澳洲坚果抗菌肽分离纯化及其肽段鉴定与分析

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽（macadamia nut peptide-0,MNP-0）,以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201-C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析。结果表明：超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异。其中,澳洲坚果多肽组分MNP-4占比最高,为29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为10.01 mm与9.41 mm。大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP-4的技术条件为75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附3 h,动态洗脱体积60 mL。经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离纯化,获得3个澳洲坚果纯化多肽（macadamia nut purified peptide,MPP）组...     

黄粉虫抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

本研究以黄粉虫为试材,采用碱性蛋白酶酶解黄粉虫蛋白制备获得了抗菌肽,并对其进行分离纯化,比较了不同组分及纯化后抗菌肽的抑菌活性、热稳定性及分子量。结果表明:大孔吸附树脂对蛋白酶酶解液动态吸附并梯度洗脱后得到5个组分,抑菌试验表明无水乙醇洗脱组分的抑菌活性最强。采用制备型HPLC对无水乙醇洗脱组分进一步纯化,得到两个组分(H-1,H-2),其中组分H-2对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均表现出较强的抑菌活性,且其最小抑菌浓度(MIC)为0.512 mg/m L。热稳定性试验表明,H-2具有较好的热稳定性,121℃加热20 min仍能保持较高活性。液质联用(LC-MS)结果表明,H-2的分子量为756.82u。本研究为黄粉虫抗菌肽的高效分离和纯化提供了科学依据,为黄粉虫抗菌肽在食品防腐中的应用提供了基础数据。     

银杏种仁蛋白分离纯化及其抑菌活性

从银杏种仁中分离纯化具有抑菌活性的蛋白质,并分析其抑菌活性。结合抑菌活性分析,采用硫酸铵分级盐析、透析、纤维素DE-52阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤柱层析对银杏种仁蛋白（Ginkgo bilobaseed protein,GBSP）进行分离纯化,得到一种抑菌蛋白GBSPⅠ-A。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodiumdodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）检测结果显示,该蛋白呈单一条带,其分子质量约为42.80 kD;Superdex G-75柱层析结果显示GBSPⅠ-A呈单一对称峰,高效凝胶渗透色谱测定其分子质量为39.32 kD;该蛋白对肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、戴尔有孢圆酵母及黑曲霉的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）分别为20、20、20、12 mg/mL。     

DA201-C大孔吸附树脂对乳铁蛋白抗菌肽的分离纯化

该研究以吸附量、树脂动态吸附和不同乙醇浓度(体积分数)梯度洗脱为考察指标,优化了DA201-C大孔树脂对超滤处理后的乳铁蛋白抗菌肽溶液(分子质量<3 000 Da)分离纯化的工艺条件。静态吸附结果表明,当树脂吸附12 h后,吸附量为479.7 mg/g、吸附率为95.94%;对吸附饱和的树脂使用不同浓度的乙醇静态解吸,结果显示,75%(体积分数)乙醇解吸率达到95.35%。该研究还确定了最优吸附条件：NaCl浓度0.6 mol/L、上样流速1.5 mL/min和上样质量浓度20 mg/mL。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌率为指标,用不同浓度乙醇对乳铁蛋白抗菌肽进行梯度洗脱,结果表明,75%乙醇洗脱组分抑菌活性最强,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率分别达到80.95%和74.42%,与未纯化前相比提高了12.2%左右。对不同洗脱组分的氨基酸分析,结果显示,抗菌肽的疏水性及正电荷性越大,抗菌活性越强。     

牛骨胶原蛋白源抑菌肽的分离纯化及成分分析

牛骨胶原蛋白经中性蛋白酶水解,采用超滤技术和凝胶层析技术对酶解液进行分离纯化并测定对大肠杆菌的抑菌活性;借助反向高效液相色谱和基质辅助激光解析/离子化串联飞行时间质谱仪对抑菌肽进行分析.结果表明:经超滤分离后,分子质量小于10kD的组分对大肠杆菌的抑菌活性强;Sephadex G-25柱分离得到的峰Ⅰ和峰Ⅳ组分有较强的抑菌活性.经反向高效液相色谱和基质辅助激光解析/离子化串联飞行时间质谱仪分析,峰Ⅰ组分中含有的多肽种类多,分子质量集中在850～1550D之间.峰Ⅳ组分含有的多肽种类较少,分子质量集中在700～900D之间.     

核桃谷蛋白抗菌肽的分离纯化及抑菌稳定性分析

目的：以核桃粕谷蛋白为原料生产抗菌肽,研发一种新型抗生素的替代品。方法：通过菌酶协同固态发酵法（枯草芽孢杆菌和碱性蛋白酶协同）从核桃粕谷蛋白中制备抗菌肽,通过超滤、凝胶层析过滤、液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和分子对接对核桃粕谷蛋白抗菌肽（walnut glutelin antimicrobialpeptide,WGP）进行分离、纯化和筛选。以对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌性保持率为指标,研究抗菌肽的抑菌稳定性。结果：经超滤、凝胶层析分离后,WGP-ⅢA和WGP-ⅢC组分均具有较强抗菌活性;LC-MS/MS结合虚拟筛选,从2种组分中共鉴定得到6条多肽,分子对接筛选得到3个肽段,分别为WGP-ⅢA组分的LAEAYNIPDTIARRL和WGP-ⅢC组分的SHSVIYVIR、APQLLYIVK;分子对接结果显示,WGP-ⅢC组分的抑菌活性更强;抑菌稳定性分析表明,核桃谷蛋白抗菌肽在高温热处理、紫外线、不同pH值下和不同蛋白酶处理后均表现出较好的稳定性。结论：核桃粕谷蛋白抗菌肽在食品抑菌防腐...     

花椒籽蛋白抗菌肽的分离纯化研究北大核心CSCD

分别用胃蛋白酶、酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制得两种粗酶液（A肽和B肽）,以抑菌率为指标,依次采用超滤、Sephadex G-50凝胶层析进行分子截留和分离纯化,用Tricine-SDS-PAGE电泳测定其主要抗菌肽的相对分子质量。结果显示：两种酶解产物的粗酶液经超滤后,获得的相对分子质量为5~10 k D的组分（A-b肽和B-b肽）对大肠杆菌的抑菌率最高,分别为62.79%和66.94%;将A-b肽和B-b肽进行凝胶层析,分别分离得4个组分,其中A-b肽活性最大的是组分G4（A-b-Ⅳ肽）,对大肠杆菌的抑菌率为100%,B-b肽活性最大的是组分F3（B-b-Ⅲ肽）,对大肠杆菌的抑菌率为69.99%;A-b-Ⅳ肽和B-b-Ⅲ肽的相对分子质量分别为8.11 k D和10.80 k D。     

山西老陈醋类黑精的分离及其抑菌活性

为探究老陈醋类黑精的抑菌作用,采用超滤和尺寸排阻色谱法将山西老陈醋冻干粉（Shanxi aged vinegarextract,SAVE）分离成不同分子质量的水提物和类黑精部分,采用NaCl解离法将醋类黑精解离为类黑精骨架和小分子复合物两部分,用比浊法测定各组分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性。结果表明：SAVE中的类黑精具有显著的抑菌活力（P＜0.05）,类黑精对SAVE的抑菌性发挥了主要作用;类黑精中分子质量在3～5 kD的组分抑菌活力最强,其对3 种受试菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）均为5 mg/mL;类黑精组成中的小分子复合物比类黑精骨架部分具有更强的抑菌活性。     

大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷

以蓝莓果实为原料,采用大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷。分别比较6 种不同类型树脂 对蓝莓花色苷静态吸附-解吸效果,优化大孔树脂分离纯化蓝莓花色苷的工艺。结果表明：D101大孔树脂对蓝莓 花色苷的分离效果最佳,对花色苷的吸附属于多分子层吸附。在柱压力为1 MPa、温度25 ℃、上样液质量浓度为 0.073 mg/mL、洗脱剂乙醇体积分数为80%、流速5 mL/min条件下,经D101大孔树脂柱分离后,花色苷纯度从5.53% 增加到75.58%,提高了12.67 倍。采用Sephadex LH-20中压柱层析对蓝莓花色苷进一步分离纯化,主要得到1 种花 色苷组分,通过高效液相色谱和高效液相色谱-电喷雾质谱联用对蓝莓花色苷进行定性和定量分析,确定该组分为 矢车菊-3-O-葡萄糖苷,纯度达到90.88%。     

仿刺参纵肌多糖的纯化及体外抗氧化

目的：以仿刺参纵肌多糖为对象,探讨其纯化方法,并对其抗氧化活性进行研究。方法：仿刺参纵肌经木瓜蛋白酶水解、三氯乙酸去蛋白、Sephacryl S-400凝胶柱层析,得到一种多糖,进行红外光谱、分子质量和硫酸基含量测定,并进行硫酸酯化及体外抗氧化实验。结果：红外光谱初步显示所得纯化多糖具有酸性糖胺聚糖结构,分子质量约为676kD,硫酸基含量为10.98%,取代度为0.285;硫酸酯化后硫酸基含量为17.43%,取代度为0.360;纯化多糖及酯化多糖都具有抗氧化活性。结论：仿刺参纵肌多糖随着硫酸基含量及取代度的提高,抗氧化活性逐渐增强。     

光棘球海胆多肽的制备及其生物活性

光棘球海胆（Strongylocentrotus nudus）又称大连紫海胆,是我国主要的经济型海胆之一,其味道鲜美、营养丰富,具有较高的食用和药用价值。本实验以大连紫海胆为研究对象,采用酶解法制备海胆活性肽,并对其部分生物活性进行研究。使用木瓜蛋白酶对海胆黄进行水解,得到分子质量分布范围＜1、1～3、3～5、5～10 kD和＜10 kD的5 种海胆多肽组分。活性研究结果显示,在多肽终质量浓度为200 μg/mL时,不同分子质量分布的海胆多肽均可促淋巴细胞生长。在这一质量浓度下,除了小于1 kD的多肽,其他多肽均对人宫颈癌细胞（HeLa细胞）增殖有一定抑制作用,对腹腔巨噬细胞吞噬能力有一定促进作用。在多肽终质量浓度为50 μg/mL时,不同组分海胆多肽对叔丁基脂氢过氧化物所致的Chang肝细胞氧化损伤均可发挥直接和间接抗氧化保护作用。然而,不同分子质量分布的海胆多肽均可抑制补体的经典途径活性,且呈现明显剂量-效应关系。上述结果表明,海胆多肽对细胞免疫和体液免疫功能具有潜在的调节作用,其功能活性的多向性值得深入研究。     

超滤技术分离花生抗氧化肽及其性能研究

采用超滤技术分离花生抗氧化肽,研究超滤操作压力、温度、pH 值和滤液浓度对膜通量的影响,结果表明,滤液浓度2%,压力0.08MPa,温度25℃和时间20min 条件下,膜通量相对较高为45.18ml/m2·min,分子量3kD 以下的花生肽抗氧化活性较高。利用大豆油研究花生抗氧化肽的活性,当添加0.10% 3kD 花生抗氧化活性肽到大豆油中,存放7d 其POV 值为9.15meq/kg,抗氧化活性较好。     

猪肝乙醇脱氢酶的分离纯化及部分性质

新鲜猪肝经匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）。纯化结果显示：该酶比活力为1 622.33 U/mg,回收率为29.05%,纯化倍数为34.58;该酶分子质量约为171.79 kD,亚基分子质量约为43.68 kD。ADH酶学性质研究显示：最适反应温度和pH值分别为45 ℃和10.0;在25～45 ℃及pH 7.5～9.0范围内稳定性较好;最适条件下测得该酶对乙醇的Km值为19 mmol/L;正丁醇、氯仿、异丙醇、十二烷基硫酸钠、草酸、Zn2＋、Cu2＋、Ag＋对该酶的抑制作用最强,Mg2＋对该酶有激活作用,EDTA对该酶有双重作用。     

单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

辐照对有机弱酸类防腐剂抑菌性的影响

为研究辐照对有机弱酸类防腐剂抑菌性的影响,实验以革兰氏阴性（G－）菌肠炎沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌和革兰氏阳性（G+）菌单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肠膜明串珠菌为目标菌株,采用酶标比浊法测定山梨酸钾、双乙酸钠、丙酸钠、丙酸钙和脱氢醋酸钠在固态粉末和溶液状态下,经0、5、10、15 kGy的60Co γ射线辐照后抑菌性的变化,同时确立酶标比浊法的检测波长和防腐剂质量浓度。结果表明：5 kGy以下的低剂量辐照对防腐剂的抑菌性基本不产生影响,10～15 kGy辐照对防腐剂的抑菌性产生影响,能使多数防腐剂的抑菌性增加,且辐照剂量越高影响越大;辐照对防腐剂溶液抑菌性的影响比固态防腐剂粉末大;G+菌对辐照防腐剂抑菌性的变化比G－菌更敏感。     

韭菜β-木糖苷酶的分离纯化与部分性质研究

新鲜韭菜经匀浆、缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、羧甲基离子交换层析(carboxymethyl-sephar ose,CMSepharose)再通过Su perdex-200凝胶过滤层析,从而获得电泳纯的β-木糖苷酶。该酶的比活力达到18.25 U/mg,纯化倍数为12.59,回收率为1.83%,分子质量为123.02 k D,亚基分子质量为61.51 k D。通过对β-木糖苷酶的酶学性质研究得到最适温度为65℃,最适p H值为4。该酶在25~55℃及p H 3.0~5.0的范围内有较好的稳定性;在最适条件下测得其米氏常数(K_m)值为0.28 mmol/L;甲醇、乙醇、异丙醇及十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)和Ag+对该酶具有抑制作用,Mn~(2+)和Co~(2+)对该酶具有一定的激活作用。     

鸭肝乳酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸盐缓冲液抽提,乙醇和硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析及Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的乳酸脱氢酶。该酶经纯化后酶比活力达到668.82 U/mg,酶活回收率为25.79%,纯化倍数为185.78。该酶的全分子质量约为170.93 kD,亚基分子质量为44.72 kD;最适反应温度为45 ℃,最适pH值为7.4,在25～45 ℃及pH 5～10的范围内稳定性较好;在45 ℃、pH 7.4条件下,测得该酶对底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotid,NADH）的Km值为3.407 μmol/L,对丙酮酸钠的Km值为8.431 μmol/L;草酸、十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）、Cu2＋、Ag＋对该酶的抑制作用最强,Co2＋、K＋对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用,而高浓度时具有抑制酶活性的作用。     

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品（Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG）,经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 kD和28.3 kD;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内（1～10 mg/mL）存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。