紫薯腐败菌的分离与鉴定

目的 从自然腐败的紫薯上分离纯化紫薯腐败菌, 通过反接种确定其致腐性, 并将其鉴定到属。方法 通过多次稀释平板涂布培养, 进行单菌落形态学观察, 将菌种反接种到新鲜紫薯上, 筛选出腐败菌, 以真菌ITS序列、细菌16S rDNA序列构建发育树, 鉴定到属, 再将鉴定结果与分离的菌种的形态学鉴定结果对比, 验证菌种鉴定结果。结果 从样品中分离出6种典型腐败菌, 有4种属, 分别为枝孢霉属、青霉属、曲霉属、芽孢杆菌属。结论 确定紫薯的腐败菌为哥氏枝孢霉(Cladosporium gossypiicola)、Penicillium christenseniae、热带青霉(Penicillium tropicum)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)和阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)。     

无花果高活性内生真菌菌株的筛选

从无花果(Ficusc arice)的根、茎、叶中分离出64株内生真菌,以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、白假丝酵母菌(Saccharomyces albicans)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)和青霉菌(Penicillium sp.)为指示菌种,对这些内生真菌进行抗菌活性实验。结果表明,高活性菌株隶属于链格孢属(Alternaria sp.)、瓶梗青霉属(Paecilomyces sp.)、青霉属(Penicillium sp.)和镰孢霉属(Fusrium sp.)等属。综合分析认为,编号为FL28内生真菌的抑菌作用值得进一步研究。     

浓香型大曲中可培养真菌的分离鉴定与系统发育学分析

采用传统微生物分离手段从浓香型大曲中分离纯化得到69株真菌。通过形态学观察、分子生物学鉴定以及系统发育学分析其分类地位。结果表明:采用ITS区序列进行真菌的分子鉴定可将大多数的真菌鉴定到属,部分真菌甚至能够鉴定到种;浓香型大曲内分离获得的真菌类群主要包括曲霉属(Aspergillus)、红曲霉属(Monascus)、根毛霉属(Rhizomucor)、横梗霉属(Lichtheimia)、青霉属(Penicillium)、拟青霉属(Paecilomyces)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomala)、锁掷酵母(Sporidiobolus pararoseus)等目前已报道的大曲真菌类群,同时也发现了Merimbla ingelheimensis、踝节菌属(Talaromyces),尾孢菌属(Cercospora)、枝孢菌属(Cladosporium)、Acremonium impicatum、脉孢菌属(Neurospora)等霉菌类群在大曲中分布。其中曲霉属是优势种群,其菌株数目和种类最多,分别占43.48%和20.69%。本研究极大地丰富了对浓香型大曲中真菌种群的认识。     

阿克苏红富士苹果采后腐烂病原真菌的分离与鉴定

为了明确阿克苏红富士苹果采后腐烂的主要病原菌种类。通过对阿克苏红富士苹果采后常温和低温条件下自然发病的果实进行病原菌的分离筛选,采用经典微生物分离筛选方法,结合形态学观察、基因间隔序列(Internal transcribed spacer,ITS)、28S核糖体大亚基序列(large subunit r DNA,r DNA-LSU)及微管蛋白B(Beta tubulin,β-tubulin)序列的测定方法,并进行系统进化树的构建;同时,进行菌株的回接及病斑形态的验证。最终从腐烂的阿克苏红富士苹果病斑中分离出2类真菌,由形态学观察初步确定为链格孢霉(Alternaria sp.)和青霉(Penicillium sp.),通过进一步的多基因序列分析及菌株的回接及病斑的观察鉴定2种真菌分别为交链格孢霉(Alternaria alternata)和扩展青霉(Penicillium expansum)。本研究结果可为新疆阿克苏红富士采后病原真菌的快速鉴定及病害的防治提供理论依据。     

蓝莓采后病原真菌分离及其生物学鉴定

为了深入研究贵州麻江县蓝莓果实采后贮藏过程中的病原真菌及其生物学鉴定,首先对贮藏库中蓝莓果实的病害真菌进行分离、纯化和观察;然后采用真菌ITS区特异性引物对所分离的蓝莓病原真菌ITS区进行PCR扩增测序,将病原真菌的ITS区序列与NCBI中核酸数据库进行比对分析,确定蓝莓病原真菌的生物学分类。同时对病原真菌在不同贮藏条件下的生长状况进行初步研究。在采后蓝莓果实的贮藏期分离得到12株蓝莓真菌,其中引起采后腐烂的病原真菌主要为1号拟盘多毛孢(Pestalotiopsis)、2号Neofusicoccum、3号青霉(Penicillium)、6号地霉(Geotrichum)和8号枝孢霉(Cladosporium)。对病原真菌进行初步研究后发现青霉是低温贮运过程中的主要病原菌、Neofusicoccum和地霉是高温贮运过程中的主要致腐菌。该试验分析结果可为微生物污染途径分析以及生物防治蓝莓腐烂提供一定的理论依据。     

包包曲及制曲环境中可培养霉菌的分离与鉴定

采用传统微生物培养法从包包曲中分离纯化得到18株真菌。通过形态学观察、分子生物学分析以及系统发育学分析确定其分类地位。结果表明,获得的霉菌类群包括3个纲、5个目、6个科、9个属,主要包括青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、丝衣霉菌属(Byssochlamys)、横梗霉属(Lichtheimia)、毛霉属(Mucor)、根霉属(Rhizopus)、尖镰孢菌属(Fusarium)、刺孢小克银汉霉(Cunninghamella)和Microstroma属等。     

鲜切生菜贮藏期病原真菌的分离及鉴定

以鲜切生菜为试材,采用传统的微生物分离手段分离纯化在4℃贮藏过程中引起腐烂的主要病原真菌,通过回接试验验证其致病性。通过形态学观察、分子生物学鉴定以及系统发育学分析其分类地位。结果表明:从货架期终点的鲜切生菜中共筛选出菌落形态差别比较明显的病原真菌4株,经鉴定其依次为短柄帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)、扩展青霉(Penicillium expansum)、翅孢壳霉(Emericellopsis sp).和暗孢节菱孢(Arthrinium phaeospermum),4种病原真菌中扩展青霉为主要致病菌。     

海鞘中产油脂共附生真菌的筛选及脂肪酸组成成分分析

从20株海鞘共附生真菌中筛选产油脂菌。采用苏丹混合溶液染色法初筛,摇瓶复筛,酸热法提取油脂油脂,气相色谱-质谱联用法(GC-MS)测定其脂肪酸组成,形态学观察结合分子生物学鉴定产油脂真菌。结果表明:经初筛和复筛得到3株油脂含量均达20.00%以上的菌株,分别为菌株P2-18、P1-17和P2-4,脂肪酸组成分析不饱和脂肪酸分别占其脂肪酸组成的93.90%、55.80%和65.00%。其中γ-C18:3(γ)亚麻酸、C16:1棕榈一稀酸和C18:1油酸含量最多。P2-4含23.2%的γ-C18:3(γ)亚麻酸,约占其不饱和脂肪酸的24.50%。3株真菌经形态学鉴定,结合分子生物学ITS区序列鉴定,菌株P2-4为桔青霉(Penicillium citrinum),P1-17为青霉属(Penicillium sp.12 BRO-2013),P2-18为土曲霉(Aspergillus terreus)。因此,该海鞘共附生真菌具备开发微生物功能性油脂的潜力,具有良好的开发应用前景,值得进一步研究。     

浓香型白酒酒醅可培养真菌的分离、鉴定及系统发育分析

对四川浓香型白酒酒醅可培养真菌进行分离、鉴定,并做系统发育分析。运用ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列可将部分菌株鉴定到种的水平,可培养丝状真菌优势菌为曲霉属(Aspergillus sp.)、红曲霉属(Monascus sp.)、根霉(Rhizopus sp.)。26S rRNA D1/D2序列可将所有分离酵母鉴定到种的水平,可培养酵母优势菌为假丝酵母属(Candida sp.)和毕赤酵母属(Pichia sp.)。     

海鞘中产油脂共附生真菌的筛选及脂肪酸组成成分分析

从20株海鞘共附生真菌中筛选产油脂菌。采用苏丹混合溶液染色法初筛,摇瓶复筛,酸热法提取油脂油脂,气相色谱-质谱联用法（GC-MS）测定其脂肪酸组成,形态学观察结合分子生物学鉴定产油脂真菌。结果表明：经初筛和复筛得到3株油脂含量均达20.00%以上的菌株,分别为菌株P2-18、P1-17和P2-4,脂肪酸组成分析不饱和脂肪酸分别占其脂肪酸组成的93.90%、55.80%和65.00%。其中γ-C18:3(γ)亚麻酸、C16:1棕榈一稀酸和C18:1油酸含量最多。P2-4含23.2%的γ-C18:3(γ)亚麻酸,约占其不饱和脂肪酸的24.50%。3株真菌经形态学鉴定,结合分子生物学ITS区序列鉴定,菌株P2-4为桔青霉（Penicillium citrinum）,P1-17为青霉属（Penicillium sp. 12 BRO-2013）,P2-18为土曲霉（Aspergillus terreus）。因此,该海鞘共附生真菌具备开发微生物功能性油脂的潜力,具有良好的开发应用前景,值得进一步研究。     

冬季甜瓜腐烂病原菌的分离与鉴定

从冬季贮存甜瓜的腐烂组织中分离病原菌,并对其类型进行检测分析。利用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基和溶菌肉汤(LB)培养基培养,依据微生物形态特性,真菌的26S rRNA 序列和细菌的16S rRNA 序列比对以及系统发育进化分析等分子生物学方法,共分离到22 株菌种,其中真菌13 株：包括青霉2 株、链格孢4 株、白地霉4 株、酵母3 株(梅奇氏酵母2 株、毕赤酵母1 株);细菌9 株：包括沙雷氏菌5 株,丁香菌1 株,克雷伯菌、肠杆菌和芽孢杆菌各1 株。根据26S rRNA D1/D2 区序列比对和系统进化树结果显示,两株酵母菌121 和122 可能是梅奇氏酵母属潜在的新种。青霉和链铬孢是甜瓜腐烂致病菌,白地霉和沙雷氏菌是人体致病菌,表明目前甜瓜贮存方法需要进一步改进和完善。     

甜樱桃采后腐烂病原菌的分离与鉴定

为了研究山西省甜樱桃果实采后贮藏过程中的病原菌,本文对低温贮藏过程中发生腐烂的甜樱桃果实的病原菌进行分离纯化。在形态学基础上,结合基因序列分析,对分离获得的2株病原真菌YTA、YTB进行鉴定。YTA和YTB利用真菌通用引物ITS序列进行PCR扩增,将测序所得的基因序列与NCBI的GenBank进行同源序列比对,确定甜樱桃病原菌的生物学分类。结果表明:病原菌YTA为草酸青霉(Penicillium oxalicum),YTB为葡萄孢属(Botrytis sp.),将其重新回接到甜樱桃上,均能引起甜樱桃腐烂。草酸青霉(Penicillium oxalicum),葡萄孢属(Botrytis sp.)均是造成山西省甜樱桃采后腐烂的病原菌。     

预冷方式对红玛瑙樱桃果实冷藏期间真菌多样性的影响

不同的采后预冷方式会影响樱桃果实的冷藏腐烂率,这主要源于果实表面真菌组的发展变化。以高通量测序法测定真菌组内转录间隔区序列,分析经不同预冷处理后的红玛瑙樱桃在冷藏0、15、30 d时表面真菌的群落构成和多样性,并重点分析优势菌的变化趋势。结果表明:相对于风冷,冰水预冷和臭氧化冰水预冷降低了红玛瑙樱桃冷藏初始和冷藏期内真菌组的丰富度和Alpha多样性。优势菌群分析表明,各组樱桃初始优势菌均包括出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)、格孢腔菌目(OTU 1)、链格孢属(OTU 4)和Davidiellaceae科(OTU 3),但冰水和臭氧化冰水预冷降低了初始病原菌比例,提高了生防菌(出芽短梗霉菌)的比例;冷藏期间,各组优势菌相发生变化。在贮藏30 d时,风冷样品Davidiellaceae科(OTU 3)是最主要的腐败菌;冰水预冷样品中生防菌出芽短梗霉菌占据绝对优势,格孢腔目(OTU 1)、链格孢属(OTU 4)、Davidiellaceae科(OTU 3)和腊叶芽枝霉比例分别上升到16.28%、8.23%、8.40%和8.96%,它们可能引起樱桃腐败;臭氧化冰水...     

传统发酵豆酱中产脂肪酶菌株的筛选

脂肪酶属于羧基酯水解酶类,能将甘油三酯逐步地水解成甘油和脂肪酸。该研究从东北三省传统的家庭自制豆酱上获得纯培养真菌389株,通过三丁酸甘油酯平板法初筛获得具有脂肪酶活性的菌株41株,其中青霉属的真菌27株、曲霉5株、毛霉3株、犁头霉2株、酵母菌1株、镰孢菌2株、帚霉菌1株。结果表明,青霉属的真菌无论从数量还是酶活都高于其他属的真菌,其中橘灰青霉（Penicillium aurantiogriseum）数量最多。在分离到的菌株中,毛霉属的卷枝毛霉（Mucor circinelloides）酶活最高,是具有生物催化潜力的功能菌株。     

苹果腐败霉菌的拮抗酵母菌筛选鉴定及拮抗机理初探

从苹果果皮中筛选出对引起苹果采后病害的扩展青霉(Penicillium expansum)、互隔交链格孢霉(Alternaria alternata)和黑曲霉(Aspergillus niger)具有拮抗作用的酵母菌,并初步研究其拮抗机理。结果表明:筛选得到两株可以同时拮抗三种腐败霉菌的拮抗酵母菌Y4和Y9,根据酵母菌菌落性状、生理生化特征并结合分子生物学的分析结果,鉴定为Candida railenensis和Aureobasidium pullulans,其中A.pullulans为类酵母真菌。C.railenensis的最佳拮抗浓度为10⁹ CFU/mL,对P.expansum、A.alternata和A.niger的菌丝生长、孢子萌发和芽管生长均有显著(p<0.05)的抑制作用。扫描电镜观察到C.railenensis能够包围和吸附腐败霉菌孢子,与它们竞争营养与空间,此外还能够吸附P.expansum菌丝体与其直接作用。C.railenensis的主要抑病机理是营养与空间竞争,并且其生防效果的发挥是多种方式共同作用的综合结果。     

鱿鱼丝加工中真菌菌相变化规律及优势真菌的分离鉴定

为减少鱿鱼丝加工过程中真菌污染,提高鱿鱼丝产品的质量,将传统的微生物鉴定技术与5.8S r DNA-ITS序列分析法相结合,并通过系统发育树分析,探索鱿鱼丝加工过程中真菌菌相变化规律及优势菌株。结果表明,在鱿鱼丝加工过程中,不同阶段样品中真菌数量差异显著(p0.05),在加工终点(即烘干包装后)时真菌数量高达2.61 log cfu/g,其中调味和烘干包装阶段是真菌污染的主要环节。加工终点的鱿鱼丝中分离出6种酵母菌和4种霉菌,经测序并通过National Center for Biotechnology Information(NCBI)数据库比对,确定它们分别属于假丝酵母属(Candida sp.)、隐球酵母属(Cryptococcus sp.)、座囊菌属(Dothideomycetes sp.)、胶红酵母属(Rhodotorula sp.)、丝孢酵母属(Trichosporon sp.)、茎点霉属(Phoma sp.)、青霉属(Penicillium sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、枝孢霉属(Cladosporium sp.)。其中,青霉菌(M-03)和假丝酵母菌(Y-04)为鱿鱼丝加工过程中的优势菌,在加工终点时的数量分别为1.85 log cfu/g和2.15 log cfu/g。     

啤酒糟中细菌的分离鉴定及其在啤酒糟发酵中的应用

该研究采用传统培养分离法从啤酒糟中分离细菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,选择其中3株细菌发酵啤酒糟,并与常规发酵真菌黑曲霉（Aspergillus niger）和出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）对比,以期获得对啤酒糟降解效果较好的细菌。结果表明,从啤酒糟中共分离得到6株细菌（编号为B1～B6）,经鉴定,分别为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）、梭状菌属（Clostridium sp.）、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、暹罗芽孢杆菌（Bacillus siamensis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。其中解淀粉芽孢杆菌B3对啤酒糟的降解效果最好,且优于常规真菌,其发酵啤酒糟的蛋白质、总还原糖、阿魏酰低聚糖含量、木聚糖酶酶活、羧甲基纤维素酶酶活均最高,分别为25.26%、3.92%、10.01μmol/L、803.59 U及38.16 U。     

我国食用天然蓝色素研究进展

天然色素具有安全、营养、多功能性的特点.天然蓝色素是天然色素中的稀缺色素.植物和微生物是生产天然蓝色素的主要原料来源.植物天然蓝色素主要有靛蓝、栀子蓝、藻蓝蛋白色素等.链霉菌、假单胞菌、假交替单胞菌、杜檊氏菌、黄杆菌、出芽短梗霉、光合细菌、基因工程菌株等微生物中的某些种类能够产生天然蓝色素,其中放线菌紫(红)素、绿脓菌素、紫色杆菌素为兼具抗生素作用的蓝色素.超声波破碎、柱层析和高速逆流色谱、超临界流体法、微滤和超滤等先进技术应用于天然蓝色素的提取分离及精制纯化,微胶囊化、酯化、醚化、酰化等促进色素稳定的反应技术也被应用于改善天然蓝色素的稳定性及色素的其它性能.     

华莱士瓜采后丝状真菌的分离及rDNA ITS区序列分析

从采后贮藏期间自然发病的华莱士瓜上分离到12 株丝状真菌,将分离菌经纯化后回接到健康无损的华莱士瓜上,发病特征与分离发病果实一致,确定其为华莱士瓜的病原菌。结合形态学观察和rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析,结果表明：分离到1 株黑附球菌（Epicoccum nigrum）、1?株草酸青霉菌（Penicillium oxalicum）、2 株链格孢属（Alternaria Nees ex Wallr.）真菌、3 株曲霉属（Aspergillus Micheli ex Fr.）真菌和5 株镰刀属（Fusarium LK. ex Fr.）真菌。其中,黑附球菌（E. nigrum）为甜瓜中首次发现的病原菌,而草酸青霉菌（P. oxalicum）、细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）、泡盛曲霉菌（Aspergillus awamori）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）、轮状镰刀菌（F. verticillioides）和燕麦镰刀菌（F. avenaceum）分别为甜瓜上分离到的青霉属、链格孢属、曲霉属和镰刀属的新菌株。     

蓝莓果实常温贮藏过程中表面病原真菌的分离与鉴定

蓝莓果实采后常温贮藏过程中极易腐烂变质,严重影响了蓝莓果实的贮藏品质。以"蓝丰"蓝莓果实为试材,通过对采后常温贮藏过程中自然发病果实表面病原菌的分离与筛选,明确蓝莓腐烂的主要病原菌的种类。采用传统混菌法对表面病原真菌进行培养和纯化,经形态学观察分析,初步确定蓝莓表面病原真菌种类,并进行返接试验再确定。最终采用真菌ITS区特异性引物对所分离的蓝莓病原真菌ITS区进行PCR扩增,测序后比对分析确定蓝莓果实常温贮藏过程中的表面病原真菌为青霉、产黄青霉和链格孢霉。分别确定各菌种的最适生长温度,其中青霉、产黄青霉和链格孢霉的最适生长温度分别为28,26~28℃和26℃。本研究结果为蓝莓果实贮藏保鲜过程中病害的预防和控制提供了理论依据。