钝顶螺旋藻多糖的分离纯化及组成分析

目的：对钝顶螺旋藻多糖进行提取、分离纯化和热降解,并对不同多糖组分的基本化学性质和糖链的精细组成进行分析。方法：采用蛋白酶酶解、醇沉、阴离子交换色谱法和热降解,从钝顶螺旋藻中提取和分离纯化出P0、P0.2、P0.4、P0.6、P0.8五种多糖组分及其热降解产物。采用高效凝胶排阻色谱法、离子色谱法、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生-高效液相色谱法和亲水液相色谱-高分辨傅里叶转换质谱（hydrophilic interaction liquid chromatography-Fourier transform mass spectrometry,HILIC-FTMS）联用技术,分析比较不同多糖组分的化学性质和糖链精确组成。结果：钝顶螺旋藻多糖中P0、P0.2、P0.4和P0.6组分硫酸根质量分数在6%～7%,而P0.8组分硫酸根质量分数最高（14.46%）。单糖组成分析结果说明,P0组分是1 种葡聚糖,P0.2组分是主要由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、岩藻糖等中性糖组成的杂多糖;而P0.4、P0.6和P0.8组分主要是由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖和半乳糖组成的结构非常复杂的硫酸鼠李聚糖。采用HILIC-FTMS分析多糖组分热降解产物中的寡糖组成,发现P0.2糖链主要是由己糖单糖、戊糖二糖、脱氧己糖-戊糖寡糖、脱氧己糖-糖醛酸的寡糖片段组成,硫酸根在脱氧己糖、戊糖和己糖上,糖链组成复杂。而P0.4和P0.6组成相似,主要鼠李糖-戊糖寡糖、鼠李糖-葡萄糖醛酸寡糖、戊糖二糖和三糖寡糖片段组成,硫酸根连接在鼠李糖和戊糖上。结论：钝顶螺旋藻中有多种不同结构的复杂硫酸多糖,其中葡萄糖醛酸-鼠李聚糖是钝顶螺旋藻中特有的一种硫酸多糖。     

羊栖菜褐藻糖胶寡糖组分分析及抗凝血活性

为研究褐藻糖胶中具有抗凝血活性的寡糖组分,从羊栖菜中分离纯化得到褐藻糖胶（命名为SFF）,通过高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法、化学法测定SFF的单糖组成、分子质量、理化性质。采用盐酸降解法降解SFF,并通过Bio-gel P4凝胶色谱柱对寡糖组分进行有效分离。采用活化部分凝血酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间评价寡糖组分的抗凝血活性,筛选高活性且低分子质量的寡糖组分,通过质谱法解析其结构,探究抗凝血SFF寡糖的结构特征。结果表明,SFF主要由岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖组成,物质的量比为67.11∶26.69∶2.54∶3.66。SFF分子质量较大为708 kDa,总糖、蛋白、硫酸基质量分数分别为56.44%、1.14%和26.22%。盐酸降解产物经凝胶色谱柱分离得到5 种寡糖组分P1～P5,这5 种寡糖组分均可延长活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time,APTT）,其中P1、P2、P3对APTT的延长作用高于P4、P5,P3的延长作用尤为明显;对凝血酶时间和凝血酶原时间无延长作用。高抗凝血、低分子质量寡糖组分P3的质谱分析表明,P3是一种高纯度寡糖组分,主要由二硫酸化岩藻三糖组成。本实验筛选出一种具有良好抗凝血活性的高纯度寡糖组分,丰富了抗凝血褐藻糖胶寡糖的研究。     

肝素寡糖对人外周血T细胞分泌白介素-4和白介素-5的影响

目的研究肝素寡糖（OligS）对人外周血T细胞（PBTLS）分泌白介素-4（IL-4）和白介素-5（IL-5）的抑制作用。方法用3种方法降解肝素并用凝胶过滤色谱法制备肝素寡糖。抽取10例过敏性嗜酸粒细胞性胃肠炎患者的PBTLs用植物凝集素（PHA）和Oligs处理,用ELISA法测定PBTLs培养的上清液分泌IL-4和IL-5的含量。结果Oligs样品浓度5μg／mL时,可显著抑制PBTLs对细胞因子IL-4、IL-5的分泌。但是,不同相对分子质量（Mr）的Oligs对IL-4和IL-5具有不同的作用。对IL-4抑制作用最强的是用过氧化氢降解肝素所得Mr为1142的四糖。抑制IL-5作用最强的是用D-消除法降解肝素所得Mr为1806的六糖。结论Oligs对人PBTLs分泌IL-4和IL-5的抑制作用与分子结构密切相关,并且有-个基本结构。对IL-4和IL-5抑制作用最强的分别是四糖和六糖。     

κ-卡拉胶的高温高压法降解工艺和降解机制研究

目的： 研究了κ-卡拉胶的高温高压降解法制备水溶性卡拉胶的工艺和降解产物的寡糖指纹谱图,探究κ-卡拉胶的高温高压降解机制。方法： 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法、高效凝胶排阻色谱法分析温高压降解的水溶性κ-卡拉胶的分子量和得率。利用亲水液相色谱-高分辨质谱联用技术(HILIC-HRMS),分析比较不同pH值时降解产物的寡糖指纹谱图。结果： 研究发现,采用醋酸溶液调节溶液的pH值在4.0-6.0之间,高分子量κ-卡拉胶在100℃-120℃ 加热30-90 min后迅速降解,可以获得不同分子量的水溶性卡拉胶。我们发现pH和温度对卡拉胶的高温高压降解产物的分子量和得率有很大的影响。HILIC-MS分析降解产物的寡糖指纹谱图发现,高温高压降解获得的卡拉胶寡糖产物主要是聚合度2-8的卡拉胶偶数糖和少量的奇数糖,还有20%左右的聚合度1-8的硫酸半乳寡糖。不同硫酸化的寡糖的存在证明,κ-卡拉胶的糖链中存在不同硫酸化的半乳糖-3,6内醚半乳糖二糖和半乳寡糖片段。结论：通过控制溶液的pH值、降解温度和时间,高温高压法可以快速、高效的制备水溶性卡拉胶和寡糖,产物中的寡糖组成主要是不同硫酸化的卡拉胶偶数寡糖和半乳寡糖。     

酶法降解小麦秸秆碱预处理浓度的选择及酶解产物的检测

通过研究氢氧化钠溶液预处理小麦秸秆浓度与β-葡聚糖酶对预处理后的小麦秸秆降解产物的关系,确定酶解小麦秸秆的最佳碱处理浓度,分析降解产物主要成分.将不同浓度碱处理的小麦秸秆用72％硫酸溶液酸解,高效液相色谱法(HPLC)测定酸降解产物中的葡萄糖及木糖含量,并进而推算出小麦秸秆中的纤维素及半纤维素含量,由纤维素、半纤维素含量及酶解转化率决定最佳碱处理条件;HPLC定性检测β-葡聚糖酶降解预处理后的小麦秸秆的主要降解产物 .结果表明,NaOH预处理小麦秸秆的最佳浓度为1％,处理后的小麦秸秆纤维素、半纤维素含量分别为44.13％、21.34％;β-葡聚糖酶降解小麦秸秆的主要产物为纤维二糖. 本研究为以小麦秸秆为原料酶解制备纤维寡糖提供了依据.     

氧化与酸降解卡拉胶寡糖抗氧化活性的研究

对κ-卡拉胶进行氧化降解,得到两种卡拉胶寡糖(L-O-KC和H-O-KC);对κ-卡拉胶进行酸降解,得到两种卡拉胶寡糖(L-H-KC和H-H-KC);对产物进行IR表征,并对其抗氧化性能进行测试.结果表明:酸降解得到的卡è拉胶寡糖对超氧阴离子自由基O2-及过氧化氢的清除能力强于氧化降解得到的卡拉胶寡糖.     

天冬氨酸降解人参二醇组皂苷及其美拉德反应产物的抗氧化活性

以天冬氨酸为催化剂,在高温蒸煮条件下,研究了天冬氨酸对人参二醇组皂苷的降解和美拉德反应的影响 以及美拉德反应产物的抗氧化活性。结果表明：天冬氨酸能使人参二醇组皂苷降解成稀有皂苷20S-Rg3、20R-Rg3、 Rk1和Rg5,其转化途径为人参二醇组皂苷→20S-Rg3/20R-Rg3→Rk1/Rg5。人参皂苷20R-Rg3和Rg5的质量浓度随着 温度的升高而升高,20S-Rg3和Rk1的质量浓度随着温度的升高而降低。抗氧化实验结果表明：随着蒸煮温度的升 高,天冬氨酸与人参二醇组皂苷反应产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除作用明显增强（P＜0.01）,其抗 氧化作用的主要物质为天冬氨酸与人参皂苷上水解产生的糖发生反应生成的美拉德反应产物。本研究对开发绿色环 保型人参稀有皂苷保健食品具有参考价值和意义。     

超声对花色苷稳定性的影响及其降解动力学

为研究超声对花色苷稳定性影响规律及其降解动力学,采用单因素试验在超声提取模拟体系中研究4 种因 素（功率密度、温度、溶剂、pH值）对5 种常见花色苷稳定性的影响规律,采用试错法分析花色苷超声降解动力 学,并结合液相色谱-质谱联用技术分析超声处理后的降解产物。结果表明：随着温度的升高,花色苷在超声处理 下的降解率下降;5 种花色苷在体积分数70%乙醇溶液中降解最少;pH 1～5范围内,花色苷降解率呈先增加后减 少趋势。飞燕草素-3-葡萄糖苷的超声降解符合一级动力学模型,矢车菊素-3-葡萄糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷、锦 葵素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷的超声降解符合零级动力学模型。在天竺葵素-3-葡萄糖苷、锦葵素-3-葡萄糖 苷、芍药素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷的降解产物中都检测到8-β-D-吡喃葡萄糖基-2,4-二羟基-6-氧代环己 基-2,4-二烯基乙酸,同时也检测到山柰酚、槲皮素、丁香酸、阿魏酸、2,6-二甲氧基苯酚等。     

壳寡糖-O-曲酸聚合物的理化性质及抗氧化活性研究

以壳寡糖和曲酸为化学合成起始物,将曲酸基团引入到壳寡糖的分子链中,制备获得一种新的壳寡糖-O-曲酸聚合物(COS-O-KA),在对其结构进行表征的基础上,对合成产物的分子质量、多分散性指数、水溶性、体外溶血活性、体外生物相容性、DPPH自由基清除能力、ABTS⁺ 自由基清除能力和动物毒理性进行研究。结果表明,合成产物结构经核磁共振光谱表征,证明最终成功合成了3个不同取代度的壳寡糖-O-曲酸聚合物[COS-O-KA1-3(COS-O-KA1、COS-O-KA2、COS-O-KA3)]。与原料壳寡糖和曲酸相比,COS-O-KA1-3表现出较好的水溶性、体外溶血活性、体外生物相容性、DPPH自由基清除能力、ABTS⁺自由基清除能力。在质量浓度为15mg/mL时,COS-O-KA1-3的溶血率小于20%,而相同浓度的壳寡糖和曲酸的溶血活性则大于30%；在质量浓度为2.5mg/mL时,壳寡糖、曲酸、COS-O-KA1、COS-O-KA2和COS-O-KA3对DPPH自由基的清除率分别为52.28%、59.33%、85.21%、87.35%和82.83%；合成产物COS-O-KA1-3对ABTS⁺自由基的清除活性缓慢升高,在质量浓度为2.0mg/mL时达到稳定水平(83.87%、85.76%、82.33%),远高于壳寡糖(39.65%)和曲酸(46.54%)；动物毒理性实验表明,COS-O-KA安全无毒。COS-O-KA有望被作为一种有前途的抗氧化材料。     

橙汁模拟体系非酶褐变产物及评价标准

以橙汁中糖、氨基酸、抗坏血酸、柠檬酸为变量构建不同的非酶褐变模拟体系,通过研究体系贮藏期间3-羟基-2-吡喃酮（3-hydroxy-2-pyrone,3OH2P）、5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural,5-HMF）、糠醛（furfural,2-F）3 种褐变产物的变化,确定褐变产物的可能来源;通过分析比较褐变度（A420 nm）、褐变指数（browning index,BI）、总色差值（ΔE）3 种非酶褐变评价标准的相关性,确定不同评价标准是否有一致性。结果表明：果糖降解是生成5-HMF的主要途径,3OH2P来源于抗坏血酸的降解,糖能促进2-F的生成;在含糖的模拟体系中,A420 nm、BI、ΔE相互之间均呈显著正相关（P＜0.05）,这3 种评价标准具有一致性;然而在不含糖的体系中,A420 nm与BI、ΔE均无显著相关性（P＞0.05）,这3 种评价标准存在差异性。     

响应面试验优化四角蛤蜊调味料风味前体物质酶解制备工艺

以四角蛤蜊肉为原料,利用酶解技术获得四角蛤蜊调味料风味前体物质。以水解度和感官评价为指标,确定酶的种类与比例。在单因素试验的基础上,使用中性蛋白酶和复合风味蛋白酶,通过Box-Behnken响应面分析法,研究双酶酶解四角蛤蜊的工艺条件。研究结果：当中性蛋白酶和复合风味蛋白酶质量比为2∶1时,其酶解液的水解度和鲜度都最佳;双酶酶解最佳条件为酶添加量2.4‰、时间5.5 h、温度52 ℃、料液比1∶4（g/g）、自然pH值,此时酶解液的水解度较大（44.32%）,风味较好。     

亚麻籽中木脂素及其水解产物的分离、鉴定和抗氧化活性

采用快速柱层析和制备薄层色谱相结合的新方法,从亚麻籽中分离木脂素开环异落叶松脂酚二糖苷和对香豆酸苷甲酯。同时发现,亚麻籽开环异落叶松脂酚二糖苷在酸水解时除生成开环异落叶松脂酚和无水开环异落叶松脂酚,还部分转化为开环异落叶松脂酚单糖苷。从亚麻籽的酸水解产物中分离出6 个化合物,分别鉴定为：开环异落叶松脂酚单糖苷、开环异落叶松脂酚、无水开环异落叶松脂酚、对香豆酸甲酯、阿魏酸甲酯和5-羟甲基糠醛;其中对香豆酸苷甲酯、对香豆酸甲酯和阿魏酸甲酯为首次从亚麻籽水解产物中分离获得,分别由对香豆酸苷、对香豆酸和阿魏酸在水解时与甲醇发生酯交换形成。体外抗氧化测试结果表明,开环异落叶松脂酚二糖苷、开环异落叶松脂酚单糖苷和开环异落叶松脂酚对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2－·）均具有清除作用,且呈明显的量效关系。     

鸡胸软骨Ⅱ型胶原免疫活性肽的制备及其性质

以水解度为指标,优化了中性蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原的条件,在此基础上制备不同水解度Ⅱ型胶原酶解复合物,并以淋巴细胞增殖率为指标对其免疫活性进行研究。结果表明,中性蛋白酶的酶解能力最强,其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 7.5、底物质量浓度25 mg/mL、加酶量40 U/mg、酶解时间150 min。当Ⅱ型胶原在水解度为18%时,其对淋巴细胞的增殖活性达到58.69%。Ⅱ型胶原酶解复合物的质量浓度对淋巴细胞的增殖率也有显著影响,当其质量浓度达到1 mg/mL时,对淋巴细胞增殖能力达到最大。免疫活性较高的Ⅱ型胶原酶解复合物的分子质量主要分布于1 000～180 D范围内,占其总含量的75.21%。     

脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

山药黏液质及其酶解物的微观结构及免疫活性

从铁棍山药中提取黏液质,选取不同酶（胰蛋白酶、纤维素酶、复合蛋白酶）对其进行酶解,得到不同酶解产物,采用红外光谱和扫描电子显微镜技术,对黏液质及其酶解物的微观结构进行分析,同时采用体外细胞培养和实时荧光定量聚合酶链式反应方法,研究黏液质及其酶解物对脾淋巴细胞增殖转化及细胞因子mRNA相对表达量的影响。结果显示：黏液质及其酶解物,在微观结构上呈现很大差别;黏液质及其酶解物均能促进脾淋巴细胞增殖转化,但酶解物的促进作用强于黏液质;黏液质及其酶解物对Th1族细胞因子的mRNA表达促进作用显著高于对Th2族细胞因子的mRNA表达促进作用,使细胞中Th1/Th2平衡向Th1方向偏移。     

Physicochemical and sensory characteristics of whey protein hydrolysates generated at different total solids levels

Whey protein hydrolysates were generated at different total solids (TS) levels (50-300 g/l) using the commercially available proteolytic preparation Debitrase HYW20, while enzyme to substrate ratio, pH and temperature were maintained constant. Hydrolysis proceeded at a faster rate at lower TS reaching a degree of hydrolysis (DH) of 16.6% at 300 g TS/l, compared with a DH of 22.7% at 50 g TS/l after 6 h hydrolysis. The slower breakdown of intact whey proteins at high TS was quantified by gel-permeation HPLC. Reversed-phase (RP) HPLC of hydrolysate samples of equivalent DH (approximately 15%) generated at different TS levels indicated that certain hydrophobic peptide peaks were present at higher levels in hydrolysates generated at low TS. Sensory evaluation showed that hydrolysates with equivalent DH values were significantly (P < 0.0005) less bitter when generated at 300 g TS/l (mean bitterness score = 25.4%) than hydrolysates generated at 50 g TS/l (mean bitterness score = 39.9%). A specific hydrophobic peptide peak present at higher concentrations in hydrolysates generated at low TS was isolated and identified as beta-lactoglobulin f(43-57), a fragment having the physical and chemical characteristics of a bitter peptide.     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

酸性蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

利用酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备抗菌肽,以底物质量浓度、酶与底物比、pH值、酶解温度、酶解时间为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Box-Behnken方法进行三因素三水平的试验设计,以对大肠杆菌的抑菌率为响应值,应用响应面法对花椒籽蛋白制备抗菌肽工艺进行优化。其最佳工艺条件为：底物质量浓度30 mg/mL、酶与底物比3.0%、酶解pH 4.0、酶解温度51.2 ℃、酶解时间4.7 h,此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的水解度为9.05%,对大肠杆菌的抑菌率为56.98%。     

酶解法制备草鱼皮蛋白水解物增殖嗜热链球菌

嗜热链球菌被认为是一种多功能益生菌,将Neutrase 0.8L、Protease P “Amano”6、ProteAX、Alcalase 2.4LFG和风味中性蛋白酶5 种草鱼皮蛋白水解物作为培养嗜热链球菌的氮源,以水解物对嗜热链球菌的增殖效果为评价指标,选择最佳水解用酶,并利用正交试验优化酶解条件。结果表明,5 种微生物蛋白酶中,Neutrase 0.8L是水解草鱼皮蛋白的最佳用酶,最佳的酶解条件为：加酶量1%、酶解时间80 min、起始pH 6.5、料水比1∶2（m/V）。利用Neutrase 0.8L酶解法制备得到的富含胶原蛋白肽的草鱼皮蛋白水解物,是一种培养嗜热链球菌的理想氮源。     

响应面试验优化基于胶原特性酶解猪皮工艺及其抗氧化特性

以新鲜猪皮为原料,基于凝胶特性以羟脯氨酸含量为指标,对影响胃蛋白酶酶解过程的各个因素进行研究,通过Box-Behnken设计优化酶解工艺;以清除O2－•、•OH、H2O2能力和DNA损伤保护作用为指标研究酶解产物的抗氧化功能。结果表明：最佳酶解条件为加酶量0.25%、料液比1∶2（g/mL）、酶解时间1.65 h、酶解温度41.15 ℃,在此酶解条件下其产物清除O2－•的IC50值为20.19 mg/mL;清除•OH的IC50值为6.36 mg/mL;清除H2O2的IC50值为0.65 mg/mL;对DNA损伤保护作用的IC50值为1.86 mg/mL。