黄曲霉毒素荧光增敏技术研究进展

黄曲霉毒素是农产品和粮油产品的重点监控污染物, 痕量污染即可造成严重后果, 对其实现监控的有效途径是高灵敏度检测技术。通过增强黄曲霉毒素的天然荧光提高检测技术的灵敏度是目前黄曲霉毒素增敏的重要途径。本文对黄曲霉毒素的各种传统荧光增强技术以及前沿的超分子荧光增强技术进行综述, 分析黄曲霉毒素快速荧光增强技术发展趋势。     

饲料中黄曲霉毒素B1快速检测方法的研究

取２０ｇ被检样品,在３６０ｎｍ紫外线下观察,如无亮黄绿色荧光粒,可基本判定饲料未受黄曲霉毒素Ｂ１污染;如有１￣４个亮黄绿色荧光粒,可疑为饲料黄曲霉毒素Ｂ１污染;如有４个以上黄绿色荧光粒,可判定饲料受到了黄曲霉毒素Ｂ１污染。     

乳品中黄曲霉毒素M1残留检测方法研究进展

黄曲霉毒素M1(aflatoxin M_1,AFM_1)具有强致癌性和致突变性,主要存在于动物的肉、尿、乳汁、肝脏、肾脏、肌肉、血液中,其中以乳汁中最为常见。本文综述了薄层色谱法、高效薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、免疫亲和柱-荧光光度法、酶联免疫吸附法、放射免疫法、免疫胶体金法、电化学法、化学发光法等检测残留在乳制品中AFM_1方法的研究进展,概述了各方法优缺点,并对未来检测方法进行了展望,为保证乳品安全和提高我国AFM_1的检测能力提供技术支持。     

多厂家商品化黄曲霉毒素M1检测试剂盒质量评价与分析

目的对市场上11个厂家商品化黄曲霉毒素M_1快速检测试剂盒进行质量评价。方法定性检测试剂盒验证其灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、符合率;定量试剂盒验证其范围和线性、准确度、精密度,并与实验室参考方法比较,分别对定性、定量试剂盒进行质量评价。结果 9个厂家定性试剂盒灵敏度、特异性及符合率均为100%,假阳性率及假阴性率均为0;厂家编号10的定量试剂盒准确度和精密度较差,厂家编号11的定量试剂盒线性、准确度及精密度较好,可以满足检测需求。结论黄曲霉毒素M_1快速检测试剂盒在定性检测方面较成熟,能够参与市场监督;定量试剂盒产品不够成熟,使用前应严格验证其指标。     

利用荧光免疫层析卡测定黄曲霉毒素M1的研究

将量子点与抗黄曲霉毒素M1(AFM1)的单克隆抗体偶联,以AFM1-BSA偶联物包被于NC膜作为检测线,山羊抗鼠二抗包被于NC膜上作为质控线,构建了直接竞争检测AFM1的荧光定量免疫层析检测卡体系,在0.156μg/L~1.25μg/L范围内能够准确定量黄曲霉毒素B1,灵敏度达到0.156μg/L。     

牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的快速测定

采用免疫亲和柱－荧光光度法快速测定了牛乳及乳制品中黄曲霉毒素M1。试样经过离心、脱脂、过滤后滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力，黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上，用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20的混合液通过分离柱洗脱；加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度，衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1，检测低限为0．1μg/kg；在0．1－1．0μg/kg范围内，回收率为89．6％－96．1％，变异系数为0．52％－5．8％，分析一个样品的时间小于30min，分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质，结果表明，本方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。     

超高效液相色谱检测奶及奶制品中的 M族黄曲霉毒素

摘 要：目的 建立一种免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法同时测定奶及奶制品中M族黄曲霉毒素的方法。方法 以乙腈为提取剂和蛋白沉淀剂,采用涡旋混合及超声提取,免疫亲和柱净化。结果 经Welch Ultimate XB-C18（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）色谱柱分离,应用大体积流通池荧光检测,流动相为水和乙腈/甲醇(1:1)。线性范围在0.01~5.00 ng/mL之间,线性系数均大于0.999,黄曲霉毒素M1、M2的检出限为0.003 μg/kg。免疫亲和柱对黄曲霉毒素M1、M2的回收率均在80%以上,液态奶中添加0.05、0.2、1.0 μg/kg的回收率在85.6%~106.4%之间,奶粉中添加0.5、2.0、10.0 μg/kg的回收率在81.5%~93.4%之间。结论 该方法可以适用于奶粉、液态奶中M族黄曲霉毒素检测。     

液相色谱-荧光检测法快速检测饲料中黄曲霉毒素B1

饲料样品经过乙腈-水溶液(乙腈∶水=84∶16)提取,与三氟乙酸衍生后经高效液相色谱-荧光检测法测定。结果表明,饲料样品中黄曲霉毒素B_1回收率大于75%,样品检出限和定量限分别为2.0μg/kg(S/N=3)和6.7μg/kg(S/N=10)。     

全脂加糖炼乳中黄曲霉毒素M1的检测方法

研究全脂加糖炼乳中黄曲霉毒素M1的检测方法.本方法测定的基础是抗原抗体反应.微孔板包被有针对黄曲霉毒素M1的特异性单克隆抗体.加入黄曲霉毒素M1标准品或样品溶液,抗体与样品结合,其余未结合部分抗体与黄曲霉毒素M1酶标记物相结合.没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去.将基质/发色剂加入到孔中并且孵育.结合的酶标记物将基质/发色剂转化为蓝色的产物.加入反应停止液后颜色由蓝转变为黄色.在450nm处测量,吸收光强度与样品中的浓度成反比.本方法为半定量检测,灵敏度是5pg/mL(ppt),试剂盒标准曲线检测范围是5～ 100pg/mL.     

食用油中黄曲霉毒素B1免疫亲和检测技术研究

采用国内自主研制的黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪及配套的免疫亲和试剂盒建立一套快速的免疫亲和检测方法,对食用油中的黄曲霉毒素B1进行测定。用10 mL石油醚和15 mL70%甲醇对5.0 g样品进行初步提取,过滤后,萃取液用免疫亲和微柱纯化富集,洗脱液放入黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪中自动读取结果。实验结果表明,该方法的直接读数的线性范围为0.3-25μg/kg,R2=0.999 5,方法的平均回收率为87.11%,相对标准偏差为1.44%-6.33%,最低定量浓度为0.3μg/kg;应用于食用油样品AFB1检测,方便快速,安全准确,测定全过程所需时间可以控制在30 m in左右,检测成本低于其他仪器方法。     

基于HRP标记抗体的黄曲霉毒素M1的直接竞争-ELISA快速检测方法

为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L,检测范围为0.015～4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%,dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中AFM1大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。     

核酸适体结构转换荧光法检测黄曲霉毒素B1

基于黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)与互补链竞争结合核酸适体的位点使荧光恢复,建立了核酸适体结构转换荧光法检测AFB_1。以PBS为工作液,200 nmol/L核酸适体与200 nmol/L猝灭链反应30min后加入AFB_1孵育1 h,利用荧光分光光度计检测到的荧光恢复程度对AFB_1进行定量检测,可获得该方法的最佳效果。在优化条件下,AFB_1检测浓度范围为1～300 ng/mL,检出限为0. 8 ng/mL。对该检测方法的特异性进行考察,结果表明该法具有良好的特异性。对花生、玉米实际样品进行检测,回收率在81. 1%～108. 3%之间。     

原位光化学衍生快速检测黄曲霉毒素荧光强度

通过优化有机溶剂种类和光化学衍生时间,建立采用光化学衍生进行前处理,并利用黄曲霉毒素原位衍生荧光检测仪快速检测黄曲霉毒素荧光强度的方法。结果表明,在光化学衍生时间为4 min时,70%甲醇溶剂中黄曲霉毒素B1和G1的光化学衍生荧光增强效果最显著,优于甲醇和乙腈;黄曲霉毒素B2和G2荧光强度最大且稳定,光化学衍生后无明显增强。该方法在0.1 ng/mL~20.0 ng/mL线性关系良好,R2>0.9984,方法检测限在0.15 ng/mL~0.37 ng/mL之间,检测时间短,操作简单方便,满足食品和中药材中黄曲霉毒素的快速检测要求。     

Al3+荧光增敏快速检测酸奶和乳酸菌饮料中的胭脂虫红酸（英文）

研究溶剂、浓度、pH值以及金属离子对胭脂虫红酸荧光性能的影响,表明胭脂虫红酸在pH 4且其物质的量浓度为2.0×10^-4 mol/L的水溶液中荧光最强;而胭脂虫红酸对金属离子选择性识别的结果显示,Al^3+能使胭脂虫红酸的荧光强度显著增强从而提高检测的灵敏度。以Al^3+(2.0×10^-3 mol/L)为标准溶液检测样品中胭脂虫红酸含量时,胭脂虫红酸的物质的量浓度在1.0×10^-5~8.0×10^-5 mol/L范围内与其荧光强度呈良好的线性关系,检测限为5.0×10^-6 mol/L。实际应用结果表明,用荧光法检测不同酸奶和乳酸菌饮料中添加的胭脂虫红酸的含量,样品回收率在96.6%~110.5%之间,相对标准偏差小于5.9%。本研究为快速、有效、定量地检测食品中的胭脂虫红酸提供了一种有效的方法。     

构建下转换荧光-适配体的免疫层析试纸条用于快速检测黄曲霉毒素B1

构建下转换荧光-适配体免疫层析试纸条用于食品中黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1,AFB1)的快速高效检测.体系中AFB1存在会减弱下转换荧光-适配体纳米颗粒层析至T线时与AFB1半抗原的结合能力,从而导致下转换荧光信号衰减,进而实现对AFB1的高效检测.该方法在AFB1质量浓度1～40 ng/mL范围内与荧光...     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

黄曲霉毒素G1与β-环糊精及其衍生物超分子体系的荧光光谱研究

研究β-环糊精及其衍生物对AFG1的超分子包合作用及反应体系荧光响应值的影响。经研究:AFG1-HE-β-CD二元包合物反应体系荧光响应值大幅提高,在溶剂为2%的甲醇溶液,HE-β-CD浓度0.05mol/L、反应时间3min时体系可以达到最大的荧光值。根据Benesi-Hildebrand法确定HE-β-CD与AFG1形成1:1包络物。紫外吸收光谱、荧光光谱、KI淬灭实验以及热力学参数表明,AFG1进入HE-β-CD空腔从而荧光得到保护。AFG1在2～40μg/kg范围内与体系荧光呈良好线性关系,相关系数为0.9998,检出限为0.079μg/kg。将HE-β-CD应用于花生样品AFG1分析,准确度和精密度良好。     

ELISA法测定牛奶中黄曲霉毒素M1不确定度评定

目的本实验对酶联免疫法检测牛奶中黄曲霉毒素M1含量的测定结果进行不确定度的评定,确保检测结果的准确性及可靠性。方法实验分析了酶联免疫法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的不确定度的分量及其来源,并通过计算各分量的不确定度得出检测结果的合成标准不确定度。结果酶联免疫法测定牛奶中黄曲霉毒素M1的浓度为45.741 pg/m L,扩展不确定度为11.704 pg/m L,置信水平P=95%,k=2。结论不确定度的主要来源为测量的重复性、试剂盒的灵敏度、标准曲线拟合,而酶标仪测定OD值、ELISA法操作过程中导致的不确定度可以忽略不计。选用酶联免疫法检测黄曲霉毒素M1时增加平行样的测定、注意试剂盒的灵敏度、保持标准曲线的稳定性对于提高酶联免疫法检测的准确性和可靠性具有较强的实用价值。