利用中压制备液相色谱从桑葚中快速制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体

单体花色苷的快速大量制备长久以来是花色苷产业化中的难题,而中压制备液相色谱在产业应用中有着很大的开发空间。选取花色苷组分较单一的桑葚为实验原料,经提取分离总花色苷后使用填装有反相C18填料的耐压玻璃柱作为中压制备液相色谱柱,纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体。结果显示：3 个色谱分离峰中目的峰（峰2）经高效液相色谱和质谱确证为由矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside,C3G）和矢车菊素-3-芸香糖苷（cyanidin-3-rutinoside,C3R）组成,采用峰面积归一化法计算得到C3G纯度为73.56%;通过对峰2采用切割方式进行收集,C3G纯度达到98%以上,单次收集到C3G单体溶液650?mL。中压制备液相色谱法单次上样量大、步骤简洁、成本低廉,可为矢车菊素-3-葡萄糖苷单体的规模化生产提供一定的参考。     

云南丽江和吉林靖宇11种越橘果实花色苷组分的分析

采用高效液相色谱法对云南丽江、吉林靖宇11种越橘果实花色苷组分进行测定。通过标准品的分析,建立了飞燕草素-3-半乳糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、锦葵色素-3-半乳糖苷、锦葵色素-3-葡萄糖苷的回归方程,相关系数为0.9939~0.9968,精密度RSD为2.00%~3.73%,回收率在98.90%~100.99%,方法准确可行。通过6种标准品的对比,供试的15个样品中,所有越橘品种均有飞燕草素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-半乳糖苷、锦葵色素-3-半乳糖苷3种花色苷,飞燕草素-3-半乳糖苷平均含量为223.99 μg/g、锦葵色素-3-半乳糖苷平均含量为153.34 μg/g,二者占总花色苷的65%。采用欧氏距离聚类分析表明,集群1为飞燕草素-3-半乳糖苷含量较高的三种越橘,代表品种为丽江雷戈西、丽江奥尼尔、靖宇杜克;集群2为6种花色苷总含量较高的越橘品种,代表品种为丽江北陆与靖宇早蓝,说明飞燕草素-3-半乳糖苷含量与花色苷总含量是评价越橘花色苷特点的重要因子。     

黑豆皮花色苷的中压液相色谱制备及结构鉴定

以黑豆皮为实验材料,用乙醇浸提法对黑豆皮中的花色苷进行提取,用大孔吸附树脂对花色苷进行纯化,经冷冻干燥得到黑豆皮花色苷粗品。利用中压制备色谱对花色苷组分进行分离,通过质谱分析鉴定经中压制备色谱分离后的花色苷组分。结果表明:黑豆皮花色苷粗品中的总花色苷含量为26.9%,经中压制备色谱对花色苷粗品进行分离后的2峰中矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度达到91.46%。黑豆皮中的主要花色苷为天竺葵素-3-O-芸香糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷-4-乙醛。     

新疆药桑椹中花色苷的分离与鉴定

采用高速逆流色谱分离制备药桑花色苷。以甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-三氟乙酸(2:2:1:5:0.01,V/V)为溶剂体系,进样量50mg,分离得到纯度分别为99.24%、88.5%、99.9%和96%的4个花色苷单体。通过高速逆流色谱(HSCCC)、紫外-可见光谱、质谱进行结构鉴定,初步确定馏分1为矢车菊-3-O-芸香糖苷,馏分2为天竺葵-3-O-芸香糖苷,馏分3为矢车菊-3-O-葡萄糖苷,馏分4为天竺葵-3-O-葡萄糖苷。此法高效、稳定、简捷易行。     

中压快速分离系统大量制备高纯度桑葚和树莓花色苷的工艺研究

为快速获得大量不同结构花色苷,本文以富含花色苷的桑葚和树莓为原料,通过大孔吸附树脂AB-8对两种花色苷粗提物初步分离后,利用中压快速分离系统分离得到高纯度的桑葚及树莓花色苷。制备条件为:以flash C₁₈(80 g,20~35 μm,100 A)为制备柱,两支串联,采用A相2%甲酸水,B相甲醇,流速30 mL/min,梯度洗脱程序:0~2 min,20% B;2~22 min,20%~30% B;22~32 min,30%~40% B,进样量300 mg,实现了3种不同结构花色苷的分离及纯化,桑葚中的矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷产品纯度分别达到了95%和41%;树莓中的矢车菊素-3-槐糖苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷产品纯度分别达到了60%和75%。其中桑葚中的矢车菊素-3-葡萄糖苷在32 min梯度程序内一次性可获得30 mg,且纯度为95%,可达到标准品的要求。     

‘紫娟’茶花色苷的分离鉴定

依次以MCI gel CPH 20P(75~150μm)树脂和Sephadex~(TM) LH-20葡聚糖凝胶为层析柱填料,对‘紫娟’茶花色苷进行分离纯化,采用5%乙酸-甲醇溶液和5%乙酸溶液对花色苷提取液梯度洗脱,得到6种花色苷组分。采用薄层层析、高效液相色谱及高效液相色谱-电喷雾-串联质谱对‘紫娟’茶花色苷组成成分进行研究。结果表明:从‘紫娟’茶鲜叶中分离出的花色苷为飞燕草素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(6-(Z)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、矢车菊素-3-O-(6-(Z)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、飞燕草素-3-O-(6-(E)对香豆酸)吡喃半乳糖苷、矢车菊素-3-O-(6-(E)对香豆酸)吡喃半乳糖苷。     

桑葚花色苷的分离纯化及其热降解动力学研究

通过AB-8大孔树脂、乙酸乙酯萃取和Toyopearl TSK HW-40S凝胶柱层析对桑葚汁中的花色苷进行分离纯化,得到两个单一的化合物组分。经HPLC-MS鉴定这两种花色苷分别为矢车菊素-3-芸香糖苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷。在此基础上,研究了不同纯度花色苷的降解动力学,结果表明:桑葚花色苷粗提物中所含的黄酮类化合物对花色苷的热降解有较强的保护作用,含黄酮的花色苷体系对p H值的变化更为敏感。在p H 3.5时,矢车菊素-3-芸香糖苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷的热稳定性基本相同;在p H 4.0时,矢车菊素-3-芸香糖苷的热稳定性略好于矢车菊素-3-葡萄糖苷。     

紫薯花色苷分离纯化及主要成分的研究

以紫薯花色苷为研究对象,研究了5种大孔树脂和洗脱条件对紫薯花色苷的纯化的影响,并且利用液相色谱与质谱联用技术分离鉴定了紫薯花色苷的主要成分。结果表明,采用AB-8型大孔树脂纯化,原料液p H值为3,洗脱剂乙醇体积分数为60%时,能较好实现花色苷纯化;根据质谱分子离子峰和碎片峰等以及光谱信息鉴定为矢车菊素葡萄糖苷、原花青素、芍药素3-槐糖苷-5-葡萄苷、矢车菊素-3-(6'-咖啡酰槐糖苷)-5-葡糖苷、鞣花单宁、芍药素3-(阿魏酰-羟基苯甲酰槐糖苷)-5-葡萄苷等物质。     

高速逆流色谱法分离玫瑰茄中的花色苷

实验以玫瑰茄花萼为原料,建立高速逆流色谱法制备分离玫瑰茄花色苷的方法。玫瑰茄花萼经40%乙醇浸提,通过D101大孔吸附树脂吸附初步纯化,然后水-正丁醇-甲基叔丁基醚-乙腈-三氟乙酸(6:3:1:1:0.001,V/V)为两相溶剂系统进行HSCCC分离纯化,上相为固定相,下相为流动相,流速2.0 mL/min,上样量120 mg,经一次分离得到花色苷1粉末21.8 mg,HPLC面积归一法计算纯度为97.8%,回收率为95.3%;花色苷2纯度为84.5%,经相同溶剂体系二次分离,得到5.3 mg纯度为96.2%的花色苷2,回收率为92.3%。通过质谱、核磁等技术鉴定所分离得到的两个花色苷类化合物分别为飞燕草素-3-O-桑布双糖苷以及矢车菊素-3-O-桑布双糖苷。该方法操作简便,重现性好,适于玫瑰茄中高纯度花色苷大量制备,为花色苷进一步药理研究及质量控制提供物质基础。     

黑果腺肋花楸果中总花色苷含量测定方法的比较

分别探讨摩尔吸光系数和对照品对pH示差法和高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）法测定黑果腺肋花楸果中总花色苷含量的影响,并通过比较优化前后pH示差法和HPLC法的测定结果,确定黑果腺肋花楸果中总花色苷含量的最佳测定方法。采用t检验将优化前后测定方法测得的总花色苷含量进行比较。结果表明,摩尔吸光系数和对照品的选择均会影响测定结果,其中以黑果腺肋花楸果中高含量的矢车菊素-3-O-半乳糖苷为标准的pH示差法和混合标样HPLC法均优于传统方法（以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为标准）（P＜0.05）;以矢车菊素-3-O-半乳糖苷为标准的单标样HPLC法与混合标样HPLC法测定结果比较无显著差异（P＞0.05）;HPLC法测定结果均高于pH示差法。结果表明,混合标样HPLC法为测定黑果腺肋花楸果中总花色苷含量最准确的方法,但成本较高;矢车菊素-3-O-半乳糖苷单标样HPLC法简单、准确而经济,同样适用于黑果腺肋花楸果中总花色苷的含量测定。     

欧李花色苷的分离及其鉴定

采用高效液相色谱与离子阱串联飞行时间检测器-质谱联用技术,分离鉴定欧李中的花色苷类化合物。结果表明：从欧李红色素中分离得到6种组分,分别为：矢车菊-3-葡萄糖苷、天竺葵-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-鼠李糖葡萄糖苷、天竺葵-3-鼠李糖葡萄糖苷、矢车菊-3-乙酰基葡萄糖苷、天竺葵-3-乙酰基葡萄糖苷。其中,矢车菊-3-葡萄糖苷为主要花色苷,占欧李总花色苷含量的62.6%。因此,采用高效液相色谱-质谱联用技术可有效地分离分析欧李中花色苷类物质。     

桑椹提取物中酚类化合物的抗氧化及抗糖基化活性分析

利用葡聚糖凝胶层析柱将桑椹提取物分为6 个组分（F1、F2、F3、F4、F5、F6）,研究了桑椹中酚类化合物的抗氧化能力和抗糖基化能力。采用Folin-酚法、pH示差法和高效液相色谱法测定各组分总酚、总花色苷含量和酚类化合物成分;通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2,2’-联氮-二（3-苯并噻唑-6-磺酸）（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid),ABTS）自由基清除率和亚铁还原能力实验评价各组分抗氧化能力;建立牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应体系评价各组分抗糖基化能力。结果表明：桑椹提取物中检测出5 种酚酸、两种花色苷和两种黄酮类物质;F3的总花色苷含量最高（P＜0.05,（101.10±2.39） mg 矢车菊素-3-葡萄糖苷当量/g）,F5的总酚含量最高（P＜0.05,（188.05±2.01） mg 没食子酸当量/g）;F3的抗氧化能力显著高于其他组分（P＜0.05,DPPH自由基清除能力、ABTS＋·清除能力、亚铁还原能力分别为（129.33±5.58）、（194.33±2.48）、（130.44±1.38） mmol Trolox/g）,F5的抗糖基化能力显著强于其他组分（P＜0.05,牛血清白蛋白-果糖模拟反应体系和牛血清白蛋白-丙酮醛模拟反应体系中的糖基化抑制率分别为（87.23±0.36）%和（66.99±1.62）%）;桑椹提取物的抗氧化能力、抗糖基化能力分别与总花色苷、总酚含量呈现显著的回归关系（P＜0.05）。     

Quantitative changes in anthocyanin pigments of lychee fruit during refrigerated storage

Changes in cyanidin-3-glucoside, cyanidin-3-rutinoside, malvidin-3-acetylglucoside, total anthocyanins, percent polymeric color and browning indexes in stored lychee (Litchi chinensis Sonn.) fruits were determined. Total anthocyanin content declined from 1·77 to 0·73 mg/g fresh weight, and individual anthocyanins also decreased throughout the 48-day storage period. Decline in anthocyanins was accompanied by an increase in browning. Polymeric pigments also gradually increased from 20·9 to 53%.     

插田泡花色苷的振荡提取及抗氧化活性

采用乙醇振荡提取插田泡果实花色苷,通过正交试验筛选花色苷提取的最佳条件,同时对插田泡花色苷的抗氧化活性进行研究。结果显示,体积分数85%乙醇溶液（pH 3）按料液比1∶30（g/mL）在50 ℃条件下振荡提取1 h,同样条件下样品再重复提取,振荡时间 1 h,花色苷提取量达211.05 mg/100 g。在实验范围内,花色苷对2,2’-联氮-双（3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸）（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS）、二苯代苦味肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH）、羟自由基（·OH）均有较强的清除能力,清除率随质量浓度的升高而增大,呈正线性相关;花色苷对不同自由基的抑制能力大小依次为·OH（IC50=1.71 μg/mL）＞ABTS+·（IC50=2.27 μg/mL）＞DPPH自由基（IC50=3.44 μg/mL）,抑制能力均远高于阳性对照VC和二丁基羟基甲苯。结果表明,插田泡花色苷具有显著的抗氧化活性,是一种值得开发的天然抗氧化剂和功能性食品资源。     

High performance liquid chromatography analysis of anthocyanins in bilberries (Vaccinium myrtillus L.), blueberries (Vaccinium corymbosum L.), and corresponding juices

In the present study the anthocyanin content of commercially available bilberry juices and fresh fruits were quantified by using 15 authentic anthocyanin standards via high performance liquid chromatography with an ultra-violet detector (HPLC-UV/VIS). Delphinidin-3-O-glucopyranoside, delphinidin-3-O-galactopyranoside, and cyanidin-3-O-arabinopyranoside were the major anthocyanins found in juices, nectar, and fresh bilberries. In contrast, fresh blueberries had higher concentrations of malvidin-3-O-arabinopyranoside and petunidin-3-O-galactopyranoside. Up to 438 mg anthocyanins per 100 g fresh weight (2762 mg/100 g dry weight (DW)) were detected in blueberries from various sources, whereas bilberries contained a maximum of 1017 mg anthocyanins per 100 g fresh weight (7465 mg/100 g DW). Commercially available bilberry and blueberry juices (n= 9) as well as nectars (n= 4) were also analyzed. Anthocyanin concentrations of juices (1610 mg/L to 5963 mg/L) and nectar from bilberries (656 mg/L to 1529 mg/L) were higher than those of blueberry juices (417 mg/L) and nectar (258 mg/L to 386 mg/L). We conclude that using several authentic anthocyanin references to quantify anthocyanin contents indicated them to be up to 53% and 64% higher in fresh bilberries and blueberries, respectively, than previously reported using cyanidin-3-O-glucoside. This study has also demonstrated that commercially available juices produced from bilberries contain much higher anthocyanin concentrations than those from blueberries. PRACTICAL APPLICATION: We have investigated the contents of a special class of antioxidants, namely anthocyanins in blueberry and billberry fruits and juices commercially available in Germany. To achieve reliable data we have used authentic standards for the first time. We think that our results are important in the field of nutritional intake of this important class of polyphenols and fruit juice companies get a closer insight in the occurrence of these antioxidants in market samples to be used in food composition databases and for nutritional survey.     

脱落酸处理对赤霞珠和烟73葡萄果皮花色苷组分的影响

目的：比较赤霞珠和烟73葡萄果皮花色苷组分的差异,以及脱落酸（abscisic acid,ABA）处理提高果实\着色前提下,对两个品种果皮花色苷组分的影响。方法：以烟73和赤霞珠为试材,在着色前期用200 mg/L ABA处理果穗,对照用清水代替激素。成熟采收后,提取果皮中花色苷,利用高效液相色谱-质谱联用方法,对花色苷组分进行定性和定量检测,然后进行比较分析。结果：对照中共检测到16 种花色苷,其中烟73果皮花色苷组分检测到15 种,含量为8 400.9 mg/kg,赤霞珠检测到12 种,含量为1 131.9 mg/kg。ABA处理显著提高了两品种果皮花色苷总量：烟73提高至10 380.2 mg/kg,赤霞珠提高至1 470.2 mg/kg。花色苷各大类总量也在不同程度得到提高。结论：烟73和赤霞珠两个不同葡萄品种间花色苷种类和含量存在显著差异。ABA处理显著提高了两品种果皮花色苷总量,并且不同种类花色苷含量均在不同程度得到提高,从而促进果实着色。     

蓝莓加工过程中出汁率及花青素的稳定性研究

研究果胶酶对蓝莓出汁率的影响,对果胶酶提高蓝莓出汁率的工艺条件进行优化,并研究了pH值、温度、光 照、金属离子以及部分添加剂对蓝莓果汁中花青素稳定性的影响。结果表明：果胶酶的最佳酶解条件为果胶酶添加量（质 量分数）0.06%、酶解温度35 ℃、酶解时间2 h。在此条件下蓝莓的出汁率可达到82.1%,与对照组相比,出汁率提高了 24.6%。蓝莓果汁中的花青素在pH≤3时比较稳定;对光和高温比较敏感。VC可以增加花青素的稳定性,而苯甲酸钠以及 蔗糖对花青素的稳定性无显著影响。K+、Na+、Ca2+、Cu2+、Fe2+对果汁中花青素的稳定性无显著影响;Fe3+以及浓度达到 0.1 mol/L的Mg2+对果汁中花青素的稳定性具有破坏作用;浓度低于0.05 mol/L的Mg2+能增加果汁中花青素的稳定性。     

大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷

以蓝莓果实为原料,采用大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷。分别比较6 种不同类型树脂 对蓝莓花色苷静态吸附-解吸效果,优化大孔树脂分离纯化蓝莓花色苷的工艺。结果表明：D101大孔树脂对蓝莓 花色苷的分离效果最佳,对花色苷的吸附属于多分子层吸附。在柱压力为1 MPa、温度25 ℃、上样液质量浓度为 0.073 mg/mL、洗脱剂乙醇体积分数为80%、流速5 mL/min条件下,经D101大孔树脂柱分离后,花色苷纯度从5.53% 增加到75.58%,提高了12.67 倍。采用Sephadex LH-20中压柱层析对蓝莓花色苷进一步分离纯化,主要得到1 种花 色苷组分,通过高效液相色谱和高效液相色谱-电喷雾质谱联用对蓝莓花色苷进行定性和定量分析,确定该组分为 矢车菊-3-O-葡萄糖苷,纯度达到90.88%。     

Optimization of microwave-assisted extraction of anthocyanins from mulberry and identification of anthocyanins in extract using HPLC-ESI-MS

Anthocyanins are naturally occurring compounds that impart color to fruits, vegetables, and plants. This study aims to optimize the microwave-assisted extraction (MAE) conditions of anthocyanins from mulberry (M. atropurpurea Roxb.) using response surface methodology (RSM). A Box-Behnken experiment was employed in this regard. Methanol concentration, microwave power, and extraction time were chosen as independent variables. The optimized conditions of MAE were as follows: 59.6% acidified methanol, 425 W power, 25 (v/w) liquid-to-solid ratio, and 132 s time. Under these conditions, 54.72 mg anthocyanins were obtained from 1.0 g mulberry powder. Furthermore, 8 anthocyanins were identified by high-performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry (HPLC-ESI-MS) in mulberry extract. The results showed that cyanidin-3-glucoside and cyanidin-3-rutinoside are the major anthocyanins in mulberry. In addition, in comparison with conventional extraction, MAE is more rapid and efficient for extracting anthocyanins from mulberry.     

遗传算法优化双水相法提取葡萄皮渣花色苷工艺及其组分分析

以葡萄皮渣为原料,采用双水相法提取其中的花色苷并鉴定花色苷组分。在单因素实验的基础上,通过遗传算法优化双水相法提取葡萄皮渣花色苷的工艺;利用高效液相色谱-质谱联用鉴定葡萄皮渣花色苷提取物中花色苷组分。结果表明:双水相法提取葡萄皮渣花色苷的最佳工艺为:乙醇体积分数40%、硫酸铵质量分数26%、pH3.0、料液比1:38 g/mL,在此条件下花色苷得率（3.05±0.07） mg/g。经鉴定发现葡萄皮渣花色苷提取物含有2种花色苷组分,分别为飞燕草-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷,其纯度分别为90.16%和92.41%。研究结果为天然花色苷提取提供一种新的提取方式,并为进一步开发花色苷功能性食品提供依据。