789.10~2010方法结合科玛嘉显色培养基,从中分离鉴定出191株金黄色葡萄球菌,样品总检出率为21.4%(191/893),其中生鲜牛乳检出率(26.4%)高,生产车间半成品牛乳(7.1%)次之,成品牛乳未检测出。利用多重PCR方法对部分金黄色葡萄球菌分离株的肠毒素基因(SEA、SEB、SEC、SED)进行检测。结果显示,22.3%(27/121)菌株携带肠毒素基因,7.4%的菌株携带两种及两种以上肠毒素基因。其中,生鲜牛乳源、中间过程牛乳源及成品牛乳源菌株肠毒素基因携带率分别为23.9%(27株)、0.0%(0株)及0.0%(0株);121株金黄色葡萄球菌SEA、SEB、SEC、SED基因的总检出率分别为13.2%(16株)、10.7%(13株)、5.8%(7株)、3.3%(4株)。研究结果对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与乳品质量安全控制具有参考意义。     

市售凉皮中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因、耐药特征检测及SPA分型

为监测并研究凉皮中金黄色葡萄球菌的污染情况,选取连锁超市、流动摊点、小餐馆和学校餐厅4?种销售渠道,在陕西杨凌地区进行为期一年的凉皮跟踪采样,共得样本432?个,金黄色葡萄球菌检出率为24.3%（105/432）。检测sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej?9?种肠毒素基因,sea携带率最高为96.2%（101/105）,see次之为64.8%（68/105）,还有部分seb和sec检出,检出率分别为54.3%（57/105）和49.5%（52/105）,seh检出率为1.0%（1/105）,sed、seg、sei、sej的检出率则均为0.0%（0/105）。研究针对青霉素、氨苄西林和苯唑西林等14?种常见药物进行耐药性实验,105?株来自阳性样本的金黄色葡萄菌全部具有耐药性,对青霉素和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑耐受率为100.0%（105/105）,对头孢哌酮、环丙沙星、万古霉素和阿米卡星均敏感。此外,多重（n≥3）耐药率高达90.5%（95/105）,表型为青霉素-氨苄西林-甲氧苄啶/磺胺甲恶唑-阿莫西林/克拉维酸的耐药率最高,为61.9%（65/105）。检测105?株金黄色葡萄球菌的SPA型别,共包括4?种结果,优势型别为t701（81.9%,86/105）,其次是t441（16.2%,17/105）,t127和t796占比最少均为1.0%（1/105）。最终,发现该地区所售凉皮除学校餐厅外,其余3?种销售渠道的检出率均较高,且菌株具有较高的肠毒素基因携带率和耐药性,优势SPA型别为t701和t441,为相应监管部门提供一定理论指导。     

天津地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌耐药性研究

为了解天津地区奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的致病情况以及对抗生素药物的敏感性,为科学治疗奶牛乳房炎提供参考以及防控兽药残留提供依据,采用甘露醇高盐培养基和冻干兔血浆对采自天津地区7个牛场50个样品进行分离鉴定,采用纸片扩散法进行药敏试验。经分离鉴定确定分离29株金黄色葡萄球菌,4株其他致病性葡萄球菌。对分离出的金葡菌进行8类29种常用抗生素的耐药性分析。对金黄色葡萄球菌分离株进行PCR扩增耐药基因,并通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果表明,29株金葡菌分离株对8类29种常用抗生素均有不同程度耐药性。其中对大环内酯类、林可酰胺类药物耐药率普遍较高,平均耐药率为77.01%和89.66%,对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类药物耐药率均低于50%。分离株对青霉素G、乙酰螺施霉素和林克霉素表现为完全耐药(100%),对头孢哌酮、头孢噻肟、阿莫西林、氨苄西林、恩诺沙星、新霉素和大观霉素等耐药率在20%~40%之间。分离株的耐药基因检测结果表示,耐药基因阳性检出率普遍小于耐药基因表型的检出率。     

婴幼儿食品中金黄色葡萄球菌污染情况及其耐药基因和新型肠毒素基因的检测

本文调查了婴幼儿奶粉和米粉中金黄色葡萄球菌的污染状况,并且检测其耐药基因和新型肠毒素基因。采集陕西省2010年和2012年间不同品牌的婴幼儿奶粉和米粉692份,进行金黄色葡萄球菌污染检验,采用PCR对分离菌株进行31种耐药基因和9种新型肠毒素基因的检测。692份样品中金黄色葡萄球菌的检出率为7.80%,其中2010年所采样品的检出率为8.17%,2012年所采样品的检出率为7.38%。分离的75株菌最终检测出12种耐药基因和2种新型肠毒素基因,检出率最高的耐药基因是tet K(72.00%),其次是bla Z(36.00%),erm C(29.33%),tet(K)F(21.33%),lin A/lin A’(12.00%),dfr G(8.00%),tet L(6.67%)和acc(6')(5.33%),最少的为erm B,msr A、msr B和drf K(均为1.33%)。新型肠毒素基因仅检测出sen(44.00%)和ser(4.00%)。不同采样年份、生产季节和货架期的样品中金黄色葡萄球菌的污染率不存在显著差异。并且这些菌株主要携带四环素、青霉素和大环内酯类抗生素的耐药基因,以及新型毒素基因sen。     

石河子地区乳源性金黄色葡萄球菌毒力及耐药性的研究

本文研究了石河子地区乳源性金黄色葡萄球菌的污染情况、毒力特性及耐药性。对24份零售鲜奶样品进行金黄色葡萄球菌定量检测,PCR方法检测nuc、16S r RNA和7种毒力基因,利用Kirby-Bauer法对分离得到的金黄色葡萄球菌进行了12种抗生素的药物敏感试验。共分离55株疑似乳源性金黄色葡萄球菌,nuc和16S r RNA基因PCR扩增检测结果中有20株菌为阳性。毒力基因检测结果中有5株(5/20;25%)携带毒力基因,其中3株携带Coa(3/5;60%),1株携带Sei(1/5;20%),1株携带Sea+Sec+Coa(1/5;20%)。发现20株金黄色葡萄球菌中有19株对所测试的一种或多种抗生素具有抗性,且19株均对亚胺培南和氯霉素敏感。本文为指导抗生素在人类临床和动物饲养中的合理应用提供重要的参考性数据,为乳品中有害金黄色葡萄球菌的风险评估提供理论依据。     

Detection of Enterotoxigenic Staphylococcus aureus in Raw Milk and Dairy Products by Multiplex PCR

Abstract: The aim of this study was to investigate the prevalence of enterotoxigenic Staphylococcus aureus in 122 samples, including 60 raw milk, 32 white cheese, 10 kashar cheese, 10 butter, and 10 ice cream samples obtained from Samsun province, Turkey. In this study, S. aureus was detected in 64 samples, including raw milk (45/60; 75%), white cheese (12/32; 37.5%), kashar cheese (3/10; 30%), butter (3/10; 30%), and ice cream (1/10; 10%) samples. A total of 81 isolates were identified as S. aureus by PCR with the presence of 16S rRNA and nuc genes. The presence of genes encoding the staphylococcal enterotoxins (SEs) SEA, SEB, SEC, and SED was detected by multiplex PCR. According to the analysis, seven isolates from the raw milk samples (7/51; 13.7%) were enterotoxigenic; five of them produced SEA (5/7; 71.4%), one produced SEB (1/7; 14.2%), and one produced SEA+SEB (1/7; 14.2%). Four isolates from the white cheese samples (4/21; 19%) produced the SEA (1/4; 25%), SEC (1/4; 25%), SED (1/4; 25%), and SEA+SED (1/4; 25%) toxins. Two isolates from the kashar cheese samples (2/4; 50%) were found to be enterotoxigenic; one produced SEA (1/2; 50%) and the other produced SED (1/2; 50%). One isolate from the butter samples (1/4; 25%) showed enterotoxigenic character (SEB, 1/1; 100%). The products were found to be potentially hazardous to public health because of the fact that levels of contamination were higher than 105–106 cfu/g ml in 39% (25/64, 17 raw milk, 7 white cheese, and 1 butter) of the analyzed samples.     

市售猪肉金黄色葡萄球菌的分离及菌株耐消毒剂基因的检测

研究市售猪肉源金黄色葡萄球菌的污染情况,测定季铵盐类消毒剂对分离菌株MIC范围,以及耐消毒剂基因携带情况。采集春夏季与秋冬季市售生猪肉样品576份,采用肉汤稀释法测定苯扎溴铵对分离菌株的MIC,采用PCR技术对分离菌株5种耐消毒剂相关基因(qacA/B、qacC/D、qacG、qacH、qacJ)进行检测。576份样品中分离得到297株金黄色葡萄球菌,总分离率为51.56%;其中,春夏季样品374份,分离出158株;秋冬季样品202份,分离出139株。苯扎溴铵对分离菌株的MIC在0.00125~0.01μg/mL,297株中168株检出携带耐消毒剂基因,总检出率为56.6%,qacA/B、qacC/D、qacG、qacH、qac J的检出率分别为2.36%、19.86%、40.74%、6.73%、0.67%。结果表明猪肉源金黄色葡萄球菌的分离率和菌株消毒剂抗性基因携带率较高,猪肉中分离的金黄色葡萄球菌对季铵盐类消毒剂敏感。本研究为市售猪肉金黄色葡萄球菌的防控及消除提供参考。     

温州市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及分子流行病学特征研究

目的了解温州市食品中金黄色葡萄球菌的污染状况,分析分离的金黄色葡萄球菌的耐药性、毒力基因分布及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法依据GB 4789.10—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行菌株分离鉴定,采用纸片法进行药敏试验,mini-VIDAS法和聚合酶链式反应(PCR)法分别进行肠毒素及其基因的检测,PFGE法进行分子分型。结果 4类食品388份样品中有16份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为4.12%,其中生畜肉和生禽肉检出率较高,分别为13.89%(5/36)和11.11%(4/36)。所有菌株均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(100.00%,16/16),其次为红霉素(56.25%,9/16),多重耐药率为18.75%(3/16),未检出对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌肠毒素及其基因检测阳性率均为56.25%(9/16),其中seb、seg基因检出率较高,均为37.50%(6/16)。PFGE图谱分为12种PFGE带型。结论金黄色葡萄球菌在温州市食品中存在一定的污染率,且具有分子多态性、产肠毒素率及毒素基因携带率较高的特征,提示存在潜在的食品安全隐患。     

实时逆转录聚合酶链式反应检测活的金黄色葡萄球菌

针对基于DNA水平的聚合酶链式反应(DNA-PCR)检测食品中金黄色葡萄球菌时会出现假阳性结果的缺点,建立一种能够区分死、活金黄色葡萄球菌的检测方法。根据金黄色葡萄球菌的femA基因,自设计Taqman探针、引物,采用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以femA mRNA为检测对象,发现只有活的金黄色葡萄球菌显阳性,死亡的则呈阴性;纯培养时,重复检测变异系数为0.15,灵敏度为9×102CFU/mL,检出限可达1/3 CFU/3 mL。实验表明,该研究所建立的一步法逆转录聚合酶链式反应检测法,不仅灵敏度高、特异性强,而且能够有效地区分死、活金黄色葡萄球菌。