柿提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用

对经不同极性提取剂处理的柿子提取物进行抑菌活性分析、耐药性实验,并对其有效成分进行了初步鉴定。结果表明,柿子皮、蒂的抑菌活性高于果肉;脂溶性提取物具有良好的抗菌效果,其中正丁醇,乙酸乙酯部位有较好的抗菌效果;柿浆石油醚提液抑制枯草芽孢杆菌表现出了耐药性,但耐药性并不稳定。有效成分鉴定揭示柿子提取物中含有黄酮类、三萜类和可水解单宁。      

柿提取物对枯草芽孢杆菌的抑制作用

对经不同极性提取剂处理的柿子提取物进行抑菌活性分析、耐药性实验,并对其有效成分进行了初步鉴定。结果表明,柿子皮、蒂的抑菌活性高于果肉;脂溶性提取物具有良好的抗菌效果,其中正丁醇,乙酸乙酯部位有较好的抗菌效果;柿浆石油醚提液抑制枯草芽孢杆菌表现出了耐药性,但耐药性并不稳定。有效成分鉴定揭示柿子提取物中含有黄酮类、三萜类和可水解单宁。     

枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌的抑制作用

为探索枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌的抑菌效果及作用机理,利用倍半稀释法确定其对大肠杆菌的最小抑菌浓度,通过研究枯草芽孢杆菌发酵提取物对大肠杆菌生长曲线、细胞膜通透性以及细胞超微结构的影响,探讨提取物对大肠杆菌的抑制作用机理,同时对该提取物的化合物类型进行了初步分析。结果表明,该提取物对大肠杆菌具有明显的抑制作用,其最小抑菌浓度为0.614 mg·mL^-1,在大肠杆菌生长的延滞期和对数期加入该提取物,比在稳定期加入能够显现出更好的抑菌效果。经提取物作用后的细胞表面粗糙,边缘模糊,细胞膜破裂,表明该提取物能够增加大肠杆菌细胞膜的通透性。化合物分析显示,提取物中抑菌成分主要是多烯类化合物和脂肽类化合物。     

黑胡椒提取物对枯草芽孢杆菌生理代谢的影响

本文以枯草芽孢杆菌作为供试菌,分别研究了经4个不同有机相的胡椒提取物处理后的枯草芽孢杆菌细胞内的丙酮酸含量以及转氨酶活性的变化,探讨了胡椒提取物的抑菌机理。结果表明,处理后的枯草芽孢杆菌菌体内的丙酮酸出现积累,其中以乙酸乙酯相的丙酮酸浓度最高,为0.527 g/L;此外,胞外谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力增强,最高酶活力分别为28.62 Kar U和49.29 Kar U。这说明了胡椒提取物能破坏枯草芽孢杆菌的正常生理代谢,从而有效地抑制枯草芽孢杆菌的生长。      

酿酒黄水对枯草芽孢杆菌的抑菌机制研究

本论文以枯草芽孢杆菌为例,研究白酒发酵副产物黄水的抑菌机制。通过描绘细菌生长曲线,扫描电镜观察菌体表面形态,电导率实验研究实验菌细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳观察菌内蛋白变化,DAPI荧光染色观察细菌核酸含量变化进行研究。结果证明:酿酒黄水处理的枯草芽孢杆菌生长曲线未出现明显对数生长,扫描电镜观察菌体表面粗糙,电导率实验证明酿酒黄水不能改变细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳分析表明酿酒黄水可抑制菌内蛋白质合成,DAPI荧光染色结果表明酿酒黄水作用9 h后,枯草芽孢杆菌总DNA量减少30.39%,作用3 h后,RNA总量减少39.64%。因此,酿酒黄水抑菌机制主要通过抑制枯草芽孢杆菌菌体内蛋白质和核酸的合成实现的。      

枯草芽孢杆菌发酵豆渣制备多肽及其活性研究

以纤维素酶酶解后的豆渣为原料,利用枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液态发酵豆渣制备大豆多肽,并以大豆多肽得率为响应值,通过单因素试验及响应面法对其制备工艺进行优化,并测定其抗氧化活性与抑菌活性。结果表明,枯草芽孢杆菌液态发酵豆渣制备大豆多肽的最优工艺条件为：接种量3%、发酵温度37 ℃、发酵时间60 h。在此优化条件下,大豆多肽得率为88.12%;其对1,1二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力的半效应浓度（EC50）值分别为（2.36±0.05） mg/mL、（2.97±0.03） mg/mL;多肽质量浓度为25 mg/mL时,大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）抑菌圈直径分别为（27.65±0.32） mm、（23.18±0.14） mm。结果表明,大豆多肽具有一定的抗氧化及抑菌活性。     

枯草芽孢杆菌细菌素A32的抑菌机理研究

将酸沉淀法提取的枯草芽孢杆菌细菌素A32作用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,利用牛津杯法、分光光度法、扫描电镜技术和电导率法、SDS-PAGE电泳法探讨细菌素A32的抑菌活性和抑菌机理。结果显示,细菌素A32对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑菌性,最小抑菌质量浓度为1.25 mg/mL;对指示菌的生长曲线、细胞形态结构、细胞膜渗透性、细胞膜通透性、细胞膜和细胞壁完整性、细胞中蛋白质的合成均有影响;且随着细菌素A32质量浓度的增大,对指示菌的影响也逐渐增大。以上现象表明,细菌素A32的抑菌性主要是通过破坏革兰氏阴、阳性菌壁膜的通透性和完整性,使内容物外漏,进而影响菌体代谢和生长。孔道形成理论是细菌素A32对革兰氏阴、阳性菌的作用机理。研究结果为细菌素A32作为绿色生物防腐剂的开发应用奠定了理论基础。     

10-HDA对枯草芽孢杆菌的抑菌机理研究

为了确定与分析10-羟基-2-癸烯酸（10-HDA）的抑菌性能及其作用机制,采用牛津杯法,倍半稀释法进行抑菌性能测定实验。以枯草芽孢杆菌为供试菌,采用凝胶阻滞实验及原子力显微镜观察10-HDA与菌体DNA结合情况,并采用DNA琼脂糖凝胶电泳观察10-HDA作用后菌体DNA含量的变化,以及10-HDA对菌体基因组PCR的影响。结果表明,10-HDA对多种病原细菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性,且抑菌效果随着10-HDA浓度的增加显著提高。其中,对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.62 mg/mL。DNA琼脂糖凝胶电泳和原子力显微镜结果显示,当10-HDA浓度达到0.62 mg/mL时,菌体中基因组DNA的合成量明显减少,而且10-HDA与细菌基因组DNA紧密结合。对基因组DNA的PCR影响实验进一步证明,当PCR体系中10-HDA的浓度达到1.0 mg/mL时,DNA的合成被完全阻碍。通过实验,我们得出10-HDA通过与细菌基因组DNA的结合,进一步阻碍DNA的合成,最终达到抑菌效果。     

枯草芽孢杆菌SH7 抑菌蛋白的分离纯化及对烟草青枯病菌的抑制作用

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow 离子交换层析、Sephadex G-75 凝胶层析及聚丙烯凝胶电泳,从 枯草芽孢杆菌SH7 代谢物中分离纯化出一种相对分子质量为33.6 kD 的蛋白,该活性物质具有淀粉酶活力,对烟草青枯病菌 具有一定的抑制作用。     

芽孢杆菌LWM1的分离鉴定及其对蜡样芽孢杆菌的抑制作用

从土壤样品中分离出10株芽孢杆菌（Bacillus spp.）,以蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）为指示菌株,采用牛津杯扩散法筛选出一株具有较强抑菌活性的菌株LWM1。综合形态学、生理生化试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及16S rDNA基因序列同源性分析,菌株LWM1被初步鉴定为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,并研究了其在马铃薯葡萄糖水（PDW）和营养肉汤培养基（NB）中发酵上清液对蜡样芽孢杆菌的抑制效果。结果表明,PDW培养基更有利于菌株LWM1生长和抑菌物质产生。因此,可利用PDW培养基为主要底物大规模发酵制备菌株LWM1的抑菌物质。     

枯草芽孢杆菌功能及相关机制研究进展

本研究首先从东北传统豆酱中分离筛选出一株具有良好抑菌作用的菌株,结合16S rDNA与持家基因gyrA测序分析等方法对菌株鉴定。其次,利用乙酸乙酯萃取法对其所产细菌素进行粗提,使用葡聚糖凝胶Sephadex-G50和高效液相色谱（HPLC）技术进一步纯化,结合SDS-PAGE和液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术进行鉴定。最后通过最小浓度实验与生长抑制曲线分析了细菌素对金黄色葡萄球菌的抑制效果,并探究了细菌素对热、酸碱和蛋白酶的稳定性。结果表明,枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株S1-2对金黄色葡萄球菌和单增李斯特氏菌抑菌效果最好,该菌株产生的细菌素经分离纯化鉴定为subtilosin A,分子量约为3 kDa,对金黄色葡萄球菌和单增李斯特氏菌有明显的抑制效果,对金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度为0.625 mg/mL。该细菌素在20~80 ℃抑菌活性稳定,且在100~120 ℃仍表现出抑菌活性;对酸碱耐受性较高,经过pH为1、10的强酸强碱处理后仍表现出抑菌活性,在pH6.0~8.0的范围内表现出最高的抑菌活性;能够被蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶水解。综上,枯草芽孢杆菌S1-2与其产生的细菌素subtilosin A在食品生物防腐中具有较强的研究和应用潜力。

     

枯草芽孢杆菌SC-2产直链肽类代谢产物的分离纯化

为了研究枯草芽孢杆菌SC-2发酵液主要抗菌活性物质,以临床致病菌株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、白色念珠菌等为指示菌,采用打孔法检测抑菌活性,对SC-2发酵液抑菌粗提物进行分离纯化。抑菌粗提物经硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱法分离制备得到抑菌单体化合物GNH-2。该物质表现出广谱的抗菌活性,在质量浓度为1 mg/mL时对白色念珠菌、大肠杆菌和大肠埃希氏菌抑菌圈直径分别为34±0.30 mm、18±0.15 mm、19±0.10 mm,对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和痤疮丙酸杆菌的抑菌活性分别为28±0.10 mm、30±0.10 mm、56±0.35 mm,优于同等浓度的万古霉素。通过能与茚三酮直接显色等实验结果,初步推断GNH-2属于直链的肽类化合物,为后续结构确证和新药开发提供依据。     

不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢动态生长的影响

目的 研究不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)芽孢生长的影响及作用阶段。方法 本研究选取枯草芽孢杆菌芽孢为研究对象,考查了茶多酚、Nisin、亚硝酸盐、双乙酸钠、乙二胺四乙酸盐5种抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢存活量、萌发特性、内容物泄漏量、结构变化的影响。结果 5种抑菌剂均能降低枯草芽孢杆菌芽孢的存活率,且不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢生长的主要抑制阶段存在差异。其中乙二胺四乙酸盐、茶多酚在芽孢萌发阶段的作用效果相对较为显著,与芽孢悬浊液共孵育60 min后吸光度分别下降至90.61%、90.74%, 2,6-吡啶二羧酸释放量分别为21.18%、21.92%,孵育12 h后仍有部分芽孢保持“相亮”状态。亚硝酸盐、双乙酸钠、Nisin主要在萌发后发挥抑制作用,其中亚硝酸盐、双乙酸钠能使芽孢在后期生长过程中内膜通透性增大,并导致芽孢核内物质发生泄漏。拉曼光谱显示茶多酚、亚硝酸盐能够使得芽孢生长过程中蛋白质、脂质等成分及其结构发生变化,使萌发后的芽孢无法继续生长形成营养体。结论 乙二胺四乙酸盐、茶多酚在芽孢萌发阶段发挥主要作用,亚硝酸盐、双乙酸钠、Nisin在萌发后及营养...     

金属离子浓度对枯草芽孢杆菌芽孢率的影响

通过摇甁单因素试验,研究了金属离子浓度对枯草杆菌BS-MM03菌株发酵生产的芽孢率的影响,发现Mg2 离子对其影响最为显著,其次为Mn2 离子.利用正交试验确定其最适产芽孢的金属离子浓度组合为:Mg2 0.030%,Mn2 0.015%、Ca2 0.02%、Fe2 0.004%.     

枯草芽孢杆菌AS1.398基因文库的建立

用SDS(十二烷基硫酸钠)和溶菌酶裂解制革脱毛用酶制剂生产菌—枯草芽孢杆菌AS1.398菌体,提取染色体ONA,并用限制性内切酶Sau3AI对纯化后的染色体DNA进行部分酶切。将所得片段插入大肠杆菌质粒P~(RR_(322))的BamHI位点,经T_4DNA连接酶连接后转化Ecoli DH5α菌株,所获得转化子经Amp~r(抗氨苄青霉素)与T_c~r(抗四环素)抗性平板检测,计算出重组率为82％。用所获得的全部转化子建成枯草芽孢杆菌AS1.398的基因文库,以为蛋白酶基因。以及其它实用性酶的基因筛选所用。     

超声协同诱导剂对枯草芽孢杆菌芽孢致死的作用

为延长食品货架期,实现中温条件下的芽孢杀灭,以枯草芽孢杆菌为对象,研究了超声处理、热处理和不 同种类诱导剂协同作用对枯草芽孢杆菌芽孢致死的最适条件。结果表明：采用温度60 ℃、功率600 W、频率25 kHz 的超声方式,辅以50 mmol/L L-丙氨酸和6 mmol/L肌苷共同作用,可以使芽孢萌发率达到98.23%。进一步改变超 声处理模式,同等条件下,采用900、600、300、100 W的功率递减超声处理,能够有效提高芽孢萌发时的处理效 率,实现体系内芽孢的大量萌发和杀灭,保证食品安全和品质。     

紫外线对枯草芽孢杆菌的诱变效应研究

枯草芽孢杆菌是一种无毒副作用、无残留的绿色饲料添加剂,研究表明,可以利用枯草芽孢杆菌进行生物防治或生产微生物杀菌剂以替代剧毒化学药品。利用紫外线对枯草芽孢杆菌进行诱变,通过实验紫外线处理150s时致死率几乎为100%,120s时诱变效果最好,对大肠杆菌的抑菌效果最明显。     

产淀粉酶枯草芽孢杆菌的16SrRNA测序鉴定

对分离得到的D53、D56菌株经PCR扩增后,测定其16S rRNA基因序列,与基因库中基因序列进行同源性比较可知,D53、D56菌株与枯草芽孢杆菌的相似性达99%。结合其形态观察及生理生化实验综合分析,得出2株菌为枯草芽孢杆菌,并在Genebank中申请登陆号分别为DQ923482和DQ923483。对产淀粉酶透明圈的测定结果表明,D53、D56的产酶能力达到6.5 U/mL和8.2U/mL。     

枯草芽孢杆菌KC-WQ发酵液中抗菌脂肽的分离鉴定及发酵条件优化

本文研究了一株枯草芽孢杆菌KC-WQ的胞外分泌物的抑菌效果及功效成分。实验发现枯草芽孢杆菌KC-WQ对大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门氏菌（Salmonella enterica subsp. enterica）和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）均有明显的抑菌效果,其中对沙门氏菌的抑制效果最为显著。在此基础上,采用酸沉淀法分离抗菌成分,通过薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析结构发现,该菌株分泌抗菌物质为脂肽类,分子量分布在1030.5~1491.4 Da之间,主要由伊枯草菌素（Iturin）、表面活性素（Surfactin）和芬荠素（Fengycin）组成,最小抑菌浓度为0.8 mg/mL。该脂肽成分经热处理（105 ℃,20 min）后,仍保持良好的抗菌效果。采用响应面法对KC-WQ的发酵条件进行优化,得到最佳发酵条件为:初始pH为6.0,发酵温度为36 ℃,摇床转速为208 r/min,预测粗产物产量为1.311 g/L,后经实验验证,实际产量可达1.236 g/L。上述结果表明,枯草芽孢杆菌KC-WQ具有良好的抗菌性能和加工性能,可作为抑菌成分,在食品保藏和抗菌包装材料开发中具有应用前景。