富硒灵芝液态深层发酵工艺研究

采用灵芝作为富硒的载体,进行富硒灵芝液态深层发酵实验,研究灵芝对无机硒的生物转化能力。利用正交实验设计,对富硒灵芝液态深层发酵条件如摇床转速、接种量、pH等进行了优化。结果表明,灵芝能在含有低浓度亚硒酸钠(50～200mg/kg)的培养基中生长,并在菌丝体内富集硒。在优化的发酵条件下,富硒灵芝菌丝体干质量为38.0g/L,菌丝体硒含量为1568μg/g,总富硒量为59584μg/L。     

富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵条件优化

以富硒大豆为原料,采用液体发酵技术对富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵条件进行研究。富硒大豆经浸泡、磨浆、过滤、煮沸后接种灵芝菌种发酵,以水解度为指标,通过单因素和正交试验对温度、初始pH值、摇瓶转速及豆浆质量分数等发酵条件进行优化。结果表明：富硒大豆的灵芝菌丝体液态发酵最佳条件为发酵温度28℃、培养基初始pH5.8、摇瓶转速160r/min、豆浆质量分数5%、发酵时间132h。在最佳发酵条件下,大豆蛋白的水解度达27.8%、大豆多肽产量7.0178mg/L、多糖产量1.75mg/L、灵芝酸产量0.66mg/L。     

灵芝液体发酵富集硒元素研究

研究了灵芝在亚硒酸钠水平分别为50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL、350μg/mL、400μg/mL的固体PDA培养基上的生长情况,30℃恒温培养6d,观察并测定菌落直径;在不同亚硒酸钠浓度条件下进行液体发酵,180r/min转速下30℃摇床培养5d,检测发酵液生物量、富硒率,同时检测富硒后菌丝体部分金属元素的含量变化。结果表明:150μg/mL~250μg/mL的含硒固体PDA培养基上菌丝体生长好,在含硒250μg/mL液体发酵培养基上菌丝体生物量最高为0.86g,300μg/mL发酵液中富硒率最高为47.71%,而且富硒后的菌丝体其他金属元素含量变化不明显。     

硒在富硒灵芝中的分布

为深化富硒灵芝的基础研究,指导富硒灵芝的生产与应用,以不同含硒量的富硒灵芝子实体为试样,系统地研究了硒在富硒灵芝中的分布,结果表明:富硒灵芝子实体中81.71%～87.92%的硒是以有机硒形式存在,并主要与子实体中的蛋白结合(蛋白硒占总硒的56.0%～61.2%);水溶性蛋白和碱溶性蛋白是灵芝结合硒的主要蛋白,总结合硒量占蛋白硒的75.2%～79.2%。按照结合硒量的多少,硒在蛋白中的分布依次为:水溶性蛋白>碱溶性蛋白>醇溶性蛋白>盐溶性蛋白。此外,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离富硒灵芝子实体中的含硒蛋白组分,并采用氢化物原子荧光法(HGAFS)对蛋白或多肽条带按分子质量段切割进行硒含量测定,结果表明:在分辨出的13条蛋白条带中,分子质量在8.709～142.53kDa的蛋白或多肽均结合了不同程度的硒,但硒主要分布在分子质量不超过16kDa的蛋白或多肽中。     

富硒灵芝发酵培养工艺及产物抗氧化能力研究

本文以亚硒酸钠为硒源,以灵芝为富硒载体,采用液体发酵方式进行富硒灵芝培养;主要研究了培养基中亚硒酸钠浓度对富硒灵芝的生物量及总硒含量的影响,并通过正交试验对富硒灵芝液体发酵培养工艺进行优化,此外还对富硒灵芝中四类不同性质的蛋白的抗氧化能力进行了初步探讨。结果表明:为获得最佳的富硒效果,发酵液中亚硒酸钠浓度在1000 mg/L左右为宜。接种量为12%,pH 8.0,摇床转速200 r/min为富硒灵芝发酵培养的最适工艺条件。碱溶性蛋白为富硒灵芝中含量最高一类蛋白,含量达到了8.64%;其次是水溶性蛋白,含量为6.64%;接下来是盐溶性蛋白,含量为4.62%;醇溶性蛋白的含量最低,含量仅有0.30%。但比较四类蛋白粗提物的硒含量,发现醇溶性蛋白的硒含量最高,达510.0 mg/g;其次是水溶性蛋白和碱溶性蛋白,硒含量分别为278.55 mg/g和115.51 mg/g;盐溶性蛋白的硒含量最低,为49.68 mg/g。考察四类灵芝蛋白粗提物的抗氧化能力,发现其抗氧化能力与其硒含量呈一定的正相关,醇溶性蛋白具有最高的抗氧化能力,其次是碱溶性蛋白和水溶性蛋白,盐溶性蛋白的抗氧化能力最低,且富硒样的抗氧化能力均高于相应的对照样。     

不同硒源对灵芝生物富硒的比较研究

利用亚硒酸钠和活化硒矿为硒源对灵芝的生物富硒进行了研究,结果表明,两种硒源对灵芝生物富硒的效果有较大差异,灵芝对亚硒酸钠溶液和活化硒矿水溶液的耐受浓度分别是1000μg/g和30μg/g。利用亚硒酸钠和活化硒矿为硒源的灵芝菌丝体最高总硒含量分别为2639.1μg/g和302.2μg/g,最高富硒率分别是25.4%和60.0%。由此可知,与活化硒矿相比,以亚硒酸钠为硒源的灵芝总硒含量较高,但是以活化的硒矿水溶液为硒源成本低,且可以充分利用我国硒都恩施州的硒矿资源,有重要的实际意义。     

灵芝富硒发酵条件优化及硒多糖抗运动疲劳活性研究

为研究灵芝富硒发酵最佳条件，探讨灵芝菌丝体硒多糖对小鼠运动疲劳活性的影响。以菌丝体生物量为指标，利用单因素和响应面试验优化发酵条件，并分析硒多糖的抗疲劳活性。结果显示，最佳富硒发酵条件为：Na₂SeO₃浓度39 mg/L，摇床转速185 r/min，温度28℃，此条件下，灵芝菌丝体干重12.47 g/L，富硒率96.87%，硒多糖386.52 mg/L，多糖中硒含量93.58 mg/kg。硒多糖可显著提高小鼠力竭游泳时间，降低小鼠体内血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)和丙二醛(MDA)含量，提高肝糖原(HG)、肌糖原(MG)含量，提高骨骼肌细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性，从而缓解细胞的氧化应激损伤。综上，本研究通过富硒发酵获取的灵芝菌丝体硒多糖具有较好的抗运动疲劳活性，有深入开发利用的前景。     

不同硒源对灵芝生物富硒的比较研究

利用亚硒酸钠和活化硒矿为硒源对灵芝的生物富硒进行了研究,结果表明,两种硒源对灵芝生物富硒的效果有较大差异,灵芝对亚硒酸钠溶液和活化硒矿水溶液的耐受浓度分别是1000μg/g和30μg/g。利用亚硒酸钠和活化硒矿为硒源的灵芝菌丝体最高总硒含量分别为2639.1μg/g和302.2μg/g,最高富硒率分别是25.4%和60.0%。由此可知,与活化硒矿相比,以亚硒酸钠为硒源的灵芝总硒含量较高,但是以活化的硒矿水溶液为硒源成本低,且可以充分利用我国硒都恩施州的硒矿资源,有重要的实际意义。      

富硒灵芝南瓜挂面的研制

将灵芝在Na2SeO3含量为100mg／L的培养基中进行富硒培养后，用水浸提菌丝体取其汁液，再将南瓜经预处理后磨浆均质，加入到挂面配料中。通过正交试验确定了富硒灵芝南瓜挂面的最佳配方，并研制出色泽微黄、风味独特、营养丰富，具有一定保健作用的高档挂面新品种。     

灵芝深层发酵生物富集硒、锌的研究

研究了灵芝深层发酵生物富集硒、锌的效应。结果表明：生物富集硒，锌的最佳浓度分别为Se-120mg／L，Zn-40mg／L，富集硒的生物量为12、57g／L，富硒量859、71μg/g，富硒率9．01％。富集锌生物量15．38扎富锌量798．10μg/g，富锌率30、69％。     

富硒深层培养对灵芝生长代谢的影响

研究了硒对灵芝生长代谢的影响。考察了灵芝对硒的耐受浓度 ,硒对灵芝菌丝量、灵芝蛋白、灵芝多糖和矿物质代谢的影响 ,并探讨了硒对灵芝菌丝内部分酶代谢的影响。实验结果表明 :灵芝对硒的最大耐受浓度为 4 0 0 μg/ g,在硒浓度 4 0 0 μg/ g以内 ,硒对灵芝菌丝量、菌丝蛋白质及多糖的代谢没有明显的改变 ;除可明显增加矿物质锌的含量外 ,对铜、铁、锰和钙含量无影响 ;对菌丝内硒的富集作用是极其明显的 ,最高可达 70 0 0μg/ g左右 ;硒对灵芝酯酶同工酶、过氧化物酶同工酶没有结构上的影响 ,仅增加酶的活性。     

以活化硒矿为硒源的灵芝生物富硒研究

对以活化硒矿为硒源的灵芝(Ganoderma lucidum)液体培养条件进行了研究。考察了不同碳源和氮源对灵芝生长的影响,利用正交试验确定了最佳液体发酵培养基并对温度、转速、pH等发酵条件进行了优化。试验结果表明:灵芝液体培养的最佳发酵培养基是:2%玉米粉,4%葡萄糖,3%麸皮汁,0.2%磷酸二氢钾,0.1%七水硫酸镁;最佳发酵培养条件是:温度28℃,摇床转速180r/min,pH6,接种量15%,菌丝生物量高达23.59g/L。当添加的硒矿水溶硒含量为5μg/g时,灵芝富硒效果最好,其总硒含量和富硒率分别达302.2μg/g和60.0%。     

灵芝液体发酵产胞内多糖的培养基优化

以菌丝生物量及菌丝胞内多糖为指标,用液体发酵方法培养灵芝菌丝并获得菌丝胞内多糖,通过单因素及正交试验,研究了碳源、氮源、微量元素对灵芝菌丝生长及多糖产量的影响。结果表明:灵芝液体发酵生产菌丝多糖最适合培养基组合为:麦芽糖2.0%、酵母提取粉2.0%、ZnSO40.015%、VB10.10%、KH2PO40.2%、MgSO40.05%、pH 6.0,菌丝多糖产量高达6.64%。     

灵芝菌丝体深层发酵工业化生产的研究

目的:采用生物发酵工程技术进行灵芝菌丝体多糖扩大生产;方法:利用农副产品(如玉米粉、豆粕粉)作培养基,在发酵罐中,根据其控制参数(如接种量、总糖量、还原糖、pH值、通风量、罐压、温度、生长因子),进行灵芝菌丝体多糖工业化扩大生产。结果:经过20批容积为10m3,定容为7.5m3发酵罐正常试验,生产周期平均为150h;pH值从6.5降至3.5;放罐后灵芝菌丝体经均质和喷雾干燥后其干粉平均每罐重量为66.1kg,干粉平均收率为8.76kg/m3,干粉中纯多糖含量为68.5g/kg,每罐纯多糖重量为4.225kg。镜检菌丝壁上无明显“芽头与锁状联合”,并有少量菌丝体自溶,无杂菌。结论:试验证明本工艺方案是成功的,是值得推广的新工艺。     

硒和铈对灵芝多糖和灵芝酸含量的影响

目的:考察在培养液中添加硒和铈对灵芝多糖和灵芝酸含量的影响。方法:向培养液中分别添加不同质量浓度的亚硒酸钠或硝酸铈铵,用液体浅层静置培养法培养灵芝菌丝体,用苯酚-硫酸法测定菌丝体和菌液中的多糖,用冰醋酸-香草醛法测定菌丝体中的灵芝酸。结果:添加40mg/L亚硒酸钠培养的灵芝菌丝体,多糖含量比对照提高42.3%,灵芝酸含量比对照提高10.6%;添加15mg/L硝酸铈铵培养的灵芝菌丝体,多糖含量比对照提高51.1%,灵芝酸含量则有所降低;两种元素还可明显提高菌液中灵芝多糖的含量。结论:向培养液中适量添加硒或铈,可显著提高灵芝菌丝体和菌液中的多糖含量,硒还可同时提高菌丝体的灵芝酸含量,铈则降低灵芝酸含量。生产中可根据实际需要添加硒或铈,以获得品质优良的灵芝菌丝体和菌液。     

富硒灵芝酸豆奶的研制

以豆奶和富硒灵芝液为原料,研究一种发酵型酸豆乳饮料。从产品感官质量出发,采用响应面法确定合理的配方和生产工艺,并对产品质量进行评价。结果表明,富硒灵芝酸豆乳的最佳工艺参数为25℃条件下,以浓度为0.5% 的NaHCO3 浸泡黄豆8h,磨浆豆水比1:6,豆浆与牛奶以质量比3:1 混合,加入2% 葡萄糖、6.3% 蔗糖、5% 富硒灵芝液,接种量(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌比例为1:1 的混合菌种)为5%,42℃发酵6.1h,产品色泽均一、组织细腻、酸甜爽口、营养丰富。     

赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

探究赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、周期分布、侵袭、迁移能力的影响。选取人肝癌HepG2细胞,分为空白组、药物对照组、无硒赤芝蛋白组、低、中、高浓度组,检测六组细胞生物学行为及Bcl-2、Bax、caspase3表达。结果显示,高浓度组细胞增殖率低于其他各组,凋亡率高于其他各组,G1期细胞比例为58.66%,高于其他各组。高浓度组细胞侵袭、迁移数分别为28.21、29.66,低于其他各组(p0.05)。高浓度组细胞Bcl-2、caspase3表达分别为0.98、1.01,均低于其他各组;Bax表达为1.03,高于其他各组(p0.05)。使用赤芝富硒蛋白进行干预,能够影响肝癌细胞增殖、凋亡,阻滞细胞周期,抑制侵袭、迁移能力,调控Bcl-2、Bax、caspase3表达,说明赤芝富硒蛋白能够调控肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力,抑制肝癌HepG2细胞的发展和扩散,为肝癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

昆嵛山野生灵芝发酵条件的研究

灵芝自古是我国的著名药用真菌,其含有多种生理调节因子。本研究通过单因素和正交试验,优化液体深层培养的营养搭配与环境条件,研究其对昆嵛山灵芝菌丝体生物量的综合影响。结果表明,适宜的培养基配方为:可溶性淀粉5.00%、牛肉膏2.00%、KH2PO40.10%、MgSO40.01%;适宜的环境条件为:初始pH5.5,发酵周期6d,搅拌转速150r/min,装液量30%。     

灵芝深层发酵中麦角甾醇含量的测定

利用HPLC法研究了灵芝真菌发酵过程中胞内外麦角固醇的含量,经紫外全波长扫描,确定测定波长为282mm,研究表明：此方法测定麦角固醇含量最大标准偏差为O．92％,得到线性回归方程为y=28685x-382．61（R=0．9998）,该回归方程在20～500嵋的范围内。精密度试验,灵芝真菌发酵胞内外麦角固醇含量RsD分别为O．40％和1．96％,说明此试验设计条件精密度良好,经加标后,麦角固醇的回收率在96．82～102．50％之间,表明此方法用于测定灵芝真菌发酵过程中麦角固醇含量准确、可行,经测定灵芝真菌发酵至120h,麦角固醇含量增至最高,胞内含量达到O．64mg／g,胞外含量达到0．07mg／mL。