高效液相色谱法快速测定大豆异黄酮制品中有效成分的研究

采用高效液相色谱法测定大豆异黄酮制品中染料木苷、黄豆苷、染料木黄酮和黄豆苷元含量.固定相为Agilent-1100 C18柱(3.9 x 150mm);以甲醇:水=35%～45%为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0～2.0mL/min;柱温为室温;检测波长为260nm.实验结果表明,市售30%大豆异黄酮制品中,含大豆异黄酮糖苷近28%,其中染料木苷为4%、黄豆苷为8%,苷元形式异黄酮未检出;采用酶水解法制备的大豆异黄酮水解物中含染料木黄酮14.3%、黄豆苷元9.8%,其大豆异黄酮苷元占大豆异黄酮总含量的96%.     

热处理与大豆异黄酮苷元的转化分析

目的研究不同加热处理后大豆异黄酮苷元的含量和比例变化情况。方法大豆样品经烘箱50、100和150℃烘干,微波加热5min和炒熟等热处理后,由80%乙醇溶液超声提取,经高效液相色谱SB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)分离,0.2%冰乙酸+甲醇溶液梯度洗脱,紫外检测器260nm检测苷元和β-葡萄糖苷型大豆异黄酮含量。结果黄豆中检测出黄豆苷元、染料木素2种苷元和黄豆苷、黄豆黄苷2种β-葡萄糖苷。随烘箱加热温度升高,黄豆苷元含量增加1～5倍;染料木素增加3～15倍。炒豆中苷元和β-葡萄糖苷增加量最多。微波加热与50℃烘箱加热结果基本相同。青豆、黑豆与黄豆结果相近。结论加热使豆粉中部分糖苷型大豆异黄酮分解转化为苷元,活性成分增多,营养保健价值提高。     

HPLC法同时测定大豆异黄酮片中4个成分含量

目的 :建立HPLC法同时测定大豆异黄酮片中4个成分(大豆苷、染料木苷、大豆甘元、染料木素)的含量。方法 :采用Hypersiol ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃,以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0min～10min,A:16%;10min～20 min,A:16%～30%;20min～33 min,A:30%～50%;33min～36 min,A:50%～70%),流速1.0mL·min~(-1),检测波长260 nm。结果 :大豆苷、染料木苷、大豆甘元、染料木素的线性范围分别为0.0374μg～0.4114μg(r=0.9998)、0.03144μg～0.34584μg(r=0.9998)、0.01084μg～0.11924μg(r=0.9999)、0.00784μg～0.08624μg(r=0.9999)结论 :该方法稳定、快速,可用于大豆异黄酮片中大豆苷、染料木苷、大豆甘元、染料木素的含量测定及其质量控制。     

中国传统豆制品中异黄酮的超高效液相色谱紫外检测器快速定量法

建立了超高效液相色谱-紫外检测器(UPLC-UV)测定豆制品中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的检测方法。采用酸化提取条件,将豆制品中大豆异黄酮及其修饰物水解成3种葡萄糖苷和3种苷元。采用BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为:0~10 min,10%~45%乙腈;10~12 min,45%~100%乙腈。流速为0.3 mL/min,柱温45℃,在波长260 nm处进行紫外检测。6种大豆异黄酮组分在7.5 min内达到完全分离。建立了外标校正标准曲线(R2 ≥ 0.9998),检出限在0.05~0.1 mg·L-1之间,加标回收率在96.8%~102.0%之间。利用本方法对腐竹、豆干、素百叶、素鸡、嫩豆腐、老豆腐和内酯豆腐等7种传统豆制品中大豆异黄酮进行了定性定量分析,总大豆异黄酮含量在8.67~25.83 g/kg间。不同豆制品间6种大豆异黄酮中以大豆苷和染料木苷为主要成分,占88.0%~93.4%。结果表明,本研究建立的UPLC法可有效降低杂质干扰,色谱基线稳定且峰型良好,在10 min内实现对6种大豆异黄酮的快速定量检测,可良好应用于常见市售豆制品的营养评估与质量控制。     

豆粕中大豆异黄酮含量快速测定方法的研究

探究豆粕中大豆异黄酮测定的最优方法。使用高效液相色谱法测定豆粕中大豆苷、大豆苷元、染料木素3种大豆异黄酮的含量并优化其检测条件。结果表明,大豆苷、大豆苷元、染料木素含量分别为194.92、14.20、15.42μg/g;RSD都小于0.30%;大豆苷、大豆苷元、染料木素的平均回收率分别为99.55%、99.65%、99.11%,检测时,流动相为甲醇∶水∶醋酸(40∶60∶1,体积比);柱温为40℃;流速为1.0 m L/min。     

微生物发酵产大豆异黄酮苷元的连续超声波提取工艺及其定量分析研究

选取浅玫瑰链霉菌、红色糖多孢菌及黑曲霉为发酵菌种,采用Plackett-Burman设计及正交试验,对影响微生物发酵法产大豆异黄酮苷元(染料木黄酮、黄豆苷元、黄豆黄素)的连续超声波提取工艺的主要试验因素进行系统优化。以浅玫瑰链霉菌为发酵菌种的实验结果表明：各主要试验因素对3种异黄酮苷元提取率影响程度大小为：抽提溶剂组分、超声波时间、淋洗液体积。而温度、溶剂流速两个因素与提取效率负相关。连续超声波作用时间及抽提溶剂组分为影响异黄酮苷元提取工艺的两个主要影响因素。当两因素的最优值分别为7min及70%时,总异黄酮苷元提取率为(98.7±1.23)%。通过固相萃取(SPE)可有效去除发酵提取液中杂质对HPLC定量分析的干扰,并使3种异黄酮苷元含量浓缩10倍以上,从而使HPLC方法的检测限达到10-3μg/mL,样品总分析时间小于10min,样品回收率为96.2%～103.4%,RSD值小于2.34%。上述结果表明,该方法可满足微生物发酵法产大豆异黄酮苷元的高效提取纯化及快速定量分析。     

HPLC法测定保健食品中四种大豆异黄酮的含量

为建立HPLC法测定保健食品中四种大豆异黄酮的含量,采用Phenomenex Syneisi Fusion-RP80(4μm,4.6×150 mm)色谱柱,柱温30℃,以乙腈-水(pH值为3.0)梯度洗脱。流速1.0 m L/min,检测波长260 nm。结果显示,4种大豆异黄酮的标准曲线线性良好(r0.999 9,n=7),大豆苷、大豆素、染料木苷、染料木素平均回收率分别为101.61%、100.11%、101.95%、101.21%。可见本方法简便、灵敏、有效,可为该类保健食品含量测定及质量控制提供依据。     

淡豆豉、黄大豆及黑大豆中异黄酮苷元的提取与含量比较

为探讨淡豆豉、黄大豆及黑大豆中异黄酮苷元的提取与含量,本研究采用超声提取,用β-葡萄糖苷酶酶解大豆异黄酮中的糖苷键.以聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测不同原料中异黄酮苷元含量.实验结果表明,HPLC最佳流动相为甲醇-乙酸-水(12:1:10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20min内分离良好.大豆异黄酮苷元含量依次为:淡豆豉>黄大豆>黑大豆.精密度实验RSD分别为1.45%和1.6%,平均加样回收率100.93%,证明实验所建立的检测方法准确、可靠.     

高效液相色谱法测定大豆中异黄酮的含量

用高效液相色谱法测定了大豆中六种异黄酮成分,同时比较了不同浓度乙醇制备样品对含量测定的影响。结果显示大豆中极性异黄酮含量高,低极性异黄酮甙元含量低。测定大豆中异黄酮含量的乙醇浓度最好控制在60％-80％。色谱柱采用日本岛津公司的Shim-Pack CLC ODS柱(150×6．0mmID5μm),流动相为MeOHHACH2O（303.566.5),流速为0-8．5min时1．0ml／min,5．8-47min时1．5ml／min,柱温为50℃,检测波长为254。     

UPLC法测定大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量

目的：建立同时测定大豆制品及相关制剂中4种大豆异黄酮类化合物大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量的超高效液相色谱法。方法：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm,1.7μm),流动相：A为体积分数0.2%甲酸溶液,B为乙腈,梯度洗脱;流速：0.4mL/min;检测波长：254nm,柱温：30℃。结果：线性范围：大豆苷0.625～40.0mg/L(r=1.000),染料木苷0.625～40.0mg/L(r=0.9999),大豆苷元0.04～2.56mg/L(r=0.9997),染料木素0.04～2.56mg/L(r=0.9996)。大豆和Natrol? soy isoflavones中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素平均回收率为98.5%～99.8%。结论：本方法简便、快速、灵敏、准确,适用于大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量测定。     

不同发酵豆粕中6种大豆异黄酮成分含量的比较研究

目的：比较不同菌种发酵豆粕中6 种大豆异黄酮成分的含量。方法：采用高效液相法测定不同菌种发酵豆粕中6 种大豆异黄酮成分的含量,所用的菌种为酵母菌、乳酸菌、少孢根霉菌和芽孢杆菌。以Alltima C18(150mm × 4.6mm,5μm)为色谱柱,用甲醇- 水为流动相进行梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温为35℃,检测波 长为254nm。结果：6 种大豆异黄酮成分在各自线性范围内,峰面积与进样量呈良好的线性关系(r ≥ 0.9998);回收率为97%～102%(RSD ＜ 3%)。结论：以同批豆粕为原料,采用不同菌种制成的发酵豆粕中,大豆异黄酮成分的含量存在明显的变化。     

大豆豆脐中异黄酮的提取工艺优化

为了提高大豆豆脐在大豆加工行业的利用率以及更大程度地发挥大豆豆脐的营养价值,本文在国标大豆异黄酮检测方法的基础上,建立了一套适用于测定大豆豆脐中异黄酮含量的高效液相色谱方法。本实验以大豆豆脐为原料,采用乙醇-水溶液作为提取溶剂,通过单因素实验和正交实验确定超声波辅助提取大豆异黄酮的最佳工艺,结果表明:各因素对大豆异黄酮提取率影响大小的顺序为:提取温度(B)>提取时间(C)>料液比(D)>乙醇浓度(A);在乙醇浓度为80%、提取温度为80℃、提取时间为1.5h、料液比为1:35 g/mL时提取三次,大豆异黄酮的提取率可达10.88±0.120 mg/g。本方法准确、高效,能够提取出原料中90%以上的大豆异黄酮,该提取工艺稳定可行,可为大豆豆脐中异黄酮的提取提供理论依据。     

高压液相色谱法测定大豆异黄酮含量

大豆试样在酸性条件下水解后,采用岛津LC-10AtvpHPLC仪,紫外检测器(SPD-10Avvp),波长 254 nm,色谱柱:Inertsil ODS-3柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇:5％ 醋酸溶液30％～70％梯度洗脱,流速:1.0 ml/min,柱温:50℃条件下,测定水解提取物中大豆异黄酮含量。测定结果表明:不同品种、产地的大豆中异黄酮含量为 1.40 mg～3.30 mg/g,大豆胚芽中异黄酮含量最高,为13.18mg/g;其它豆类,如红豆、绿豆、青豆、豌豆等异黄酮含量为0.37mg～1.2mg/g,此测定法能为大豆的选育种、栽培及大豆异黄酮含量评价提供依据。     

红车轴草提取物中异黄酮成分的分析

目的:以高效液相色谱法对红车轴草中四种主要异黄酮物质(大豆黄素、染料木素、鹰嘴豆芽素B和鹰嘴豆芽素A)的含量进行测定。方法:高效液相色谱法的条件:反相C18柱(250mm×4.6mm),MeOH-CH3CN-H2O(3.7:1.3:5,V:V:V)为流动相,流速1.0ml/min,进样量20μl,柱温为室温,检测波长为260nm。样品前处理方法:称取一定量的红车轴草提取物样品加盐酸甲醇溶液(42:500,V:V)40ml,于85℃水浴中回流水解2h,冷却后用甲醇定容到50ml,匀后用0.45μm滤膜过滤,取滤液。结果:经高效液相色谱法测定,以保留时间定性,以峰面积定量,得出红车轴草(1#)中四种主要异黄酮物质的含量分别为:大豆黄素(0.43%)、染料木素(0.35%)、鹰嘴豆芽素B(4.79%)和鹰嘴豆芽素A(1.32%);而红车轴草(2#)中四种主要异黄酮物质的含量分别为:大豆黄素(0.60%)、染料木素(0.64%)、鹰嘴豆芽素B(9.29%)和鹰嘴豆芽素A(2.63%)。     

湘葛一号茎叶中5 种异黄酮成分的高效液相色谱法定量分析

建立高效液相色谱法同时测定湘葛一号地上部分中5 种异黄酮成分含量的方法。采用AT·LICHROM C18
色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,
柱温30 ℃。葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素分别在5.00～50.00（r=0.999 4）、1.00～10.00
（r=0.999 2）、3.64～36.40（r=0.999 9）、0.50～5.00 μg/mL（r=0.999 8）和0.10～1.00 μg/mL（r=0.999 4）范围
内线性良好,检测限分别为0.94、0.24、0.43、0.08 ng/L和0.05 ng/L,定量限分别为2.85、0.73、1.29、0.25 ng/L
和0.15 ng/L。精密度、稳定性和重复性良好,平均回收率分别为100.11%（相对标准偏差（RSD）为1.39%）、
99.54%（RSD为1.47%）、98.06%（RSD为0.32%）、101.52%（RSD为1.89%）和101.05%（RSD为0.32%）。该方
法快速、准确,操作简单,可用于湘葛一号地上部分5 种异黄酮成分含量的同时测定。     

超高效液相色谱法同时测定保健品中4种大豆异黄酮

目的：建立超高效液相色谱法同时测定保健品中大豆苷(Daidzin)、染料木苷(Genistin)、染料木素(Daidzein)和大豆素(Genistein)4种大豆异黄酮。方法：样品用80%甲醇超声提取后,以甲醇-0.1%磷酸水(V/V)作为流动相梯度洗脱分离,使用二极管阵列检测器(Photo-diode Array, PDA)于260 nm波长下测定。结果：4种大豆异黄酮在1.0~50 mg/L范围内,标准曲线线性良好,相关系数R²均大于0.999。平均回收率为86.7%~106%,相对标准偏差RSDs为1.31%~6.32%。方法检出限为0.5~1.0 mg/kg,方法定量限为1.5~3.0 mg/kg。结论：方法学实验结果表明,该方法回收率高,灵敏度高,且操作简单,快速高效,可应用于实际样品测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定保健食品中大豆异黄酮含量

建立保健食品中6种大豆异黄酮的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)同时检测方法。样品中大豆异黄酮采用80%甲醇超声提取、Florisil固相萃取柱净化,C₁₈色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相,流速0.3 mL/min,柱温30 ℃,质谱正离子多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明,大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素以及染料木素在各自浓度范围内线性关系良好;大豆黄苷、大豆黄素检出限均为10 μg/kg;大豆苷、染料木苷检出限均为20 μg/kg;大豆素、染料木素检出限均为30 μg/kg,加标回收率为81.8%~98.4%,相对标准偏差为1.8%~6.7%。所建立的超高效液相色谱串联质谱是一种高灵敏度、高准确度的测定方法,对保健食品中大豆异黄酮的质量控制提供了参考依据,具有一定的理论意义和应用价值。     

高效液相色谱测定水解大豆中异黄酮方法研究

该研究建立大豆提取物中大豆异黄酮高效液相色谱测定方法,通过正交实验确立糖苷型大豆异黄酮转化为游离型大豆异黄酮最佳酸水解工艺条件:盐酸浓度为2．0 mol/L,水解温度为80℃, 水解时间为1．5 h;采用ZorbaX 80A Extend-C18 4．6×150 mm 4 μm色谱柱,MeOH-1．8％冰乙酸水溶液(35:65,V／V)为流动相,MeOH 35％-50％梯度洗脱,流速1．0 ml/min,检测波长为260nm等色谱条件下测定甙元含量,并通过换算因子计算大豆异黄酮含量。     

大豆异黄酮降解液中雌马酚纯化工艺

为从大豆异黄酮降解液中分离纯化雌马酚,以雌马酚的含量为指标,确定聚酰胺树脂为吸附剂纯化雌马酚。通过单因素试验和正交试验,确定最佳吸附条件为粗提液中雌马酚质量浓度2.40μg/mL、pH5、吸附时间6h,得雌马酚吸附率45.36%,最佳解吸条件为乙醇溶液体积分数80%、乙醇溶液用量45mL、乙醇溶液流速0.5mL/min,得解吸率60%。