共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
2.
动物源性食品鸭血、猪血DNA提取及多重PCR鉴别研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:研究从鸭血、猪血中提取DNA的快速简便方法并建立多重PCR鉴别方法。方法:用KI提取法从固体块状鸭血、猪血中提取DNA,经PCR扩增检测提取效果。建立多重PCR方法鉴别动物源性食品中的鸭血、猪血成分,并对市售动物源性血制品进行检测。结果:这种方法提取到的DNA纯度较高,凝胶电泳条带整齐,背景清晰;PCR反应能扩增出目的条带。多重PCR能同时扩增出鸭和猪的条带。结论:这种改进的DNA抽提方法能获得高纯度DNA,比传统方法安全、简便、节省试剂,PCR扩增结果很好,应用多重PCR方法能同时检测出血样制品中的鸭、猪成分。 相似文献
3.
本研究采用改进煮沸法(BP法)以及传统蛋白酶K法(TP法),从16种鱼肉样品中提取DNA,分析比对两种方法提取DNA的浓度、纯度、以及普通PCR和荧光PCR的效果。同时,运用BP法从70个市售鱼肉产品中提取总DNA,并采用DNA条形码技术进行物种鉴定。结果表明,BP法提取DNA耗时较短,对于大部分鱼肉样品,BP法提取的DNA浓度低于TP法,但两种方法提取的DNAA260/A280无显著差异,均满足普通PCR和荧光PCR扩增要求。另外,BP法提取的DNA可用于市售鱼肉产品DNA条形码鉴定,通过比对发现,81.43%的鱼肉产品可匹配到相似度≥98%的物种,在种水平和属水平的鉴定成功率分别为48.57%和72.86%。BP法在提取DNA过程中可缩短时间,降低提取成本,便于大批量样品的检测。 相似文献
4.
陈果 《食品安全质量检测学报》2019,10(11):3339-3342
目的建立实时荧光PCR检测鸭血中鸭、猪、牛等动物源性成分的方法。方法对重庆市火锅店销售的鸭血进行采样检测。提取鸭血样品DNA,进行实时荧光PCR检测,确定循环阈值,分析样品中鸭、猪、牛源性成分。结果 DNA提取液OD_(260 nm)/OD_(280 nm)值为1.8~2.0,纯度较高; 8个市售鸭血样品中2个样品只检出猪源性成分, 1个样品同时检出鸭源性成分和猪源性成分,研究发现所采集的鸭血存在猪血掺假的可能。结论该方法快捷、可操作性强,适用于鸭血中动物源性成分的测定。 相似文献
5.
为筛选适用于食用明胶核酸提取的方法,用标准推荐方法、改良十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)法、QIAGEN食品基因组脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)提取试剂盒法和TIANGEN深加工食品因组DNA提取试剂盒法这4种方法提取牛皮明胶、牛骨明胶、猪皮明胶和鱼皮明胶的DNA。通过所提DNA纯度、浓度和物种来源荧光(Polymerase chain reaction, PCR)的扩增效率比较各种方法的提取效果。结果表明,标准推荐方法提取的DNA纯度较低,蛋白污染严重,荧光PCR扩增成功率低。TIANGEN试剂盒法提取DNA纯度高,但仅对皮来源明胶有较好的检测效果,适用范围有限。改良CTAB法和QIAGEN试剂盒法提取DNA纯度高、杂质少,对荧光PCR的抑制小。除鱼皮明胶外,所有样品均检测到了相应的动物源性,可用于大多数明胶样品的DNA提取。 相似文献
6.
研究鸭血因DNA部分降解而使普通PCR检测结果偏离的优化方法。对普通PCR方法未检出但实时荧光定量PCR方法检出的鸭血DNA通过增加扩增模板量到5u L,扩增产物稀释100倍进行二次扩增,可以得到的DNA纯度较高,凝胶电泳条带明亮,背景清晰,改进的方法能使普通PCR方法检测结果准确性提高,降低假阴性概率。 相似文献
7.
8.
9.
转基因检测中大豆蛋白DNA提取方法筛选及其lectin基因降解分析 总被引:1,自引:0,他引:1
《食品科学》2020,(4)
采用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等检测DNA浓度、纯度、完整性和反应灵敏度,综合评价Nucleo试剂盒、Wizard试剂盒、Dneasy试剂盒、Ezup试剂盒、Dzup试剂盒和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法对大豆蛋白及大豆籽粒中DNA的提取效果,旨在筛选出适用于大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)、大豆浓缩蛋白(soybean protein concentrate,SPC)及大豆籽粒中DNA提取的最佳方法,提高转基因大豆检测的精确性和准确性。结果表明,Nucleo试剂盒和Dneasy试剂盒能够得到纯度高、完整性好的DNA,符合实时荧光PCR的检测要求。Dneasy试剂盒提取的DNA纯度更高,更有利于提高后续PCR的重复性、稳定性和精确性,普遍适用于SPI、SPC以及大豆籽粒中DNA的提取。Wizard试剂盒、Ezup试剂盒和SDS法提取效果适中,SDS法成本最低,但耗时最长。Dzup试剂盒得到的DNA虽然浓度高,但含杂质较多,对实时荧光PCR具有抑制作用,且无法保持完整的基因组DNA,不适用于大豆转基因检测中的DNA提取。采用Dneasy试剂盒提取得到的SPI和SPC样品DNA,对不同长度lectin基因扩增结果不同,表明在蛋白制备过程中lectin基因可能存在降解。 相似文献
10.
目的探讨玉米包衣内含有的杀虫剂、杀菌剂是否影响种子检测过程中的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增效果及检测结果。方法利用紫外吸收法、凝胶电泳法以及PCR.扩增法对提取的包衣玉米DNA浓度和纯度进行测定,考察PCR扩增效果并对检测结果进行判定。结果不同清洗时间所提取的包衣玉米DNA与未包衣种子提取的DNA质量相比几乎没有差异,浓度和纯度均很好,DNA溶液OD_(260)/OD_(280)比值均在1.7~2.0之间,其DNA质量符合国家种子检测标准要求。玉米包衣对PCR扩增效果及检测结果没有影响。结论包衣玉米样品的种子进行检测时可不作清洗而直接进行DNA提取和PCR扩增,仍可得到准确可靠的结果,从而节约人力和物力并缩短检测时间。 相似文献
11.
目的:建立多重PCR方法,鉴别鸭血的真伪,同时鉴定猪血、羊血、牛血、鸡血4种常见掺假动物血。方法:采用试剂盒法和高效提取禽类血液DNA法提取鸭血及其伪品的基因组DNA,利用鸭血细胞色素b基因(Cytb)设计特异性引物,通过文献筛选掺假动物血液的特异性引物,优化五重PCR的反应体系及反应条件,进行方法学验证和市售鸭血样品的检测。结果:所建立多重PCR体系特异性强,引物间无交叉干扰,重复性好,检测灵敏度为1 ng/μL,对市售的9份鸭血进行抽样检测,结果表明本地鸭血市场确实存在掺假现象。结论:多重PCR体系的建立,可以准确、快速检测鸭血制品中掺假的动物血液,为鸭血制品真伪鉴定提供了新的方法。 相似文献
12.
目的建立可从不同种类食用植物油中提取得到高质量的、可用于分子生物学检测的DNA的提取方法。方法使用2种改进十六烷基三甲基溴化铵法(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)和2种商用试剂盒提取6种食用植物油的DNA,通过紫外分光光度计检测所得DNA样品的浓度和纯度。设计特异性引物,并通过普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测DNA样品是否可用于分子生物学分析。结果使用改良CTAB法1及2种商业试剂盒无法有效提取得到的6种食用植物油的DNA,样品无法满足分子生物学检测的需要,使用改良CTAB法2提取得到的6种食用植物油DNA纯度和浓度检测结果均为最佳,其提取的橄榄油、菜籽油、花生油DNA样品可用于后续实时荧光定量PCR检测。结论该方法可为橄榄油、菜籽油、花生油DNA提取提供有效手段,为食用植物油检测和研究奠定基础。 相似文献
13.
烟草转基因检测方法的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
通过试验研究,提出了烟草转基因检测方法和标准,首先提取样品DNA采用260-280nm波长扫描测定提取物DNA浓度和纯度,并利用叶绿体不编码蛋白基因序列PCR扩增确定模板质量,同时进行35s启动于,NOS终止子的PCR扩增,对于未出现特异性扩增的样品进行35s和NOS的巢式PCR反应,对于出现目标长度片段扩增的样品再次提取DNA重复检测,并利用限制性内切酶酶切、巢式PCR、探针杂交和目的基因序列扩增进行验证,确定所转目的基因种类。并应用竞争性PCR测定样品中转基因阳性成分含量。 相似文献
14.
磁珠法提取DNA具有可自动化、高通量、操作简单、耗时短和安全无毒等优点。通过测定所提DNA产物的浓度、纯度、得率,荧光定量PCR扩增的Ct值和试剂盒的特异性、敏感性等参数指标,系统研究了几种磁珠试剂盒及方法的提取效果。结果表明,方法经优化后,所选6种试剂盒均适用于鲜肉组织的DNA提取。针对加工样品的DNA提取,建议选择试剂盒2、3、4结合该研究优化方法,其特异性和敏感性均超过90%。研究为建立磁珠DNA提取试剂盒质量评价标准奠定基础,同时为磁珠DNA提取试剂盒研发和磁珠法提取肉及肉制品基因组DNA提取方法的选择提供数据支撑和技术参考。 相似文献
15.
16.
《食品与发酵工业》2018,(12)
采用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测和聚合酶链反应扩增(polymerase chain reaction,PCR)检测DNA的浓度和纯度,对改良十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法与2种商业试剂盒提取4种不同品种酿酒葡萄DNA的方法进行了对比分析,结果表明改良的CTAB法提取DNA完整性较好,基因组DNA样品的OD260/OD280值均在1. 8左右,4个酿酒葡萄均能扩增出PCR条带,且条带清晰,无拖尾现象。说明改良的CTAB法提取的酿酒葡萄基因组DNA浓度和纯度均较高,可以进行PCR扩增、电泳检测、遗传多样性分析以及基因图谱构建等下游分子生物学研究试验。 相似文献
17.
目的探求熟肉干制品最佳的DNA提取方案。方法采用4种不同的方法:CTAB法及3种市售试剂盒法,提取11种不同牛肉干样品的DNA,通过对方法的提取耗时,提取DNA的质量及提取DNA用于实时荧光PCR扩增的效果3方面进行比较。结果 TAKARA试剂盒法提取DNA耗时最短仅需要0.5 h,OMEGA试剂盒法提取的DNA的纯度较好,A 260/A 280比值最接近1.8,Tiangen的深加工食品DNA提取试剂盒法提取的DNA做实时荧光PCR的CT值最小,扩增效果最佳。结论 Tiangen试剂盒法对于熟肉干制品DNA的提取效果更为理想。 相似文献
18.
环境微生物DNA提取是应用分子生物学技术研究微生物群落的基础,DNA提取的纯度及其结构完整性直接影响后续试验结果。环境样品多种多样,包括水样、土壤、活性污泥、传统发酵食品、白酒酿造环境等,使得DNA的提取方法没有统一的标准。目前DNA的提取方法有很多,大致可以分为直接提取法和间接提取法。直接提取法操作简便,耗时短,而杂质较多;间接提取法操作复杂,耗时长,但纯度较高。文章在对比各种DNA提取方法的基础上,重点介绍了白酒酿造环境中DNA的提取方法和大片段DNA的提取及其研究进展。 相似文献
19.
目的 探讨不同核酸提取方法以及蒸、煮、烤烹饪方式制作的混合熟肉制品的多重荧光定量PCR检测结果之间的差异。方法 用3种不同的提取方法:抽提法、离心柱法及磁珠法,提取经过蒸、煮、烤烹饪方式制作的牛、鸡、猪、鸭混合样品的DNA,通过对不同方法提取DNA的质量及提取DNA用于多重荧光PCR检测的效果方面进行比较。结果 三种方法提取DNA的浓度及纯度无明显差别,磁珠法提取的混合样品DNA进行多重实时荧光PCR检测的Ct值最小,扩增效果最佳。结论 该研究中磁珠法提取熟肉制品DNA的检测效果更为理想。 相似文献
20.
目的 建立高效快速提取生鲜牛乳中总微生物基因组DNA的方法。方法 以生鲜牛乳为原料, 采用SDS-蛋白酶K法裂解细胞, 酚氯仿有机抽提去除蛋白和醋酸钾溶液沉淀蛋白, 制备样品中总微生物基因组DNA。结果 以NET(Tris?HCl, EDTA, NaCl)作为裂解缓冲液, 蛋白酶K消化得到的基因组DNA纯度和产量较高, 耗时较短; 缓冲液选择NCT(NaCl, CaCl2, Tris?HCl)时, PCR产物特异性低于前者且产量较低。RNA酶消化对产品纯度影响不大且会降低产量。用醋酸钾(KAc)沉淀去除蛋白, 操作快速简单, 耗时最短, 但DNA产量最低。结论 SDS-蛋白酶K法提取的生鲜乳微生物总DNA可以作为牛乳样品进一步检测的分子基础。 相似文献