大米镉结合蛋白的凝胶层析纯化及生化性质

目的研究大米镉结合蛋白(rice cadmum-binding protein,RCBP)的纯化及生化性质,探讨RCBP的形成机制。方法采用Sephedex G-75凝胶层析从乙醇沉淀的大米蛋白(Ethanol precipitation protein,EP)中纯化RCBP,SDS-PAGE鉴定RCBP的纯度及测定分子质量,氨基酸自动分析仪、FTIR分析RCBP的氨基酸组成及二级结构。结果凝胶层析纯化得到组分b(目标RCBP),组分b为纯度均一的RCBP,分子质量约为32 kDa。组分b中疏水性氨基酸占56.76%、芳香族氨基酸占19.41%,是一类富含疏水性氨基酸和芳香族氨基酸的镉结合蛋白。组分b中N-H相对于C=O以反式构型存在,二级结构只含有β-折叠和β-转角。结论镉通过疏水氨基酸或芳香族氨基酸的特征基团与大米蛋白结合形成RCBP。     

大米镉结合蛋白的分离及理化特性

本实验选用一种镉含量较高的大米为原料,采用碱法提取大米蛋白（alkali-extractable protein,AP）,依次用热变性和乙醇沉淀分离AP,制备大米镉结合蛋白（rice Cd-binding protein,RCBP）,并分析了RCBP的紫外吸收特征、氨基酸组成、分子质量及二级结构。结果显示：AP、热变性蛋白（thermally denaturated protein,TP）和乙醇沉淀蛋白（ethanol-precipitated protein,EP）均在210 nm波长处有最大吸收峰,氨基酸组成类似;热变性去除了分子质量为94 kD的蛋白质,分子质量为5 094 kD的蛋白质含量减少,乙醇沉淀进一步减少了分子质量分别为50 kD和14 kD的蛋白质。AP的二级结构主要为α-螺旋和β-转角,有少量β-折叠;TP的二级结构只含有β-折叠和β-转角,且以β-折叠为主;EP的二级结构主要为β-折叠和β-转角,还含有少量α-螺旋和无规卷曲。表明热变性和乙醇沉淀使得AP中的镉结合蛋白得到分离,可以作为一种分离RCBP的方法。     

纤维结合蛋白(Fn)的结构及其分离纯化

纤维结合蛋白是一种具有重要生物学功能的高分子糖蛋白,存在于人及动物的体液（血液、羊水、组织液）,细胞表面及细胞间质中,分子量约450 kD.本文主要阐述了纤维结合蛋白的结构、性质及其纯化工艺的分析和比较,并对纤维结合蛋白的应用及其前景进行展望.     

大米肽中压离子交换色谱分离及其免疫活性评价

为进一步提高经过DA201-C型大孔吸附树脂脱盐、40%乙醇梯度洗脱的大米免疫活性肽RPHs-A3组分的纯度和免疫活性,采用中压离子交换色谱对其进行进一步分离纯化,并对分离得到组分的免疫活性进行了评价。结果表明,采用WorkBeads 40Q强阴离子交换树脂、2.6cm×40cm色谱柱对RPHs-A3组分进行分离的最佳条件为:上样浓度30mg/mL,上样量5 mL,起始缓冲液A为pH 9.0的0.01mol/L Tris-HCl,洗脱缓冲液B为含1 mol/L NaCl的pH 9.0、0.01 mol/L Tris-HCl,上样、洗脱流速分别为1,10mL/min。共收集到5个组分,其中RPHs-A3-B3组分在MTT试验和小鼠巨噬细胞脂多糖(LPS)炎症模型中皆表现出较高免疫活性,对RAW264.7细胞具有显著增殖作用,其SI值为1.315;且对炎症模型中细胞内NO释放量具有显著抑制作用(P0.05),抑制率为8.28%。采用中压离子交换色谱能有效地对RPHs-A3组分进行分离纯化,使SI值从1.273提高到1.315,且对细胞内NO释放量具有显著抑制作用。     

银杏种仁蛋白分离纯化及其抑菌活性

从银杏种仁中分离纯化具有抑菌活性的蛋白质,并分析其抑菌活性。结合抑菌活性分析,采用硫酸铵分级盐析、透析、纤维素DE-52阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤柱层析对银杏种仁蛋白（Ginkgo bilobaseed protein,GBSP）进行分离纯化,得到一种抑菌蛋白GBSPⅠ-A。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）检测结果显示,该蛋白呈单一条带,其分子质量约为42.80 kD;Superdex G-75柱层析结果显示GBSPⅠ-A呈单一对称峰,高效凝胶渗透色谱测定其分子质量为39.32 kD;该蛋白对肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、戴尔有孢圆酵母及黑曲霉的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）分别为20、20、20、12 mg/mL。     

菊粉酶的分离纯化与鉴定

将无花果曲霉(Aspergillus ficuum)SK004菌株所产菊粉酶系进行分离纯化。通过活性炭脱色、硫酸铵分级沉淀、透析脱盐、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-75凝胶色谱后,主要得到1种菊粉酶。经SDS-PAGE分析此菊粉酶为单一谱带,分子质量为53665u。     

大米蛋白的分离提取和应用

阐述了目前较常见的大米蛋白的分离提取方法以及应用现状,为今后大米蛋白的进一步研究提供了基础。大米蛋白的分离提取方法包括碱法提取、酶法提取、分步水解、溶剂提取和物理分离等,主要用作营养补充、食品添加剂和功能性食品。     

大米分离蛋白的酶法提取及其性质

本文研究了以糖渣为原料,用淀粉酶法水解法制备大米分离蛋白(E-RPI)的反应条件,并测定了蛋白质的溶解性、乳化性及其氨基酸组成。结果表明,反应中固液比为1:12.96、加酶量为0.096％、反应时间为2.3h时效果最好,使糖溶出量达到原料重量的25.7％,产物中的蛋白含量为88.6％,回收率为90.5％;E-RPI的乳化活性随pH值的升高而增大,与大豆蛋白相比,乳化活性低而稳定性高。E-RPI中除赖氨酸外,其它必需氨基酸的含量均高于大豆蛋白和酪蛋白。     

大米淀粉粒结合蛋白研究进展

淀粉结合蛋白(starch granule-associated proteins,SGAPs)是指紧密结合于淀粉表面及内部具有显著特征的一类蛋白质,在大米中的质量分数为0.2%~0.5%,不同于普通蛋白,其更多以酶的形式存在于淀粉颗粒中决定淀粉颗粒的结构及形态,对淀粉颗粒的生理生化特性有着重要作用。本文综述了目前国内外关于大米淀粉结合粒蛋白(SGAPs)的研究进展,介绍了几种较为典型的淀粉结合蛋白的分布、分离与纯化方法及其对淀粉的理化特性产生的影响,旨在对大米淀粉深入研究及大米淀粉工业提供一定理论研究基础。     

花生抗真菌蛋白的纯化及活性鉴定

利用亲和色谱Affi-gel和葡聚糖凝胶色谱SephadexG-75从花生种子中分离出一种抗真菌蛋白。试验结果表明:此种纯化的抗真菌蛋白对植物致病菌苹果轮纹病菌(Physalosporapiricola)、棉花枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、瓜果腐霉病菌(PythiumapHanidermatum)的生长具有明显抑制作用。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为34.4kDa。还原和非还原状态下的此抗真菌蛋白均显示单一区带,说明该抗真菌蛋白为单倍体蛋白。     

枯草芽孢杆菌CF-3抑菌蛋白的分离与鉴定

本研究采用硫酸铵分级盐析、交联葡聚糖凝胶分子层析(Sephadex G-75)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法对生防菌枯草芽孢杆菌CF-3无菌发酵液对复端孢霉F中的主要抑菌蛋白进行了分离与鉴定。结果表明:CF-3无菌发酵液中抑菌蛋白的硫酸铵最佳沉淀饱和度为60%~70%,蛋白质沉淀量为149.03μg/mL,极显著高于其他浓度(p≤0.01);利用60%~70%饱和度的硫酸铵提取的粗蛋白质经Sephadex G-75凝胶柱层析后获得2个吸收峰,8管收集液,其中第2管峰收集液抑菌活性显著高于其他管(p≤0.05);将流分2收集液进一步分离纯化后,将抑菌效果最好的2.3号流分的两条蛋白条带割胶回收,利用生物质谱技术鉴定为γ-谷氨酰转肽酶和胞内丝氨酸蛋白酶,分子量分别约为42.5 ku和33.9 ku。以上结果可为该菌株及其抑菌蛋白的开发应用奠定基础。     

香椿籽多糖的分离纯化及其体外抗凝血活性

为研究香椿籽多糖(Polysaccharides of seeds of Toona sinensis,STSP)不同组分的体外抗凝血活性,以水提醇沉法得到的香椿籽粗多糖为实验材料,通过聚酰胺法脱蛋白、活性炭脱色,经离子交换柱DEAE Sepharose CL-6进行纯化。采用高效凝胶过滤色谱(HPGFC)和离子色谱分别对多糖的分子质量和其单糖组成进行分析,初步研究了纯化后的香椿籽多糖组分的体外抗凝血活性。结果表明:共得到4种纯化多糖组分即STSP-1、STSP-2、STSP-3、STSP-4;HPGFC法测定STSP-2、STSP-3皆为单峰,为均一多糖,其重均分子质量分别为13218 u和36080 u;单糖测定表明,香椿籽多糖主要由阿拉伯糖(Ara)、鼠李糖(Rha)、氨基葡萄糖(GluN)、半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glu)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、葡萄糖醛酸(GluA)、半乳糖醛酸(GalA)组成。体外抗凝血实验表明,STSP-3能显著延长凝血酶原时间(Prothrombin time,PT)和凝血酶时间(Thrombin time,TT),表明其抗凝血活性是通过影响外源性途径、共同途径实现。实验结果为香椿籽多糖的纯化及资源利用奠定了基础。     

芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定

通过纳滤、超滤、制备液相对胰蛋白酶水解芝麻蛋白的酶解液中抗氧化肽进行分离纯化,随后采用高效液相质谱联用法进行结构鉴定,并合成相应多肽验证抗氧化活性。结果表明,经分离纯化与结构鉴定,共获得5个芝麻抗氧化肽,Glu-Leu-Phe-Phe-Gly-Ala-Gly-Gly- Glu-Asn-Pro-Glu-Ser-Phe-Phe-Lys(ELFFGAGGENPESFFK)、Phe-Glu-Ser-Glu-Ala-Gly-Leu- Thr-Glu-Phe-Trp-Asp-Arg(FESEAGLTEFWDR)、Asp-Val-Ala-Asn-Glu-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp- Leu-Lys(DVANEANQLDLK)、Glu-Asn-IIe-Glu-His-Thr-Ala-Ala-Thr-His-Ser-Tyr -Asn-Pro- Arg(ENIEHTAATHSYNPR)、Gln-Asp-Asn-Ala-Asn-Asn-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Pro-Asn-Pro- Arg(QDNANNANQLDPNPR)。胰蛋白酶酶解产生的芝麻抗氧化肽N端以酸性氨基酸残基为主,C末端为碱性氨基酸残基;除抗氧化肽ELFFGAGGENPESFFK是芝麻7S酶解产物以外,其余多肽均来自芝麻11S蛋白酶解。     

古田红曲米抗氧化活性物质的分离纯化

本文对产自不同地区的红曲米进行抑菌、抗氧化活性的测定,结果显示古田红曲米的抗细菌活性稍强于其它地区产的红曲米。采用凝胶柱层析、反相和正相硅胶柱层析等分离纯化方法,结合核磁共振波谱及质谱检测等技术手段对古田红曲的甲醇提取活性物质进行分析和结构鉴定。结果表明不同有机溶剂提取物的抑菌效果有很大差异,同浓度下抑菌效果从大到小依次为枯草芽孢杆菌大肠杆菌黑曲霉塔宾曲霉酿酒酵母菌;抗氧化实验中,古田红曲米抗氧化活性较强,此外,古田红曲乙酸乙酯提取物以及50%水-50%甲醇到0%水-100%甲醇提取物的抗氧化活性也较好。最后,从古田红曲米中分离纯化出2个化合物,鉴定为亚油酸和α-亚麻酸,它们均有一定的抗氧化和抗肿瘤等活性。     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３ 个组分的结构,它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．     

麦麸低聚木糖产品的分离纯化及定性分析

对麦麸低聚木糖粗提液进行了活性炭柱层析,采用脱气去离子水及30%乙醇溶液洗脱,洗脱速度0.5mL/min,洗脱曲线峰形较窄而且很对称,可以得到以木二糖~木六糖为主的低聚木糖产品,分离效果较好,因此,活性炭柱层析可以有效地分离纯化麦麸低聚木糖糖液。并且以聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel P-2)为介质,选用26 mm×800 mm的层析柱,分离活性炭柱层析洗脱浓缩液,对影响分离效果的进样量进行分析后表明,在采用进样量5 mL,洗脱速度0.4 mL/min,脱气去离子水洗脱时,可以分离得到6个明显的单峰曲线,分离效果较好,通过薄层层析图谱可以看出该法能较好的分离纯化出低聚木糖液的各个单一组分。为麦麸低聚木糖产品的分离纯化提供了参考方法,同时也为利用麦麸低聚木糖中各单一组分标样的制备提供了理论依据。     

玉米环二肽（组氨酸-脯氨酸）的分离纯化、结构鉴定及其生物活性

环二肽（组氨酸-脯氨酸）（cyclo (His-Pro),CHP）是一种活性环二肽,在降血糖、抗氧化方面具有显著效果。实验通过DE-52阴离子交换层析、Sephadex G-25凝胶层析、半制备型高效液相色谱等方法,对高温高压环化后的玉米蛋白水解物进行分离纯化研究,得到CHP。采用超高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱对产物的结构进行鉴定,并通过体外降血糖和抗氧化实验初步测定了其生物活性。结果表明：采用本研究的分离纯化方法制备得到的CHP的纯度为97.36%,傅里叶变换红外光谱和核磁共振波谱的测定表明该肽的结构与预期结构相符,初步的生理活性鉴定结果表明,玉米CHP经分离纯化后对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性具有很强抑制能力,半抑制浓度（IC50）分别为1.1、1.9 mg/mL;且具有很强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除活性（IC50 67 μg/mL）和还原力。