新疆食源性单增李斯特菌MLST分型及耐药性分析

目的 研究新疆食源性单增李斯特菌分型和耐药情况.方法 将62株食源性和1株羔羊脑炎分离株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)及耐药性实验.结果 63株单增李斯特菌分为20个ST型, 16个克隆群(clonal complex groups, CC), 其中68.25% ...     

禽肉制品中单增李斯特菌的DiversiLab分型

目的：研究从同一类食品中分离出的单增李斯特菌间的同源性关系,为预测预警保障食品安全和食源性疾病溯源提供科学依据和技术支持。方法：应用DiversiLab分型系统对2001-2010年福建出入境检验检疫局从各类禽肉制品中分离出的25 株单增李斯特菌进行分型,其中包括：DNA提取、重复序列-聚合酶链式反应（repetitivesequence-based polymerase chain reaction,rep-PCR）、微电泳芯片分离检测及数据分析。结果：DiversiLab分型中,相似系数为95%时,25 株菌被分为了6 组（G）;相似系数为97%时,25 株菌被分为11 组（P）。结论：DiversiLab分型结果较准确地揭示了25 株菌株间的亲缘性关系。基于rep-PCR的DiversiLab分型系统,是一种操作简单、分辨率高、重复性好且高效快速的基因分型方法,可作为食源性病原体检测及食源性疾病溯源的工具。     

食品中单增李斯特菌的血清分型及脉冲场凝胶电泳分型

对进口食品和国内食品中的单增李斯特菌进行血清学分型和分子分型研究,探讨不同来源菌株之间的遗传相关性及不同分型方法之间的联系。对分离的单增李斯特菌进行血清学分型和脉冲场凝胶电泳分型。69株单增李斯特菌分为4种血清型,主要血清型为1/2a(3a)型,脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型分为55种带型,主要型别为GX6A12.CN0018。食品中的单增李斯特菌分子型别呈现多态性,进口食品分离株和国内食品分离株之间无相关性。     

广西单核细胞增生李斯特菌的流行率、毒力特征和分子分型研究

目的 比较广西不同种类食品中单核细胞增生李斯特菌（以下简称单增李斯特菌）的流行情况、毒力特征和分子分型特征,更好地了解单增李斯特菌的遗传特点及其传播的潜力。方法 对来自2002—2020年的210株单增李斯特菌进行全基因组测序（WGS）,分析其序列分型（ST）、克隆群（CC）型及毒力基因。结果 2002—2020年广西53.8%单增李斯特菌分离株来源于肉与肉制品,59.0%分离株来自于谱系Ⅱ,优势ST型为ST8和ST9。79.4%菌株携带LIPI-1基因（hly、prfA、plcA、plcB、mpl、actA）,83.7%菌株携带LIPI-2基因（inlC、inlF、inlJ、inlK）。17.6%菌株携带LIPI-3基因（llsA、llsB、llsD、llsG、llsH、llsP、llsX、llsY）。结论 肉与肉制品是广西单增李斯特菌检出率最高的食品类型,分子分型结果证实了单增李斯特菌种群具有高度的遗传多样性,WGS的高分辨力可用于监测食源性单增李斯特菌病的暴发。毒力基因的分布表明广西单增李斯特菌存在不同程度毒力基因的缺失,应警惕高致病性的菌株引起的食源性暴发事件。     

食品中单增李斯特菌检测进展

研究表明,单增李斯特菌能使人和牲畜共同患病,治病感染性极强,并且已成为四大食源性疾病致病菌之一,因此,对于食品中单增李斯特菌的检测尤为重要.主要介绍国标法和快速检测单增李斯特菌的方法,对我国食品安全问题的管理工作以及保障社会的稳定具有十分重要的意义,并且对国内外不同检测单增李斯特菌的方法做出了整体的比较,对比其检出限与...     

2012年中国食源性单核细胞增生李斯特菌耐药特征及多位点序列分型研究

研究2012年中国23个省市自治区10类食品中分离的635株单核细胞增生李斯特菌的耐药特征及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)测定。方法 采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,选择氨苄西林、复方新诺明、四环素、庆大霉素、红霉素、环丙沙星、氯霉素和万古霉素8种抗生素,对耐药株进行MLST分型。结果 635株单增李斯特菌检测出66株耐药菌,平均耐药率为10.39%。耐四环素菌株最多为49株,其次为耐环丙沙星20株、红霉素10株、氯霉素7株、复方新诺明3株、氨苄青霉素1株、庆大霉素1株、万古霉素1株。耐受2种抗生素有8株,耐受3种及以上抗生素有7株。77株菌耐药性介于中介度,其中75株菌对环丙沙星耐药性介于中介度。耐药株MLST分型表明,ST155、ST9、ST705和ST87为我国单增李斯特菌耐药株常见型别。四环素和四环素-红霉素-氯霉素耐药谱在MLST聚类分析中有集中趋势,耐药菌株主要来源于熟肉制品和中式凉拌荤菜。结论 我国目前食品来源的单增李斯特菌耐药率普遍较低,但与往年相比呈现逐渐增加的趋势。耐药株的主要MLST型别分布与相关耐药谱在聚类分析中相互关联。     

食品中单增李斯特菌快速检测技术研究进展

单核细胞增生性李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)是一种广泛存在于自然界中可导致人畜共患病的病原菌, 同时也是一种常见的食源性致病菌。目前, 食品中单增李斯特菌的检测主要采用国标法, 传统检验方法虽然可操作性高, 但检验流程耗时过长。随着生活水平不断提高, 人们在饮食中摄入受单增李斯特菌污染的食品的风险增大, 如遇到食品安全突发事件, 传统检测不能及时得到检测结果, 无法保障人们的饮食安全。本文概述了基于分子生物学和免疫学发展起来的快速检测方法, 包括PCR法、实时荧光定量PCR法、环介导等温扩增法、酶联免疫吸附法、免疫层析试纸条, 其中环介导等温扩增法已经应用于食品致病菌的检测。通过分析对比以上快速检测方法, 为探索更灵敏高效且适用于基层食品检验的检测方法提供参考。     

基因探针快速检测食品中单增李斯特氏菌

应用AccuProbe基因探针方法快速检测食品中单增李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes),结果表明,采用该基因探针方法检测食品中单增李斯特氏菌特异性强,对食品中单增李斯特氏菌鉴定时间仅需30min,采用增菌肉汤检测低限为7.5×107cfu/mL。对206个样品检测结果表明,AccuProbe基因探针方法可快速准确地检测食品中单增李斯特氏菌。     

2019年北京市食源性单增李斯特菌的分子特征和耐药性研究

研究2019年北京市食源性单增李斯特菌进行分子特征和耐药性。 方法 使用多重PCR进行血清群分型、对分离的56株菌进行脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）、多位点序列分析（multilocus sequence typing, MLST）,使用微量肉汤法检测菌株的耐药性。 结果 56株单增李斯特菌中有28株分离自冷锅串串和中式凉拌菜,1/2a, 3a是主要的血清群。56株菌共分为29个PFGE带型、14个ST型,ST9、ST5、ST8、ST121是其主要的ST型别。2株菌对环丙沙星耐药,1株菌对四环素耐药。结论 冷锅串串和中式凉拌菜是单增李斯特菌污染的高危食品。北京市食品来源单增李斯特菌的ST型别与国内其他地方食品来源菌株一致,与北京市临床分离株一致。     

2012—2015年北京市西城区单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型及耐药研究

探讨单核细胞增生李斯特菌多位点序列分型(MLST)与耐药性的关联性,确定某些具有高致病性潜能的流行克隆株的存在。方法 采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法和E-test药敏试条法对14种抗生素进行药物敏感性试验,以MLST技术对50株菌株进行基因分型。结果 单核细胞增生李斯特菌耐药率为22.00%(11/50),并出现多重耐药株。50株单核细胞增生李斯特菌MLST分析共获得12个型别,以ST9和ST121为优势型别。结论 特定ST型别在食品生产过程中存在特定菌株之间的传递,人源性和食源性单核细胞增生李斯特菌中均发现耐药株,可能存在耐药基因的传递,应加强对具有潜在致病性的ST型别的监测力度。     

Characterization of Listeria monocytogenes isolates in import food products of China from 8 provinces between 2005 and 2007

A total of 48 Listeria monocytogenes isolates of different import food products from 8 provinces between 2005 and 2008 were characterized. The serotype and virulence were confirmed for each strain and molecular subtyping were analyzed by multilocus sequence typing (MLST). Twenty five strains were assigned to serotype 1/2a, and 11 isolates to serotype 1/2b, serotype 4b were found in 7 isolate, and the remaining 5 strains were grouped into serotypes 1/2c, 4a, and 4e. Molecular subtyping schemes found thirty two sequence types (STs) among these isolates and the majority of L. monocytogenes strains belonged to lineage II (56%), followed by lineage I (38%), lineage III (6%). Two molecular subtype clusters, cluster A included all isolates of lineage II, while cluster B contained the isolates of lineages I and lineages III. Two L. monocytogenes strains were not grouped in either of the two clusters. Fifty three isolates were as virulent as L. monocytogenes reference strain EGD in mouse virulence assay, while the isolates 22213 and 22265 had low pathogenicity. These results provide the first molecular insight into the L. monocytogenes strains isolated from import food products of 8 provinces in China and indicate the potential risk to cause human disease if intake by contaminated foods. MLST could be used as a routine subtyping method of L. monocytogenes isolates. In China, inspection and quarantine strategies of imported foods should be strengthened. PRACTICAL APPLICATION: There is a potential risk of listeriosis in China and routine subtyping of L. monocytogenes isolates is important. It is necessary for food hygiene management to strengthen the supervision of imported foods.     

婴幼儿配方羊乳粉生产环节蜡样芽孢杆菌分离株多位点序列分型分析

为探讨我国婴幼儿配方羊乳粉生产环节阳性分离株的遗传多样性,并将其基因序列与已报道的乳源分离株的基因序列进行比对,确立其特征序列,为婴幼儿配方食品生产体系溯源提供依据,为探究其致病机理和有效防控提供参考依据。实验选取glpF、gmk、ilvD、pta、pur、pycA、tpi 7 个管家基因构建多位点序列分析分型方案,鉴定经随机扩增多态性DNA分型得到的42 株Bacillus cereus的序列类型。结果表明：42 株B. cereus分为7 个序列类型（sequence type,ST）,分别为ST-770（4.8%,2/42）、ST-1000（71.4%,30/42）、ST-1084（9.5%,4/42）、ST-1348（2.4%,1/42）、ST-1349（2.4%,1/42）、ST-1350（2.4%,1/42）和ST-1351（7.1%,3/42）;所有分离株被识别为205、142、23三个不同克隆谱系,2 个单态群（ST-770和ST-1351）和2 个独株（ST-1348和ST-1349）;发现4 个新的ST型和4 个新的等位基因,已上传至国际数据库得到新的序列号和等位基因号,分别为ST-1348、ST-1349、ST-1350、ST-1351和glp-253、glp-254、ilv-277、pyc-199。     

温州市单核细胞增生李斯特菌的毒力基因及血清学分型和分子分型研究

目的了解温州市近十年单核细胞增生李斯特菌分离株的血清型、毒力基因及分子分型特征。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法对单核细胞增生李斯特菌进行血清型及毒力基因检测;用多位点序列分型(MLST)方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 97株单核细胞增生李斯特菌分离株分为4种血清型,以血清型1/2b、1/2a为优势血清型,占比分别为48.45%(47/97)、35.05%(34/97);而毒力基因iap、prfA基因阳性率均为100.00%(97/97),hlyA、inlA基因阳性率均为97.94%(95/97),plcB基因阳性率为96.91%(94/97)。其中患者分离株5种毒力基因阳性率均为100.00%(6/6)。97株单核细胞增生李斯特菌分离株得到20个MLST型别,其中ST87型是优势型别,其次为ST121和ST9,ST1和ST779型是患者特有的,ST2、ST3、ST5型分布于食品和患者分离株。结论温州市不同来源的单核细胞增生李斯特菌分离株分子型别呈多态性,食品和患者分离株存在相同的ST型,且这些菌株大部分携带毒力基因,具有潜在的致病性,因此食品中单核细胞增生李斯特菌污染的潜在风险不容忽视。     

奶粉中阪崎克罗诺杆菌耐干燥性与MLST分型的研究

为了解奶粉中阪崎克罗诺杆菌耐干燥性及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)间的关系,对实验室保存的35株阪崎克罗诺杆菌进行干燥试验,并采用MLST对所有菌株进行分子遗传学分析。经过6 d干燥试验处理,结果显示,35株阪崎克罗诺杆菌中,耐干燥能力较强的IQCC10409(1号)、IQCC10455(6号)和110609-3(31号)菌株失活率分别为63.73 %、56.94 %和44.43 %,其中31号菌株耐干燥能力最强,它们分别属于ST73、ST73和ST23型。MLST分析表明,全部菌株共分成16个不同的序列型(sequence type,ST),其中,属于ST1型(20号、24号、27号、28号、33号)和ST4型(4号、6号、7号、9号、11号)的菌株较多,分别有5株菌。结果表明阪崎克罗诺杆菌基因多样性程度较高,而耐干燥性较强的菌株主要集中于ST73和ST4型,另外还发现,即使相同ST型的菌株,其耐干燥能力也不定相同。     

成人粪便中长双歧杆菌长亚种的分离鉴定及多位点序列分型分析

为了对成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种进行多位点序列分型分析,采用改良MRS培养基从健康成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种,通过生理生化试验结合16S rDNA和热应激蛋白60(heat-shock protein,hsp60)同源性分析鉴定分离株,利用同源性分析及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进一步分析长双歧杆菌长亚种的基因多态性。从12个健康成人体内分离得到24株厌氧的细菌菌株,经形态学观察、生理生化试验、16S rDNA及hsp60同源性分析发现,其中14株分离株为长双歧杆菌长亚种(Bifidobacterium longum subsp. longum)。MLST结果表明:14株长双歧杆菌长亚种可分为10种基因型,且均与Bifidobacterium longum subsp. longum ATCC 15707为不同基因型。健康成人粪便中分离的长双歧杆菌长亚种具有较大的基因多态性。