蓝莓花青素氯化锦葵色素在人脐静脉内皮细胞中的抗氧化作用

目的：研究氯化锦葵色素对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）中活性氧（reactive oxygen species,ROS）和黄嘌呤氧化酶-1（xanthine oxidase-1,XO-1）含量的影响,探讨氯化锦葵色素在血管内皮细胞中的抗氧化作用。方法：体外培养HUVEC,分别设定空白组（仅加入二甲基亚砜）,血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）刺激组（10－2 μmol/L）,终浓度为1、5、10 μmol/L氯化锦葵色素组,以及终浓度为1、5、10 μmol/L氯化锦葵色素联合AngⅡ刺激（10－2 μmol/L）组。采用荧光免疫法测定HUVEC内ROS含量的变化,酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定细胞上清液中可溶性XO-1含量的变化,Western blotting法检测细胞中XO-1含量的变化。结果：氯化锦葵色素处理HUVEC时,细胞ROS和XO-1含量降低;AngⅡ引起HUVEC内ROS和上清液中XO-1含量显著增加,各浓度氯化锦葵色素预处理能有效抑制ROS和XO-1含量的增加。结论：氯化锦葵色素在HUVEC中具有抑制ROS和XO-1的作用,从而达到抗氧化、保护内皮细胞的功效。蓝莓花青素氯化锦葵色素具有抑制ROS和XO-1的作用,为蓝莓的开发利用提供了理论依据。     

榛仁五肽对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用

本文以长白山榛仁五肽Ala-Trp-Asp-Pro-Glu(AWDPE)为研究对象,利用体外化学和细胞实验,研究AWDPE抗氧化活性及对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用。结果显示:AWDPE浓度为1 mg/mL时对DPPH和ABTS自由基清除率分别达到63.38±2.44%和69.38±1.96%;实验范围内,不同浓度AWDPE对HUVEC细胞无生长抑制作用,亦无生长促进作用;与血管紧张素Ⅱ氧化损伤组相比,AWDPE保护组细胞活力高于AngⅡ损伤组1.51倍(p0.01);100μg/mL AWDPE保护组细胞内,LDH释放率为27.14±1.16%,为AngⅡ损伤组0.62倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,MDA含量为3.47±0.28 nmol/mg,为AngⅡ损伤组0.73倍;100μg/mL AWDPE保护组细胞内,CAT含量为2.34±0.11 U/mg,为AngⅡ损伤组1.39倍(p0.05);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,T-SOD含量为23.55±1.26 U/mg,为AngⅡ损伤组2.48倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,GSH-PX含量为33.9±2.75 nmol/L,为AngⅡ损伤组1.91倍(p0.01)。上述实验证明AWDPE五肽对HUVECs细胞氧化应激损伤具有显著的保护作用。     

红枣色素对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

探讨红枣色素对H_2O_2诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。体外培养HUVECs,随机分为6组:空白对照组、H_2O_2损伤组、红枣色素低、中、高剂量组(50、150、250 mg/L红枣色素)和阳性对照组(50μmol/L VE),采用显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮盐法检测细胞增殖活力,试剂盒法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,透射电子显微镜观察细胞超微结构。结果表明,红枣色素可保护H_2O_2对HUVECs的损伤作用,能明显改善受损细胞形态、超微结构,显著降低细胞增殖抑制率、LDH活性、细胞凋亡率,明显提高线粒体膜电位水平(P0.05),且存在明显的剂量依赖关系。由此推断,红枣色素对氧化应激诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制细胞凋亡和维持线粒体膜电位有关。     

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。     

蓝莓叶槲皮素和金丝桃苷的HPLC-MS鉴定及在内皮细胞中的舒血管和抗炎作用研究

通过建立体外肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)炎症损伤反应模型,研究蓝莓叶中槲皮素及其衍生物金丝桃苷对人脐静脉内皮细胞中血管紧张素Ⅰ转化酶(ACE)以及炎症因子(单核细胞趋化蛋白-1、细胞间粘附分子-1和血管细胞间粘附分子-1)含量的影响,采用酶联免疫吸附剂测定方法(ELISA)检测细胞上清液中可溶性ACE和炎症因子蛋白含量的变化,探讨二者在血管内皮细胞中的舒血管和抗炎作用。研究结果表明,肿瘤坏死因子TNF-α可引起HUVEC内ACE和炎症因子含量显著增加,槲皮素和金丝桃苷预处理内皮细胞能显著抑制ACE酶活性和炎症因子含量的增加(p0.05),具有一定的抗炎和舒血管作用。     

蛋清中ACE抑制肽的筛选及其作用机制

表征来自卵清蛋白中的血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制肽。基于在线程序,采用胃肠道蛋白酶对卵清蛋白进行模拟酶切。对获得的三肽毒性、溶解性和ADME性质进行预测,以ACE为蛋白靶标,筛选出能够与ACE紧密结合的三肽,对这些三肽的活性进行验证。结果表明：获得了一种新的ACE抑制三肽CIK,其IC50值为（161±0.06）μmol/L。CIK-ACE复合物通过5 个常规氢键,2 个碳氢键和4 个盐桥达到稳定状态。CIK最佳的对接构型可以与ACE的氨基酸残基Gln281、His353、Ala354、Glu376、Val380、His383、Glu384、Lys511、His513、Tyr523和Phe527形成相互作用。最佳的药效团模型由3 个氢键受体,一个疏水中心和一个正电荷中心组成,三肽CIK可与其中4 个特征相匹配。     

不同诱导物对内皮细胞氧化损伤作用的研究进展

高血压、动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发病率逐年增加,这是严重危害人类健康生活的一类疾病,而内皮细胞氧化损伤往往是这些疾病早期的共同反应。不仅如此,一些治疗如物理治疗、心脏手术等会遗留一些影响内皮细胞功能的问题。因此,该领域研究者们对内皮细胞氧化损伤的机制研究越来越重视,并以此寻找合适的效应物如食品中的活性成分来抑制内皮细胞的氧化,减少和防治相关疾病的发生。本文综述了内皮细胞氧化损伤研究中几种常用诱导物如过氧化氢、氧化低密度脂蛋白、高糖、辐射等对内皮细胞氧化损伤的作用和特点,供研究人员根据研究方向选择合适的诱导物来建立内皮细胞氧化损伤模型,以此更有针对性地进行效应物的筛选及作用机制的研究。     

正膏坊龟苓膏对氧化应激状态的改善作用

目的：研究正膏坊龟苓膏对拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤的保护作用。方法：对于18h 拘束负荷诱发应激性肝损伤的小鼠,分别用赖氏法测定其血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、硫代巴比妥酸法测定肝组织丙二醛(MDA)含量、Griess 化学法测定一氧化氮(NO)含量、荧光酶标仪测定肝组织抗氧化能力指数(ORAC)、HPLC 法测定谷胱甘肽(GSH)含量、比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性。结果：与拘束应激模型组相比,正膏坊龟苓膏可以明显降低拘束负荷小鼠血浆ALT 活性、肝组织MDA 和NO 含量,有效提高肝组织的ORAC 指数、GSH 含量及GPX 和GST 活性。结论：正膏坊龟苓膏对拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤有一定的保护作用,其作用可能与缓解拘束负荷小鼠的氧化应激水平相关。     

SIRT3多酚激活剂的抗细胞氧化应激作用及机制

建立Caco-2单层细胞与HaCaT细胞形成的迁移小室(trans-well)共培养体系,采用HaCaT细胞SIRT3-EGFP报告基因系统评价5种膳食多酚(白藜芦醇、山奈酚、安石榴苷、漆树黄酮、月见草素B)对SIRT3基因表达的影响,并进一步评价筛选的SIRT3多酚激活剂对UVB诱导的HaCaT细胞氧化应激的抑制作用...     

大黄酸对正常和氧化损伤内皮细胞的增殖和氧化保护作用

目的：观察大黄酸对正常和氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的影响。方法：建立H2O2氧化损伤模型,采用不同浓度的大黄酸对内皮细胞进行处理,检测内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活力和超氧化物歧化酶(SOD) 活力及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 活力的变化;采用流式细胞术研究内皮细胞的凋亡情况,探讨大黄酸对内皮细胞的保护作用。结果：大黄酸浓度在16μmol/L以下时,对HUVEC的增殖无显著性影响;浓度在2μmol/L以上时,减轻HUVEC受到氧化损伤的程度,对氧化性损伤具有保护作用;同时降低了LDH释放率,下调了MDA含量,提高了NO含量和NOS、SOD、GSH-Px的酶活力,显著减少了细胞凋亡率。结论：HUVEC经2～16μmol/L大黄酸处理,可以有效减轻H2O2对其造成的氧化损伤,维持正常的生理形态。     

基于PC12细胞模型分析大豆蛋白水解物对神经元氧化损伤的保护作用

本文基于PC12细胞模型研究大豆蛋白水解物(Soybean protein isolate hydrolysates,SPIHs)对神经元氧化损伤的保护作用。以大豆蛋白为原料,经过酶解和膜分离得到四种分子量不同的水解物,我们首先检测了SPIHs的抗氧化能力;然后用H2O2刺激P12细胞,建立神经元氧化损伤模型,并以适当浓度的SPIHs处理细胞,通过检测各种生物学指标评价对细胞氧化损伤的保护作用。结果显示,低分子量的SPIHs表现出最强的抗氧化活性;能够提高损伤细胞的存活率和抗氧化酶活力,减少乳酸脱氢酶(LDH)的释放量和丙二醛(MDA)的生成,抑制细胞活性氧(ROS)的累积(p0.05或p0.01),且变化呈现一定的剂量依赖关系。研究认为,低分子量的SPIHs对神经元氧化损伤具有保护作用,可以作为功能性成分用于保护神经元氧化损伤相关的功能食品和保健品的开发。     

圣草次苷的合成及其对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

以橙皮苷为原料,经三氯化铝-吡啶去甲基反应合成药用天然产物圣草次苷,产物通过1H核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）和13C NMR进行结构确证,并探究其对过氧化氢（H2O2）诱导氧化应激损伤的人脐静脉内皮细胞系（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞的保护作用机制。结果表明：圣草次苷对HUVEC细胞无毒性作用,能显著提高氧化损伤HUVEC细胞的存活率（P＜0.05）,但无显著剂量效应;显著降低细胞中活性氧水平和丙二醛含量（P＜0.05）,显著提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等抗氧化酶的活力（P＜0.05）;显著上调Bcl-2/Bax蛋白比值和下调p53蛋白表达（P＜0.05）。结论：圣草次苷能有效阻止H2O2所致HUVEC细胞损伤,该作用与圣草次苷的抗氧化活性和抑制细胞死亡有关。     

Protective Effects of Merlot Red Wine Extract and its Major Polyphenols in Pc12 Cells under Oxidative Stress Conditions

Abstract: The potential effect of the extracts from free‐run and pressed Merlot red wine has been evaluated in PC12 cells under oxidative stress situation. Comparing both vinification process, pressed Merlot red wine extract possessed higher neuroprotective activity than the free run wine, possibly attributed to the major content in all global polyphenolic families. High performance liquid chromatography determination of individual polyphenols showed that the major compounds found in Merlot red wine extract were quercetin, catechin, epicatechin, tyrosol, gallic acid, and procyanidins. Pretreatments with these polyphenolic compounds (0.25 mM and 0.1 mM, 24 h) significantly increased cell viability of H₂O₂ and Fenton reaction treated cells. Moreover, these polyphenols attenuated ROS production and decreased the Redox Index of glutathione (RI = GSSG/GSH + GSSG) in cells treated only with Fenton reaction. Furthermore, some polyphenols induced antioxidant enzymes activity and protein expression. Quercetin was the most active. These results support the beneficial effects of red wine extracts and some of its polyphenols under oxidative stress conditions. Practical Application: This research provides evidences of the preventive properties of wine extracts and its major polyphenols under oxidative stress conditions.