小分子免疫分析技术及其研究进展

小分子物质抗原表位单一,不能同时结合两个抗体,限制了夹心法在小分子残留检测中的应用,因此小分子免疫学分析方法主要采用竞争模式。近年来,随着生物合成全抗原、纳米抗体、抗独特型抗体等生物识别元件的成功应用,开拓了小分子免疫分析技术的新领域。本文从生物识别元件的角度综述了近几年小分子免疫学检测方法的研究进展,并对小分子免疫分析的发展趋势进行展望。     

噬菌体展示肽库技术及其在农药残留免疫 分析中的研究进展

噬菌体展示技术是一种特殊的基因工程重组表达技术, 已经作为一种强大的工具运用在不同的研究中, 包括筛选抗体和酶的配体、筛选小分子的受体、基因工程抗体等。免疫分析作为农药残留快速筛查技术被广泛研究, 利用抗体从噬菌体展示肽库中淘选竞争物, 可以加快异源免疫分析方法的建立; 利用抗原抗体复合物从噬菌体展示肽库中淘选抗免疫复合体多肽, 可建立非竞争免疫分析方法, 丰富农药的免疫分析模式。本文从噬菌体展示技术的原理、噬菌体展示肽库的构建和噬菌体展示肽库的筛选方面概述了噬菌体展示肽库技术; 从模拟表位筛选、抗免疫复合体筛选和新免疫分析方法方面阐述了噬菌体展示肽库技术在农药等小分子免疫分析中的应用; 并对噬菌体展示肽库技术的研究和应用前景进行了展望。     

噬菌体展示肽库技术及其在农药残留免疫分析中的研究进展

噬菌体展示技术是一种特殊的基因工程重组表达技术,已经作为一种强大的工具运用在不同的研究中,包括筛选抗体和酶的配体、筛选小分子的受体、基因工程抗体等。免疫分析作为农药残留快速筛查技术被广泛研究,利用抗体从噬菌体展示肽库中淘选竞争物,可以加快异源免疫分析方法的建立;利用抗原抗体复合物从噬菌体展示肽库中淘选抗免疫复合体多肽,可建立非竞争免疫分析方法,丰富农药的免疫分析模式。本文从噬菌体展示技术的原理、噬菌体展示肽库的构建和噬菌体展示肽库的筛选方面概述了噬菌体展示肽库技术;从模拟表位筛选、抗免疫复合体筛选和新免疫分析方法方面阐述了噬菌体展示肽库技术在农药等小分子免疫分析中的应用;并对噬菌体展示肽库技术的研究和应用前景进行了展望。     

小分子物质酶联免疫分析方法的研究进展

自免疫分析技术问世以来,出现了多种快速检测产品如ELISA试剂盒、免疫层析试纸条,但是目前的快速检测试剂盒普遍存在检测灵敏度低、线性范围窄、易出现假阳性等问题。为解决这些问题,科研工作者发现小分子物质在检测中显示出许多特点,而这些特点正是研究开发酶联免疫检测技术的关键,小分子物质的快速检测已占据越来越重要地位。本文归纳国内外小分子物质酶联免疫分析技术研究成果,总结小分子物质酶联免疫分析方法的内容及特点,介绍小分子物质酶联免疫分析方法中抗原制备特点,分析小分子物质检测中抗体种类及特性,重点比较酶联免疫分析方法中直接和间接竞争法,并分析非竞争法在小分子物质检测中优势,旨在为今后免疫学快速检测技术的研究与开发提供帮助。     

小分子化合物非竞争免疫检测方法研究概述

农兽药、非法添加剂及其他有毒有害化学污染物在食品和环境中的残留引起人们越来越多的关注。这些残留物多为小分子化合物,对其进行免疫测定因受限于分子量和抗原表位数量,多用竞争法,通常不能像检测大分子抗原一样采用夹心式的非竞争法,这就制约了其检测的灵敏度、稳定性及工作范围等。但非竞争免疫分析法也并非完全不适用于小分子化合物,这需要方法学上的改进或创新。作者从检测方法原理、体系构成及应用现状等方面综述了近几十年来有关小分子化合物非竞争免疫分析方法的研究成果,以期为相关研究者提供借鉴和参考。     

抗-Cry2Aa单链抗体分子互作及荧光免疫检测研究

Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义。本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键结合位点,以此为基础将单链抗体作为检测抗体,建立了间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法,对大米样品中Cry2Aa毒素进行了检测。利用生物信息学工具模拟获得单链抗体三维结构模型,分子对接结果显示重链可变区81NY82和121SGNY124区域及轻链可变区的245YSSN248氨基酸残基在与毒素结构Ⅱ区识别过程中起关键作用,为建立高效检测方法奠定基础,进一步基于该单链抗体建立的时间分辨检测方法灵敏度(IC10)为0.08 ng/mL,中抑制浓度(IC50)为7.99 ng/mL,线性检测范围(IC20~IC80)为0.24~263.77 ng/mL,且与常规双抗夹心ELISA法检测呈良好线性关系。     

单域抗体在有害小分子检测领域的研究进展

单域抗体(single-domain antibody, sdAb)是指由抗体或新抗原受体单一可变结构域构成的具有抗原结合活性的基因工程抗体。近年来, 药物、毒素、污染物等小分子物质残留引发的食品安全、环境安全事件层出不穷, 引发广泛的社会关注。单域抗体的研究为食品中的小分子有害化合物免疫分析开辟了一个崭新而有前景的领域。sdAb与传统的兔多克隆抗体、鼠单克隆抗体相比, 具有分子量小、稳定性强、易表达、易体外进化等诸多优点。因此, 国内外学者对sdAb在生物医学和靶标检测等领域的研究不断深入, 其应用也逐渐增多。本文主要综述了小分子(分子量＜1000 Da)靶标sdAb的结构特征、主要特性、识别机制以及抗体开发, 分析了sdAb在食品小分子有害化合物快速检测领域的应用潜力, 以期为克服传统抗体改造困难、稳定性差等问题提供新的抗体制备策略和参考。     

小分子物质的非竞争免疫分析方法最新研究进展

小分子物质（即半抗原）因分子质量小、抗原表位单一,其免疫学分析方法目前多为竞争型,然而非竞争型的分析灵敏度、精确度和线性范围均优于竞争型。本文介绍了近几年小分子物质的非竞争免疫分析方法的最新研究进展,重点阐述了各类分析方法的原理、特点及应用,并对小分子物质的非竞争免疫学分析方法的发展趋势进行了展望。     

抗独特型抗体研究进展

抗独特型抗体是针对抗体可变区的抗原决定簇(独特型)产生的特异性抗体,其中Ab2β是初始抗原在体内的"内映像"(intemalimage),由于可模拟初始抗原而应用于很多领域。抗独特型抗体可作为新一代免疫制剂,用以弥补现有疫苗的不足;抗独特型抗体可作为替代抗原用于免疫分析;同时对其应用前景进行了展望。     

小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。     

基于可视化抗体宏阵列技术的出血性大肠杆菌O157∶H7定量检测

目的：探索建立一种新的出血性大肠杆菌O157∶H7（Escherichia coli O157∶H7）的快速定量检测技术。方法：以硝酸纤维素膜为基片,用生物芯片点样仪制作抗体宏阵列,采用“双抗夹心”原理,对出血性大肠杆菌O157∶H7进行定量检测研究。结果：本方法对出血性大肠杆菌O157∶H7的检出限为3.4×105 CFU/mL,在105～107CFU/mL细菌浓度范围内,宏阵列的灰度值与细菌浓度之间有较好的线性关系。该方法可在2.5 h内同步检测多个样品中出血性大肠杆菌O157∶H7的浓度。结论：通过用标准菌株、模拟带菌等研究显示,用宏阵列技术快速定量检测出血性大肠杆菌O157∶H7,结果肉眼可见,稳定准确,同时操作简便、成本低廉、无需大型设备,制作好的抗体宏阵列可用于快速评估食品中出血性大肠杆菌O157∶H7的污染状况,尤其适合于基层实验室进行快速高通量样品筛查。     

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛IgG单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛IgG单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中IgG质量浓度,该方法在7.8～1 000 ng/mL范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/mL,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%～102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。     

酶标抗原直接竞争ELISA检测食品中氟喹诺酮类药物多残留

固相包被恩诺沙星抗体,辣根过氧化物酶标记的抗原与标准品（或样品）中氟喹诺酮药物竞争结合抗体,建立了高效、高灵敏的氟喹诺酮药物直接竞争酶联免疫吸附分析检测方法。优化反应条件后,得到方法的IC50为2.04 μg/L,灵敏度为0.15 μg/L,线性范围0.3～15 μg/L;方法可以检测12 种氟喹诺酮药物,在生乳、鸡肉、鱼肉和虾肉4 种样品中12 种药物的回收率为70%～121.5%。     

杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用

双特异性单克隆抗体（bispecific monoclonal antibody,BsMAb）是指具有两个不同特异性抗原结合位点的单克隆抗体分子。杂交-杂交瘤技术因其简便易行、制备周期短,在制备BsMAb方面有较大优势。基于杂交-杂交瘤技术能制备出可以特异性识别两种或者两类小分子药物的BsMAb,在食品安全多残留免疫分析检测中具有较好的应用价值。本文综述了杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的进展,探讨了基于该技术的BsMAb生成机制,讨论分析了杂交-杂交瘤及BsMAb筛选制备的关键技术要点,并归纳了BsMAb在检测食品中小分子污染物方面的应用进展,旨在为食品安全多残留免疫分析技术的发展应用提供参考。     

手性农药兽药免疫分析研究进展

手性药物对映异构体在生物体内的代谢转化和毒性作用等具有立体选择性差异,因此从对映体形态水平上加强手性农药兽药的分析研究十分必要。免疫分析法简单快捷、特异性高、灵敏度高,因而成为手性农药兽药分析研究的热点。本文介绍了近年来免疫分析法在手性农药兽药分析检测方面的应用情况,综述了抗体立体选择识别性、分子模拟技术及定量构效关系等在手性药物免疫识别机制研究中应用,并展望手性免疫分析技术的研究和应用发展趋势。     

Open sandwich immunoassay: a novel immunoassay approach based on the interchain interaction of an antibody variable region

Despite their general applicability, conventional sandwich immunoassays suffer from the requirements of two antibodies recognizing different epitopes, and multiple long incubation/washing steps. In addition, the assay is not applicable to the measurement of low-molecular-weight haptens due to their size. Recently, a novel sandwich-type immunoassay that can overcome the limitations of conventional sandwich immunoassays was proposed. The assay, which utilizes antigen-dependent stabilization of an antibody variable region, requires less time and handling, and is particularly suitable for hapten measurement. The principle could be applied to several homogeneous assay formats, and the method has been shown to have superior sensitivity, as well as a lower time requirement compared to conventional assays.     

双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆

为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinothricin acetyltransferase,PAT）单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125 μg/mL,包被酶标板,37 ℃孵育1 h后4 ℃静置过夜,检测样品37 ℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25 μg/mL,37 ℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/mL,大豆蛋白体系中为8 ng/mL;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。