玉米萌发过程中蛋白酶的活力和蛋白质含量的研究

本文研究了玉米萌发过程中各种因素对其中所含蛋白酶活力的影响,并研究了获得最高蛋白酶活力度最佳萌发条件,通过SDS-PAGE凝胶电泳确定了玉米萌发后可溶性蛋白的分子量。结果表明,水分含量、温度、光照以及赤霉素等因素对玉米蛋白酶活力均有影响,在水分35%、温度30℃、赤霉素30mg/L和自然光照条件下萌发,玉米的蛋白酶活力最高;在萌发6d后,SDS-PAGE图谱中出现了20kD以下的两条明显谱带,b带分子量测定结果为19.2kD,c带分子量测定结果为18.2kD。     

大麦芽中淀粉酶系活力的测定及其作用特性

采用BPNPG7 法、PNP β-G3 法和普鲁兰法分别测定大麦芽中α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和极限糊精酶活力,探讨温度和pH 值对大麦芽淀粉酶系活性的影响规律,并分析淀粉酶系的热稳定性及作用特性。结果表明：大麦芽中α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和极限糊精酶的最适温度分别是70、60℃和55℃,最适pH 值分别为5.5、5.5 和5;α- 淀粉酶热稳定性相对较高;β- 淀粉酶在50℃和55℃时能保持良好的热稳定性;极限糊精酶热稳定性相对较差。α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和极限糊精酶与水解体系还原糖含量有一定的关系。     

响应面法优化双酶水解技术生产婴幼儿配方米粉工艺

为优化双酶水解技术生产婴幼儿米粉工艺,以α-淀粉酶添加量、β-淀粉酶添加量、调浆水温度为主要影响因素,结合实际生产中的其他水解条件,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken试验设计原理,探讨α-淀粉酶添加量、β-淀粉酶添加量、调浆水温度的最佳组合。结果表明：α-淀粉酶添加量0.04‰（相当于0.15 U/g）、β-淀粉酶添加量0.26%（相当于1 820 U/g）、调浆水温度70.2 ℃时生产米粉的淀粉消化指数高达39.26%,与市售品牌米粉相比,淀粉消化指数提高10%以上。     

淀粉酶分解马铃薯淀粉的因素研究

研究α-淀粉酶与β-淀粉酶对马铃薯淀粉的分解效果。在控制一定温度和时间的条件下,采用正交设计、因素分析、优化处理、均衡试验。实验结果表明,α-淀粉酶添加量0.15%(4000U),淀粉量20%,处理温度80.0℃,时间13min,液化效果达到最佳;β-淀粉酶量0.15%(50000U)、温度60℃、时间46h、pH5.4,糖化效果最佳。     

青稞萌发中两种淀粉酶的研究

分析研究了不同浸泡条件对青稞吸水率的影响；测定了不同发芽条件下青稞萌发过程中α-淀粉酶及β-淀粉酶活力的变化。确定了青稞萌发过程α-淀粉酶和β-淀粉酶的最大酶活力形成条件为萌发温度16℃，吸水度46％，萌发时间5d。     

小麦陈化过程中淀粉酶活力变化的研究

试验采用控制温度和湿度的人工陈化方法,促使小麦在温度为40℃、湿度100%的条件下加速陈化,并通过对陈化过程中小麦α-淀粉酶及总淀粉酶活力变化的测定,结合近几年粮食陈化机理的研究,探讨小麦中α-淀粉酶与总淀粉酶活性随陈化时间的变化规律。     

浓缩苹果汁加工中酶作用及贮藏稳定性研究

以红富士苹果浓缩汁为材料,采用单因素试验,研究果胶酶和α- 淀粉酶对还原糖、总酸、可溶性固形物等几个指标的影响,同时找出适合浓缩苹果汁澄清的果胶酶和α- 淀粉酶的酶用量、温度和时间。实验结果表明,在酶用量0.1%、温度50℃、时间1.5h 的条件下,浓缩苹果汁的澄清效果较明显。将加入果胶酶和α- 淀粉酶的浓缩苹果汁置于4℃和26℃条件下贮藏,测定其在贮藏过程中还原糖含量、总酸含量、pH 值和透光率等指标的变化。结果表明,在4 ℃贮藏条件下,随着贮藏时间的延长,还原糖含量、总酸含量、pH 值、透光率变化幅度较小,果汁营养成分保持较好,适宜贮藏。     

发芽黄豆β-淀粉酶活力的测定与比较

实验对豆类β-淀粉酶的最佳活力的条件进行了选择和比较。结果表明,在研究的豆类中黄豆的β-淀粉酶含量较高;通过对黄豆发芽前后β-淀粉酶活力的比较发现,发芽第3d中黄豆的-淀粉酶活力最高;发芽黄豆β-淀粉酶活力为最大的条件是pH5.7~6.6、温度40~50℃、最佳提取时间1.5~2.0h。     

马铃薯α-淀粉酶基因的克隆及生物信息学分析

利用RT-PCR 方法从马铃薯(Solanum tuberosum)茎段总RNA 中扩增、克隆amyA1 基因(NCBI 登录号GQ406048.1)。采用半定量RT-PCR 方法检测amyA1 基因在马铃薯茎、叶等不同组织中的表达强度,表明在茎组织中的表达丰度略高。利用生物信息学软件分析amyA1 密码子的偏好性;同时对AmyA1 氨基酸的理化性质、细胞内定位、保守结构及高级结构进行预测。基于NCBI 数据库中有物种代表性的29 种α - 淀粉酶基因序列构建了基因进化树。amyA1 基因全长1224bp,可编码一条理论分子质量为46.40kD、407 个氨基酸残基组成的、可能为亲水性的胞外酶。与NCBI已登记的马铃薯α - 淀粉酶基因(登录号M79328.1)核苷酸及氨基酸序列同源性达98%。第20～348 位点范围内的氨基酸残基含有与淀粉酶13 家族及亚家族相似的催化活性域(PF00128、SM00624),第349～407位点范围内的氨基酸残基含有α - 淀粉酶C- 末端β折叠区域(PF07821)。蛋白质结构预测表明氨基酸残基序列有维持淀粉酶活性的(β /α) 8 桶状结构以及其他几个功能域结构。所构建的基因进化树表明,两个马铃薯α - 淀粉酶基因与木薯、苹果的序列同源性较高,与菜豆的次之,与水稻、大麦、玉米等单子叶植物的序列同源性较低。     

淀粉酶产生菌MSP13筛选及其产酶条件初步优化

从优质白酒窖泥中分离筛选出13 株产淀粉酶的兼性厌氧细菌,通过测定α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和脱支酶酶活力,最终筛选出一株生产4 种淀粉酶活力均相对较高的菌株,并对其进行形态观察,生理生化指标和16S rDNA鉴定,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,并将其命名为MSP13。对菌株MSP13产酶条件进行初步优化,确定其产酶的较佳条件是：CaCl2质量浓度0.15 g/L、MgSO4·7H2O质量浓度0.3 g/L,pH 5.5和温度37 ℃。优化后的菌株MSP13生产4 种酶的酶活力平均提高了31.645%。     

中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05 α-淀粉酶基因的克隆和原核表达

本实验室从新疆盐湖分离得到一株产α-淀粉酶中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05,根据已报道的α-淀粉酶基因(α-AMY)序列的保守区域设计引物,从中度嗜盐菌Bacillus sp.XJ1-05基因组中扩增出α-淀粉酶基因片段,将α-淀粉酶基因纯化后克隆到pGM-T载体上测序,结果表明α-淀粉酶基因片段长约1500bp,与地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的α-淀粉酶基因序列的同源性为95%,两种序列具有一定的同源性。按正确的阅读框架将α-淀粉酶基因片段定向克隆到表达载体pET-32a上,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳表明,α-淀粉酶基因能在大肠杆菌BL21中成功表达,确定表达蛋白的相对分子量为61kD左右,与理论推导的分子量相一致;构建的大肠杆菌工程菌,所产生的α-淀粉酶是包涵体,通过超声波粉碎仪粉碎后,测α-淀粉酶酶活为原菌的1.8倍。     

温度处理对发芽糙米中淀粉酶活力的影响

研究了温度处理对发芽糙米中淀粉酶活力的影响。结果表明 :在 1 6～ 2 8℃温度范围内 ,较低的温度能提高发芽糙米中α 淀粉酶和总淀粉酶活力 ,较高的温度使酶活力高峰提前出现 ,糙米最适发芽温度为 2 2℃。发芽糙米中 β 淀粉酶活力受发芽温度的影响较小。在发芽期间 ,糙米中淀粉含量随淀粉酶活力升高而降低 ,还原糖含量先升后降。     

烤烟烘烤过程中烟叶淀粉酶活性变化及色素降解规律的研究

采用河南农业大学设计制造的电热式温湿度自控烤烟箱,研究了烘烤过程中烟叶淀粉、淀粉酶和淀粉同工酶的变化,及对色素降解的影响。结果表明,在烟叶变黄阶段,淀粉急剧降解,48 h后基本趋于稳定;淀粉酶活性从烘烤开始逐渐升高,并于36 h前后达到一高峰,随后降低,在叶片水分40%~45%和环境相对湿度70%以上时,淀粉酶活性高,淀粉降解快,淀粉酶活性升高和淀粉相对降解量呈动态正相关(rNC89=0.7517*,r云烟85=0.4479),在叶片水分含量降至10%左右时,淀粉酶仍保持较高的活性,但降解量很小,含量几乎趋于稳定。淀粉同工酶电泳胶板上明显可见3条酶带A、B、C,初步确定为α-淀粉酶、β-淀粉酶、R-淀粉酶;β-淀粉酶活性最高,且同工酶活性和生理生化酶活性测定结果相一致。烘烤过程中淀粉和色素降解规律相同,数量变化呈极显著正相关rNC89=0.9649**,r云烟85=0.9428*。      

苦荞在萌发过程中营养物质的变化及其营养评价

通过测定萌发过程中苦荞的蛋白质、脂肪、脂肪酸、氨基酸、总糖、还原糖、α-、β-淀粉酶活性、矿物质元素、VB1和VB2的含量,研究萌发处理对苦荞营养价值的影响。结果表明：萌发过程中,蛋白质和脂肪等大分子物质均呈下降趋势;但可溶性低分子糖类、含氮物质和脂肪酸等小分子物质含量有较大提高,其中还原糖含量上升1.61%～10.63%,总氨基酸含量增加了3.85%,且7 种必需氨基酸含量均呈现上升趋势,赖氨酸增幅最大（30.5%）。与未萌发苦荞相比,VB1、VB2含量变化不大;同时,随着萌发过程的延长,α-、β-淀粉酶活性不断增强。萌发过程中,必需氨基酸/总氨基酸比值和必需氨基酸指数增加,必需氨基酸组成模式更加符合联合国粮食及农业组织/世界卫生组织（FAO/WHO）联合食品标准计划,第一限制氨基酸由赖氨酸转变为蛋氨酸＋胱氨酸。     

海参体壁中α-1,4淀粉酶的分离纯化及性质

通过采用匀浆、硫酸铵盐析、透析、DEAE-52阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶层析等方法从海参体壁中分离纯化并得到了α-1,4淀粉酶。结果表明,该酶具有3条亚基链,分子质量约为420 k D;最适p H值为9.0,最适温度为80℃,90℃条件下保温30 min后仍有38%以上的相对酶活性,因此,该酶是一种具有较高热稳定性的碱性高温淀粉酶。K+、Fe3+和Mn2+对其有较强的抑制作用,Cu2+和Ca2+对其有较强的激活作用。     

糖谱法比较不同产地竹荪多糖结构特征

利用微波辅助水提取长裙竹荪水溶性多糖,高效凝胶排阻色谱联用多角度激光光散射和糖谱法联用荧光辅助凝胶电泳分析比较不同产地长裙竹荪多糖结构特征。结果表明：不同产地长裙竹荪多糖的高效凝胶排阻色谱图、重均分子质量及其分布均相似,并均含有α-1,4-、α-1,6-、β-1,3-和β-1,4-葡萄糖苷键,以及α-1,4-半乳糖醛酸苷键和β-2,1-果糖苷键,不同产地长裙竹荪多糖具有较高相似性。     

响应面试验优化超声辅助β-环糊精包合纯化美藤果油α-亚麻酸工艺

选用美藤果油为原料,采用β-环糊精包合法对其富含的α-亚麻酸进行提取纯化,并辅以超声波技术提升包合作用的效果。在单因素试验结果的基础上,利用Box-Behnken模型进行试验设计,以包合温度、超声波时间和β-环糊精-(混合脂肪酸+无水乙醇)质量比为考察因素,α-亚麻酸含量为指标,通过对数据的响应面处理分析及实验验证,得出了美藤果油中α-亚麻酸提取的最佳工艺条件为包合温度60℃、超声波时间73 min、β-环糊精-(混合脂肪酸+无水乙醇)质量比7.4∶1,此条件下得到的α-亚麻酸含量为59.16%。实验对α-亚麻酸生产新的来源途径进行了探索,通过优化条件为实际生产提供了理论依据。     

β-伴大豆球蛋白天然活性亚基的分离纯化

本研究将离子交换层析和金属螯合亲和层析方法相结合,建立了系统的分离纯化β-伴大豆球蛋白天然状态亚基的方法,通过梯度脲透析复性,使纯化亚基恢复天然构象。利用β-伴大豆球蛋白免疫动物制备抗血清对纯化亚基的免疫活性进行检测。结果表明：离子交换层析结合金属螯合亲和层析方法可以有效地纯化β-伴大豆球蛋白的α、α＇和β亚基,该方法产率高,制备的亚基纯度好,而且能与抗β伴大豆球蛋白血清特异性结合,表明提纯的亚基具有免疫活性。