LHRH受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力

目的探讨人促黄体激素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)受体在喉癌组织中的表达及其在喉癌HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的亲和力。方法取外科手术收集的50份喉鳞癌及20份癌旁组织标本,采用Western blot法检测LHRH受体的表达,免疫荧光分析法检测LHRH受体的亚细胞定位,ELISA法检测HEp-2细胞膜表面LHRH受体与LHRH-PE40的亲和力。结果 LHRH受体在喉癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P0.001);LHRH受体在喉癌组织中定位于细胞膜和细胞质,而在癌旁组织中定位于整个腺体周边;LHRH受体在HEp-2细胞膜表面与LHRH-PE40的结合显示出线性和饱和性,且可被LHRH直接特异性抑制。结论 LHRH受体在喉癌组织中的过度表达及其在喉癌细胞表面与LHRH-PE40的高亲和力表明,其可能是LHRH-PE40的一个潜在的治疗靶点。     

LHRH-PE40与癌细胞表面LHRH受体结合特性的检测

目的检测LHRH-PE40融合蛋白是否保留了LHRH与癌细胞表面其相应受体特异性结合的性质。方法在Hela细胞培养液中,分别加入LHRH和LHRHPE40,经结晶紫染色法检测A值。另取宫颈癌组织切片,分别加LHRH-PE40和LHRH后,再加兔抗PE40血清和羊抗兔IgG异硫氰酸荧光素,在荧光显微镜下观察荧光强度。结果随着LHRH与LHRHPE40的摩尔数之比由100/1、250/1增加到500/1,细胞毒性的效果逐渐减弱。当LHRH/LHRH-PE40达到500/1时,肿瘤细胞表面的LHRH受体饱和;LHRH/LHRHPE40达750/1时,其A值与500/1时的A值接近。宫颈癌组织加入LHRH竞争后,荧光强度较仅加LHRHPE40组明显减弱。结论重组毒素LHRH-PE40仍保留了与癌细胞LHRH受体结合的特性。     

LHRH-PE40对宫颈癌细胞株细胞周期及Ki-67、Bcl-2的影响

目的观察LHRH-PE40对宫颈癌Hela细胞系凋亡及增殖的影响,为其临床应用提供理论依据。方法采用人宫颈癌Hela细胞株进行培养,在培养液中分别加入不同浓度的LHRH-PE40,作用48h后,观察Hela细胞形态的变化,并通过结晶紫染色法检测宫颈癌Hela细胞株对LHRH-PE40的感受性;用流式细胞仪及免疫组化法检测LHRH-PE40对Hela细胞周期、Ki-67及Bcl-2的影响。结果LHRH-PE40对Hela细胞活性的抑制作用呈剂量依赖性,通过量效曲线可以看出,LHRH-PE40的最小有效剂量为0·625μg/ml;半数致死剂量为0·969μg/ml。在1·0μg/ml浓度下,癌细胞中的Ki-67阳性细胞(用药前80%,用药后42%)及Bcl-2阳性细胞(用药前66%,用药后43%)比率均下降,凋亡细胞比率增加(由0增加到3·7%)。在1·0μg/ml浓度下,细胞的G0/G1期细胞比率增加15·21%;S期细胞变化不大,而G2/M期减少38·28%。结论LHRH-PE40可以有效地抑制宫颈癌细胞的增殖,诱发肿瘤细胞凋亡,是一种很有应用前景的抗肿瘤药物。     

IRX1基因在肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨易洛魁家族同源盒基因IRX1(Iroquois homebox gene)在肝癌中的表达及其临床意义。方法收集82份肝癌组织(高分化26份,Edmondson分级Ⅰ级;中分化25份,Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ和Ⅱ级;低分化31份,Edmondson分级Ⅱ-Ⅲ和Ⅲ级)和11份正常或良性疾病非癌组织标本,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot检测各组肝脏组织中IRX1的表达,免疫组织化学法检测IRX1在肝脏组织中的定位及临床特征。结果肝癌组织中IRX1基因和蛋白的表达均明显高于非癌对照组(P<0.05),且其表达量与肿瘤的分化程度相关,肿瘤分化程度越低,其表达量越高(P<0.05)。IRX1在肝癌组织中的阳性表达率明显高于非癌对照组(P<0.05),且伴随着肿瘤分期增加和分化程度的降低,IRX1阳性率越高,但IRX1阳性率与HBV感染以及伴随肝硬化情况无明显相关性(P>0.05)。IRX1染色阳性的高分化肝癌组织中,68.2%定位于细胞质,18.2%定位于细胞核,13.6%胞质和胞核均阳性;IRX1染色阳性的低分化肝癌组织中,胞质胞核均阳性的增加至65.5%。结论IRX1可能参与调控肝癌的发生发展过程,IRX1的表达与肝癌的分化程度有关,提示IRX1可作为判断肝癌预后、分化程度以及肿瘤靶向分子治疗的指标。     

TCT筛查、阴道镜活检及病理在宫颈癌筛查中的应用

目的评价TCT宫颈液基细胞学、阴道镜下活检及组织病理学在宫颈癌筛查中的作用。方法回顾性分析TCT筛查异常的397例患者,包括非典型鳞状上皮细胞(ASC)195例,低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)82例,高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)114例,均行阴道镜下活检进行病理诊断。结果宫颈上皮内瘤变(CIN)CINⅠ43例、CINⅡ39例、CINⅢ45例、HPV感染14例、慢性宫颈炎168例、宫颈原位癌及宫颈浸润癌共27例。CIN及原位癌年龄主要分布在26～45岁,宫颈浸润癌主要分布在36～45岁,TCT对LSIL、HSIL和宫颈浸润癌的诊断符合率为20.73%、62.28%、100%。同时,53.66%的LSIL和37.72%的HSIL被细胞学诊断过高,25.61%的LSIL被细胞学诊断过低。结论宫颈癌筛查十分必要,TCT筛查、阴道镜活检及病理三阶梯检查对宫颈癌可以进行早诊断、早治疗,从而降低宫颈浸润癌的死亡率。     

Smac和MDM2蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Smac和MDM2蛋白的表达与宫颈鳞癌临床病理参数之间的关系,以了解其在宫颈癌的发生、发展、转移中的作用及意义。方法用免疫组织化学方法,检测60例宫颈鳞癌和45例宫颈上皮内瘤变(CIN)及15例正常宫颈组织中smac和MDM2蛋白的表达,并分析其表达与年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移间的关系。结果Smac蛋白在正常宫颈、低级别宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)、高级别宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)及宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为100%(15/15)、85%(17/20)、72%(18/25)及65%(39/60)。MDM2蛋白在正常宫颈、子宫颈低、高级别鳞状上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0(0/15)、10%(2/20)、22.4%(6/25)及61.7%(37/60);Smac和MDM2蛋白的表达在正常宫颈对照组和CINII-III及与宫颈鳞癌之间均有统计学差异(P<0.05)。宫颈鳞癌中Smac和MDM2蛋白表达在淋巴结有无转移及组织分化分组中,差异有统计学意义(P<0.05);Smac蛋白和MDM2蛋白的表达之间存在负相关性(r=-0.435,P<0.001)。结论Smac和MDM2...     

实时荧光定量PCR方法检测人癌组织中RFP蛋白的表达

目的检测RFP(Ret finger protein)蛋白在人正常组织及人癌组织中的分布。方法采用实时荧光定量PCR方法,以18 S rRNA为内对照,检测RFP在人正常组织及人癌组织中的表达水平。结果RFP表达水平子宫颈鳞状细胞癌组织高于正常子宫颈组织,子宫内膜腺癌组织高于正常子宫内膜组织,胃腺癌组织高于正常胃组织,食管鳞状细胞癌组织高于正常食管组织,而子宫内膜腺癌组织高于子宫颈鳞状细胞癌组织,胃腺癌组织高于食管鳞状细胞癌组织,脑癌组织高于正常脑组织。结论RFP可能成为治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。     

LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用

目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用。方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性。将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用。结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2·103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68·49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制。结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用。     

宫颈涂片检验结果分析

目的探讨液基超薄细胞学+TBS系统对宫颈癌及宫颈癌前病变的诊断价值。方法对2008年10至2010年1月在在本院就诊280例,进行回顾性分析,患者行宫颈液基超薄细胞技术检查和TBS细胞学分类诊断,对阳性者进行阴道镜下活检对比。结果280例涂片中检出异常涂片5例,其中癌2例,不典型鳞状细胞(ASCUS)1例,低度鳞状上皮内病变(LSIL)1例,高度鳞状上皮内病变(HS1L)1例。结论宫颈液基超薄细胞技术能有效反映宫颈病变情况,和TBS检测结合有利于宫颈癌的早期发现。     

阴道镜联合病理活检对宫颈病变筛查的价值

目的探讨阴道镜联合病理活检对宫颈病变筛查的应用价值。方法以我院2007年1月至2009年12月妇产科行宫颈病理学检查患者614例为研究对象,随机分为阴道镜联合病理活检组(简称联合组)372例和病理活检组(简称活检组)242例,比较2组宫颈病变检出率及联合组不同病理分型宫颈癌的阴道镜影像表现。结果 2组对宫颈糜烂、内膜异位、尖锐湿疣、宫颈息肉等常见宫颈良性病变检出率无显著性差异(P>0.05);联合组宫颈癌检出率为11.98%,显著高于活检组(P<0.01);病理报告正常者33例,占13.64%,显著低于活检组(P<0.05);联合组共检出宫颈癌29例,其中鳞状细胞癌13例,占44.83%,腺癌13例,占44.83%,腺角化癌3例,占10.34%。阴道镜下图像以白色上皮表现最多见,占41.38%,其次依次为血管病变和猪油样改变,分别占34.48%和19.94%,另有2例为正常图像,占6.90%。结论阴道镜检查联合镜下病理活检可有效提高宫颈癌早期检出率,不同病理类型宫颈癌在阴道镜下现象具有多形性,单独应用阴道镜具有局限性,临床确诊仍需病理活检。     

运用实时荧光定量RT-PCR检测人正常组织及肿瘤组织中BRDT表达

目的探讨BRDT基因在正常组织及癌组织中的分布及其作为肿瘤治疗靶分子的可能性。方法运用实时荧光定量PCR方法分析BRDT在人正常组织及癌组织中的表达,使用18S rRNA作为内对照。结果在所检测的正常组织中该蛋白的mRNA只存在于睾丸组织中,而在其它组织不表达;在检测的10例胃腺癌组织标本中,有6例mRNA的微弱表达;在检测的10例食管鳞状细胞癌组织标本中,有3例mRNA的微弱表达;在检测的12例子宫颈鳞状细胞癌组织标本中均未有表达;在检测9例子宫内膜腺癌组织标本中,有2例微弱表达;在检测12例脑癌组织标本中,只有1例微弱表达。结论BRDT不可能作为子宫颈鳞状细胞癌、脑癌、子宫内膜腺癌及食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点,是否能够做胃腺癌的靶点还需进一步探讨。     

LHRH-PE40注射剂对体外培养人肿瘤细胞系的细胞毒作用

目的 观紊ＬＨＲＨ－ＰＥ４０注射剂对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用。方法 用ＭＴＴ检恻 ＬＨＲＨ－ＰＥ４０对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用，找出敏感肿瘤细胞系。结果ＬＨＲＨ－ＰＥ４０对体外培养的多 种人肿庙细胞具有细胞毒作用，细胞对药物的敏感程度依次为：ｓｍｍｕｕ７７２１（人肝癌）＜ＨＥＰＧ２（人肝癌）＜ＨＣＴ－８(人结肠癌）＜ＭＣＦ－７（人乳腺癌）＜Ａ５４９（人肺腺癌）＜ＭＧＣ－８０３（人胃癌）。结论 为动物体内的药效学研究和临 床用药提供依据。     

LHRH-PE40的免疫原性及其抗体对细胞毒作用的影响

目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响。方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRHPE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRHPE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组。用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用。结果抗LHRHPE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24d基本达到最高水平。血清中和后LHRHPE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1～2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍。结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRHPE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据。     

Characteristics of phospholipids in human lung carcinoma

Human lung carcinoma tissues with histological types of adenocarcinoma, squamous cell and small cell carcinoma were investigated for phospholipids. There were marked differences in the phospholipids between these lung carcinoma and normal lung tissue. A marked decrease in saturated phosphatidylcholine (PC), predominantly the dipalmitoyl species, was noted in the carcinoma, although they still contained 17–20% of the saturated classes. The lung carcinoma contained less phosphatidylglycerol (PG) and lyso-bis-phosphatidic acid and more cardiolipin and phosphatidylinositol (PI) than the normal lung tissue. These alterations observed in the lung carcinoma apppeared to show that they lose the characteristic feature of phospholipids in the lung tissue. The differences in the lipid composition among different cell types of lung carcinoma were also noted. The squamous cell and small cell carcinoma contained more triacylglycerol and relatively higher dienes I (monoenoic-monoenoic) and lower dienes II (saturated-dienoic) of PG, respectively, as compared to adenocarcinoma.     

LHRH-PE40对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用

目的 研究促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素(Luteinizing hormone releasing hormone-Pseudomonas aeru-gionosa exotoxin 40,LHRH-PE40)对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用。方法用LHRH-PE40处理A375细胞,透射电镜观察细胞结构的改变;DNA ladder和流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果经LHRH-PE40作用后,透射电镜观察可见A375细胞核聚集于一侧;DNA ladder检测发现,A375细胞的DNA电泳图像呈梯形条带;流式细胞术检测结果显示,A375细胞出现明显的二倍体峰,细胞周期也发生了相应的改变。结论 LHRH-PE40对A375细胞的细胞毒性作用可以有效诱导A375细胞凋亡。     

CENP-E变异体在不同肿瘤细胞株及癌组织中的表达差异

目的研究CENP-E变异体(CENP-EⅠ)在不同肿瘤细胞株及癌组织和相应的癌旁组织中的表达情况。方法应用巢式RT-PCR检测14个细胞株和17份癌组织及相应癌旁组织标本中CENP-EⅠmRNA(缺失第38个外显子)的表达情况,并比较变异体和野生型CENP-E(CENP-EWT) mRNA的表达差异;应用巢式PCR检测上述标本中CENP-E在DNA水平上的变异;并通过细胞增殖试验、细胞周期检测和染色体核型鉴定,分析CENP-EⅠ与细胞恶性程度的相关性。结果 RT-PCR结果显示,实验样本中CENP-E mRNA均有CENP-EWT和CENP-EⅠ两种形式同时存在于一种组织或细胞中,且在正常细胞株和癌旁组织中CENP-EWT表达量较高,在肿瘤细胞株和癌组织中CENP-EⅠ表达量较高,且差异有统计学意义(P<0.05);样本中CENP-E在DNA水平上不存在第38个外显子缺失,且细胞间CENP-E表达量的差异无统计学意义(P>0.05);CENP-EⅠ与细胞的恶性程度有一定的相关性。结论同一细胞内存在2种或2种以上形式的CENP-E mRNA,CENP-E变异体可能与肿瘤的发生有关。