超声波预处理对大米蛋白酶解产物ACE抑制率的影响

研究了大米蛋白经三频平板式超声波设备预处理对碱性蛋白酶酶解后的大米多肽血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的影响。分别采用紫外可见分光光谱仪、傅里叶变换红外光谱仪、荧光分光光度计对超声的大米蛋白进行了测定,探讨超声影响酶解产物活性的机制。结果表明,所有的频率组合均可显著提高大米蛋白酶解产物的ACE抑制活性,尤其是20,35,50 kHz顺序超声。通过超声后大米蛋白的紫外光谱,红外光谱,表面疏水性的变化表明:超声能改变蛋白的紫外吸收峰,降低蛋白二级结构中α-螺旋和β-转角的含量,同时提高β-折叠的含量。通过蛋白表面疏水性可知,超声能显著提高大米蛋白的表面疏水性,影响蛋白的结构,使碱性蛋白酶容易与酶切位点结合,从而影响蛋白酶解产物的ACE抑制活性。     

海地瓜多肽体外模拟胃肠消化稳定性

为评价海地瓜多肽的胃肠消化耐受性,建立了体外模拟胃肠消化模型,该模型主要包括模拟人体中胃消化环境和肠消化环境两个阶段。运用α-淀粉酶抑制活性测定方法和ACE抑制活性测定方法测定了海地瓜多肽的胃消化产物和肠消化产物的α-淀粉酶抑制活性及ACE抑制活性。体外海地瓜多肽具有较强的ACE抑制活性及α-淀粉酶抑制活性,胃消化产物与肠消化产物的ACE抑制活性均增强,经胃消化阶段的海地瓜多肽α-淀粉酶抑制活性先下降,待其进入肠消化阶段后,海地瓜多肽的α-淀粉酶抑制活性再次回升,最终被人体吸收的海地瓜多肽发挥了较强的ACE抑制活性和α-淀粉酶抑制活性。海地瓜多肽在体外模拟胃肠消化过程中,其ACE抑制活性及α-淀粉酶抑制活性不会发生剧烈变化,其体外模拟胃肠消化耐受性高,即海地瓜多肽具有较强的ACE抑制活性和α-淀粉酶抑制活性,可开发为功能性食品。     

可溶化结合超声预处理对酪蛋白酶解产物ACE抑制活性的影响

本文研究了可溶化、超声及可溶化结合超声预处理对酪蛋白碱性蛋白酶及产物ACE抑制活性的影响,并测定不同预处理方式下的酪蛋白酶解终点的多肽含量及氨基酸组成。试验结果表明,与对照组相比,3种预处理方式均能显著提高(P0.05)相同水解度条件下酶解产物的ACE抑制活性,缩短酶解时间,改变酶解终点,其中可溶化结合超声预处理方式效果最显著。通过酶解终点多肽含量及氨基酸组成结果的分析可知,3种预处理均可以提高酶解终点酶解液中的多肽含量,相比于对照组,其分别提高了17.54%,20.89%和32.09%。3种预处理方式均提高了酶解液中疏水性氨基酸的含量。结论:可溶化、超声及可溶化结合超声预处理均可通过提高酶解液的多肽含量及疏水性氨基酸含量来提高酶解产物的ACE抑制活性,同时可缩短酶解时间,改变酶解终点。其中,可溶化结合超声是最有效的预处理方式。     

不同模式超声预处理对莲子蛋白酶解物及其结构的影响

超声波参数中,超声频率是影响蛋白酶解的主要因素。因此,本实验以不同模式超声频率下得到的莲子蛋白酶解物为研究对象,首先对不同模式超声进行优化,以血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率和水解度为指标,得出了不同模式下的最优频率参数：单频率超声20 kHz、双频率组合20/35 kHz、三频率超声组合20/35/50 kHz。然后采用表面疏水性、氨基酸分析及内源性荧光光谱等表征不同模式的超声预处理对莲子蛋白酶解物及结构特征影响。结果显示：随着超声频率组合增多,表面疏水性越来越大,疏水性氨基酸含量增多,主要是由于超声预处理使蛋白结构展开,使最初被掩埋在蛋白分子内部的疏水基团暴露。通过荧光光谱发现,超声预处理提高了莲子蛋白的荧光强度,且荧光强度顺序为三频＞双频＞单频;同时,莲子蛋白酶解物λmax发生轻微的红移现象。上述结果对于莲子蛋白酶解及ACE抑制肽的制备至关重要。     

超声预处理辅助酶解玉米胚芽ACE抑制肽的研究

旨在研究不同工作模式的超声预处理对玉米胚芽蛋白酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。以蛋白转化率和高活性肽占比为指标,利用聚能逆流双频、发散三频和对振双频的超声设备,对玉米胚芽粕进行预处理,得到最优的超声预处理模式;采用单因素逐级优化法来确定最佳超声预处理参数;在最优超声处理条件下,优化酶解反应条件。结果表明分子量在300~1000 Da的多肽ACE抑制活性最高,IC₅₀值为0.78 mg/mL;最优的超声模式为20/40 kHz交替双频,最佳超声预处理参数为功率密度100 W/L、底物浓度为8%、超声时间20 min、超声温度30 ℃,酶解条件为加酶量2000 U/g蛋白、酶解时间2.5 h。在最优条件下,蛋白转化率为85.00%,相比于未超声组的73.01%提高了16.42%;高活性肽占比为29.63%,相比于未超声组的26.00%提高了13.96%。因此,逆流双频超声波辅助酶解法能有效提高蛋白转化率和产物ACE抑制活性,有利于ACE抑制肽的制备。     

扫频超声波预处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响

目的:研究扫频式超声波预处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响。方法:以ACE抑制活性和水解度为指标,考察扫频超声波对玉米醇溶蛋白制备ACE抑制肽酶解特性的影响;研究经扫频超声处理后,玉米醇溶蛋白二级结构、表面形貌、酶解产物氨基酸组成等特性的变化。结论:扫频超声波预处理玉米醇溶蛋白后,其水解度和酶解液的ACE抑制率显著提高;酶解产物的疏水性氨基酸和支链氨基酸含量大幅度提高。(40±2)k Hz/(68±2)k Hz组合双频扫频超声波预处理后,玉米醇溶蛋白酶解液的ACE抑制率为43.7%,与未超声对照组相比提高了1.21倍。玉米醇溶蛋白经超声处理后其二级结构发生变化;原子力显微镜对其表面形貌分析表明,双频扫频超声处理使玉米醇溶蛋白颗粒迅速疏松、细化,出现分子自组装聚集现象。     

酪蛋白酶解反应过程的近红外光谱在线监测技术研究

本文研究了酪蛋白酶解过程中水解度、酶解液及其胃、肠模拟消化产物的ACE抑制率的变化。采用近红外光谱在线监测技术采集酶解过程的光谱信息,通过光谱信息与化学值之间的关系建立数学模型。结果表明,酪蛋白的水解度和酶解液的ACE抑制率均随着酶解时间的延长逐渐增加,酶解液经胃、肠模拟消化后的ACE抑制率显著升高。采用偏最小二乘算法、区间偏最小二乘法和联合区间偏最小二乘法建立光谱信息与酶解过程中的化学值建立定量模型。结果表明,联合区间偏最小二乘法可良好预测酪蛋白酶解过程的关键参数,且模型稳定性良好。结论：采用近红外光谱技术可实现酪蛋白酶解反应过程的在线监测,预测酪蛋白的水解度、酪蛋白酶解液及其胃肠模拟消化产物的ACE抑制活性。     

超声预处理大米蛋白对其酶解产物ACEI活性的影响

以酶解产物ACEI活性为指标筛选最佳超声预处理模式,在最佳的超声波模式条件下采取单因素逐级优化方法优化超声预处理工艺参数。结果表明:采取20/28/40 kHz同步模式,在超声时间7.5 min、温度40℃、工作间歇比6∶3 (s/s)和功率密度66.7 W/L条件下,大米蛋白酶解所得产物ACEI活性最高,为48.39%,与对照组相比提高了35.20%。说明发散型三频超声对大米蛋白进行预处理能有效的提高酶解产物的ACEI活性。     

大米蛋白酶解物的ACE抑制活性研究

为了考察大米四种蛋白经模拟体外消化后能否产生ACE抑制活性肽及其活性状况,本研究以大米为原料,Osborne法提取大米四种蛋白。体外模拟胃肠道消化过程,研究消化酶解ACE抑制活性肽产生情况及其活性大小,同时检测酶解产物的水解度和分子量分布。实验结果表明,大米四种蛋白经胃蛋白酶消化30min,酶解产物的ACE抑制活性均达到较高水平,随后经过胰蛋白酶作用,酶解产物的ACE抑制活性下降。大米清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白的4h消化产物半抑制浓度IC50值分别为1.45mg/mL、0.91mg/mL、1.19mg/mL和0.75mg/mL,分子量集中在1000u以下,是易于被人体吸收的ACE抑制活性肽。同时,未经酶解的蛋白几乎没有ACE抑制活性。结果说明大米四种蛋白的体外消化酶解物具有不同大小的ACE抑制活性,其中大米谷蛋白消化产物的ACE抑制活性最高,人体正常食用大米蛋白,经胃肠消化可以产生被人体吸收的ACE抑制活性肽。     

基于超声预处理的脱脂玉米胚芽ACE抑制肽的制备

为了研究超声辅助酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的较优工艺,通过三种超声设备对脱脂玉米胚芽预处理,碱性蛋白酶酶解,酶解液体外模拟胃肠消化,以消化液ACE抑制率和酶解过程中玉米胚芽水解度(DH)为指标对超声预处理和酶解的参数进行单因素逐级优化。实验结果表明,最佳超声工作模式为20~40 kHz聚能式逆流双频交替超声模式;超声工作参数为功率密度120 W/L,超声预处理时间15 min,初始温度30℃,物料浓度5%;酶解条件为加酶量3000 U/g,酶解时间30 min,pH9.0,酶解温度50℃。在此条件下,酶解液的IC₅₀为4.166 mg/mL,比对照组降低了5.08%;胃肠消化液的IC₅₀为3.986 mg/mL,比对照降低了4.44%。制备的酶解产物,经模拟胃肠消化后具有较强的ACE抑制活性。优化获得的制备脱脂玉米胚芽ACE抑制肽的工艺是可行的。     

超声预处理对金枪鱼皮胶原ACE抑制肽消化稳定性的影响及消化产物的分离纯化、鉴定

以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC₅₀值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC₅₀值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。     

超声预处理对玉米蛋白可酶解性的影响

旨在采用超声预处理改善玉米蛋白的酶解性,研究了超声频率模式(单频、双频、定频和扫频)及频率参数对玉米蛋白酶解水解度及溶解率的影响,采用高效尺寸排阻色谱法对酶解液的分子质量分布进行了表征。研究发现,(68±2)kHz/(28±2)kHz双频扫频为最佳超声频率模式,优化试验获得超声预处理的最佳工作参数为:超声温度30℃、料液比1:20(g/mL)、超声处理时间40 min、扫频周期500 ms、超声功率密度80 W/L、脉冲超声的工作时间10 s和间歇时间3 s。在最佳超声频率模式及工作参数预处理的条件下,水解度和蛋白溶解率分别为23.6%和75.2%,较对照组(未经超声处理)分别提高了39.4%和54.7%,且酶解液具有更窄的分子质量分布范围。这表明超声预处理能促进玉米蛋白向多肽转化,尤其有利于分子质量为200~1 000 u的玉米蛋白肽的形成。     

5种蔬菜和水果抑制血管紧张素转化酶的研究

目的：了解食用蔬菜水果对高血压的影响。方法：在前期研究果蔬抑制血管紧张素转化酶（ACE）活性的基础上,选择5种蔬菜、水果（西兰花、大蒜、菠菜、平菇、猕猴桃）进行水提取、酶解、乙醇提取,分别抑制ACE的活性,并做复配试验以及模拟体内消化实验。采用高效液相检测马尿酸含量的变化,了解提取物对ACE活性的影响。结果：果蔬的水溶物质和胃蛋白酶水解物抑制ACE活性,而一些乙醇提取物促进ACE活性。猕猴桃和平菇的水提物,大蒜和菠菜的酶解产物都显著抑制ACE的活性。西兰花水提物和酶解产物都强烈抑制ACE活性,而其水提物稀释后抑制ACE效果下降较大,西兰花多肽抑制ACE能力最强。西兰花、大蒜和菠菜3种多肽复配具有增效作用。猕猴桃和平菇的水提物与菠菜多肽复配,也有增效作用。然而,猕猴桃和平菇的水提物与大蒜、西兰花的多肽存在拮抗现象。西兰花、大蒜和菠菜的多肽经模拟消化后,仍保留较高的ACE抑制活性,其中西兰花多肽抗消化能力最好。结论：多数蔬菜、水果同时存在降血压和升血压物质,降血压作用更强。多肽是蔬菜、水果降血压的主要原因,其中存在其它水溶性降血压物质,而升高血压的物质可能是极性较弱的物质。果蔬多肽复配有增效作用。食用降压作用较好的果蔬可能有利于减缓高血压。     

模拟胃肠道消化过程中迷迭香提取物总酚及抗氧化活性变化

本文研究了迷迭香提取物在模拟胃肠道消化过程中总酚含量及抗氧化活性的变化规律,并对其总酚含量变化与抗氧化活性进行相关性分析。结果表明,迷迭香提取物消化产物中总酚含量随模拟胃消化时间的延长而升高,而在模拟肠消化过程中显著降低(P<0.05)。经模拟胃消化180 min后,总酚含量显著升高了17.88%(P<0.05),而经模拟肠消化120 min后,总酚含量显著降低了19.64%(P<0.05)。经模拟胃消化180 min,消化产物对DPPH·和超氧阴离子自由基的清除能力分别显著提高了20.36%和22.07%(P<0.05),铁还原能力(Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)显著提高了11.76%(P<0.05)。而经模拟肠消化120 min后,消化产物对DPPH·和超氧阴离子自由基的清除能力分别显著降低了74.08%和50.00%(P<0.05),FRAP显著降低了52.13%(P<0.05)。此外,迷迭香提取物消化产物的抗氧化活性与其总酚含量之间存在良好的正相关性。以上结果表明,模拟胃肠道消化过程显著影响迷迭香多酚的含量和抗氧化活性。     

超声预处理对脱脂小麦胚芽酶解制备ACE抑制肽的影响

为了研究不同工作模式超声预处理对脱脂小麦胚芽水解度和ACE抑制率的影响,在相同能耗条件,利用聚能逆流单频、聚能逆流双频、脉冲扫频多频、发散三频、对振双频五种工作模式超声,对脱脂小麦胚芽进行预处理。同时进行单因素实验来寻找最佳超声预处理参数。结果表明,超声波预处理对水解度没有显著的影响,但可以显著提高酶解产物的ACE抑制活性,最佳的超声波工作模式为脉冲平板式40 k Hz/28 k Hz双频超声;在此模式下超声预处理单位体积超声功率60 W/L、超声时间70 min、超声初始温度60℃、底物浓度7%时得到的酶解产物IC₅₀值低至2.483 mg/m L,为较优结果,和未超声相比,其产物IC₅₀值降低了5.8%。      

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

瑞士乳杆菌对契达干酪成熟期间所产ACE抑制肽的影响及其消化稳定性

为明确瑞士乳杆菌对契达干酪中血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽活性的影响,以蛋白质水解度和ACE抑制率为指标,与干酪乳杆菌组、鼠李糖乳杆菌组和空白组干酪进行对照,研究瑞士乳杆菌对干酪成熟期间蛋白质水解及ACE抑制活性的影响,并对ACE抑制活性最高时期的干酪进行消化稳定性研究。结果表明：成熟期间,3 组益生菌干酪的活菌数无明显差异（P＞0.05）,但均高于空白组;益生菌干酪的蛋白质水解程度和ACE抑制活性显著高于空白组（P＜0.05）,其中瑞士乳杆菌干酪的蛋白质水解程度最强,活性最高（79.71%）。模拟消化后,瑞士乳杆菌干酪活菌数降低14.30%,ACE抑制活性显著增加（P＜0.05）,达到86.06%,多肽质量浓度增加至2.81 mg/mL;研究不同分子质量超滤组分消化后的ACE抑制活性发现,其中大于10 kDa的多肽活性升高,小于10 kDa的活性下降。此外,添加瑞士乳杆菌不影响干酪的整体可接受性。因此,瑞士乳杆菌能促进干酪ACE抑制肽的产生并提高其活性,消化后活性的升高主要与大分子肽的降解有关。     

酪蛋白酶解产物·OH清除和ACE抑制活性的稳定性

研究温度、pH值、金属离子和不同浓度的糖、盐对酪蛋白酶解产物羟自由基清除活性和ACE抑制活性的影响。结果表明:酪蛋白酶解产物的羟自由基清除活性对热不稳定,而ACE抑制活性对热稳定;在酸性条件下羟自由基清除活性和ACE抑制活性略有下降,在碱性条件下,活性丧失较多;金属离子能降低羟自由基清除活性,其影响大小顺序为Mg2+>Cu2+>Zn2+>K+>Ca2+,而对ACE抑制活性影响不大;在加热条件下,葡萄糖能增强羟自由基清除活性,而蔗糖和NaCl对其影响不大,葡萄糖和蔗糖对ACE抑制活性的影响均不显著,而质量分数为2%以上的NaCl可使ACE抑制活性明显降低。     

动植物源蛋白体外消化产物结构性质及ACE抑制活性

为揭示动植物源蛋白对于血压调节功能上的差异是否由蛋白肽的血管紧张素转化酶（angiotensin conversion enzyme,ACE）抑制活性所引起,动植物蛋白经体外消化后,对蛋白肽的ACE活性抑制进行研究。采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步消化法,水解植物蛋白（大米、燕麦、大豆、豌豆）、红肉蛋白（猪肉、牛肉）和白肉蛋白（鸡肉）。测定所获蛋白肽的水解度、分子质量分布、氨基酸组成及其ACE抑制率。结果表明,随着蛋白质水解度的增加和分子质量的减小,3类蛋白消化产物的ACE活性抑制率均相应增大。其中,植物蛋白消化产物ACE抑制率最高（60.41%）,红肉蛋白最低（40.13%）。对蛋白质消化产物的氨基酸组成进行分析,结果表明,植物蛋白和白肉蛋白消化产物的疏水性氨基酸含量均显著高于红肉蛋白。3类蛋白中消化产物的疏水性氨基酸含量越高,则ACE抑制活性越高,说明疏水性氨基酸含量高可能是植物蛋白肽具有高的ACE抑制活性的主要原因之一。     

超声波对麦胚蛋白性质及其酶解物ACE抑制活性的影响

为了提高麦胚分离蛋白酶解产物的降血压活性,采用超声波处理麦胚分离蛋白。研究了超声波功率对麦胚分离蛋白的溶解度、表面疏水性、荧光光谱、巯基含量变化、水解度和酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)相对抑制活性的影响。结果表明:经超声波处理后,小麦胚芽球蛋白的荧光光谱和巯基含量均发生了显著的变化。麦胚分离蛋白的溶解度和表面疏水残基含量随着超声波功率的增加而提高,但当超声功率达到800 W后,增幅趋于平缓。经超声波前处理后,ACE抑制活性明显提高,而麦胚分离蛋白的酶解产物水解度没有明显变化,因此ACE抑制活性的提高是由于蛋白结构的变化造成的。在超声功率800 W时,酶解产物的ACE相对抑制活性提高了41.09%。