黄粉虫酶解产物的制备及活性研究

为获得具有体外抗氧化和降血脂活性的黄粉虫酶解产物,文章以黄粉虫脱脂粉为原料,利用响应面分析法优化酶解工艺,并对其活性组成和体外活性进行研究。结果表明,在温度60℃、液料比30 mL/g、加酶量4800 U/g、pH10、酶解3 h条件下,酶解产物DPPH自由基消除率最高。该酶解产物中含有蛋白类物质738.17 mg/g、多糖59.42 mg/g、还原糖31.01 mg/mL、黄酮6.93 mg/g。酶解产物浓度为8 mg/mL时,对DPPH自由基、超氧阴离子、羟基自由基消除率最高,分别为76.53%、22.08%和48.73%;IC₅₀值分别为2.13、27.50 mg/mL和9.61 mg/mL,对甘氨胆酸钠结合量最大为0.055μmol/mg。研究表明黄粉虫酶解产物具有一定的体外抗氧化活性和结合甘氨胆酸钠能力,为黄粉虫酶解物在降血脂方面的应用提供了理论依据。     

贻贝酶解物体外抗氧化试验研究

为了鉴定世界食品产品中受到很高评价的海洋生物的抗氧化性,研究了贻贝的抗氧化性。通过测定酶解物的抗氧化性,从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶3种酶中,筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解贻贝制备具有较高抗氧化性酶解物的理想水解酶,用正交试验L9(34)对2种酶的水解条件进行了优化。结果表明,木瓜蛋白酶在温度60℃、酶解时间15min、pH7.5、酶质量分数1.00%的水解条件下,酶解物的抗氧化性最好;胰蛋白酶在温度50℃、酶解时间60min、pH8.5、酶质量分数0.75%的水解条件下,酶解物的抗氧化效果最佳。     

黄粉虫幼虫粉酶解及体外抗氧化性研究

主要研究了Alcalase蛋白酶水解脱脂黄粉虫幼虫粉的工艺,并对水解产物的体外抗氧化能力进行测定.在单因素基础上以还原力为指标设计正交试验得到水解最佳条件为:温度60℃,pH值8.5,加酶量150μL,反应时间100 min.抗氧化试验结果表明,脱脂黄粉虫幼虫粉水解液清除1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基的半抑制率(IC_(50))分别为0.45 mg/mL和4.1 mg/mL,分别是VC的IC_(50)值的112.5倍和19.5倍,还原能力是VC的1/100.将水解前后的脱脂黄粉虫幼虫粉溶液进行高效毛细管电泳(HPCE)测定,测定结果表明,经Alcalase蛋白酶水解后,溶液中可溶性组分增多.     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。     

银鲳酶解物抗氧化活性研究

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶对银鲳蛋白进行酶解以制备蛋白酶解物,以羟基自由基清除活性为指标确定银鲳最佳水解酶。结果显示,碱性蛋白酶的水解物抗氧化活性最强。实验对碱性蛋白酶水解银鲳的酶解条件(时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交实验设计,并对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试。结果表明,银鲳蛋白碱性蛋白酶水解物对DPPH自由基和羟基自由基具有清除作用,其自由基清除效果呈现剂量依赖性,而且银鲳蛋白水解物还具有明显还原能力。所有这些体外抗氧化数据说明,银鲳蛋白水解物有明显的抗氧化效力。      

鸡肉酶解物提高小鼠的抗疲劳及抗氧化活性

论文研究了鸡肉酶解物EP1和EP2的抗疲劳及抗氧化效果。以生理盐水及鸡肉匀浆[蛋白质剂量200 mg/(kg·bw·d)]作为对照组,以40 mg/(kg·bw·d)和200 mg/(kg·bw·d)两个剂量的鸡肉酶解物EP1和EP2对实验小鼠进行灌胃实验28 d后,测定小鼠的力竭游泳时间、游泳30 min后的血清尿素氮含量、血清乳酸含量及肝糖原含量,并分析了小鼠血清中SOD(超氧化物歧化酶)、GSH-Px.(谷胱甘肽过氧化物酶)和CAT(过氧化氢酶)等主要抗氧化酶的活性。结果显示,鸡肉酶解物能够有效延长小鼠的力竭游泳时间(SC组为766 s,而H-EP1组可达到2307 s);显著降低游泳30 min后小鼠的血清乳酸含量(SC组为10.06 mmol/L,H-EP1组和H-EP2均为6.66 mmol/L)及血清尿素氮含量(SC组为19.72 mmol/L,H-EP1组仅为13.34 mmol/L)),提高肝糖原含量(SC组为5.11 mg/g,H-EP2组可达到8.35 mg/g);显著提高游泳30 min后小鼠的血清中SOD(从89.08 U/mL提高到160.13 U/mL)、CAT(从0.25 U/mL U/m L提高到0.29 U/mL)和GSH-Px.(从257.36 U/mL提高到597.08 U/mL)等抗氧化酶的活性。研究结果提示,鸡肉酶解物EP1和EP2能够显著延长实验小鼠的力竭游泳时间,减少实验小鼠激烈运动时肝糖原的消耗和乳酸的产生与沉积,促进实验小鼠体内蛋白质的代谢及有效清除血清尿素氮,提高实验小鼠机体的血清SOD、CAT及GSH-Px.等抗氧化酶的活性,增强机体清除自由基的能力,改善小鼠的运动状况,确保小鼠在激烈运动状态下机体处于有氧运动模式,从而降低激烈运动后机体的疲劳程度,具有显著的抗疲劳和抗氧化效果。     

鳙鱼酶解物体外抗氧化的研究

利用碱性蛋白酶Alcalase对鳙鱼进行控制酶解,制备出具有清除自由基活性的酶解物并比较其还原能力和对脂肪氧合酶活性的影响,并考察其对红细胞溶血、肝线粒体肿胀的影响,结合不同处理后肝脑组织中MDA浓度的测定以对鳙鱼酶解物在模拟体系中的抗氧化活性进行综合评价。结果表明三种鳙鱼酶解物的肽提取率均在70%以上且主要由寡肽(含5～6个氨基酸残基)组成,三种酶解物均具有一定的还原能力,在较高浓度时能抑制脂肪氧合酶的活性并可在体外抑制因H2O2引发的新西兰家兔红细胞溶血和由FeSO4和Vc诱导的肝线粒体肿胀,同时降低肝脑组织中MDA的产生。说明鳙鱼酶解物在一定浓度范围内具有抗氧化作用,比较三种酶解物的抗氧化特性可知酶解物C具有较强的综合抗氧化能力,可作为后续研究的材料。     

鳄鱼皮酶解产物功能特性及抗氧化活性

为了解鳄鱼皮酶解产物功能特性和抗氧化活性,采用2种商业蛋白酶(木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶)在各自最适反应条件下分别酶解鳄鱼皮,研究水解度(DH)、酶种类及pH值对酶解产物功能特性及抗氧化活性的影响.结果显示:随着酶解时间延长,鳄鱼皮水解度逐渐增加,鳄鱼皮在碱性蛋白酶酶解作用下水解度较高,水解4h时可达12％;木瓜蛋白酶酶解产物与碱性蛋白酶酶解产物的溶解性差异不显著(P＞0.05).相同水解度下,碱性蛋白酶酶解产物的热稳定性在pH4时优于木瓜蛋白酶酶解产物.酶解时间在1h之内,木瓜蛋白酶酶解物亚铁离子螯合力明显增强;随着时间延长,酶解产物亚铁离子螯合能力变化不显著(P＞0.05).酶解3h后碱性蛋白酶酶解产物亚铁离子螯合能力高于木瓜蛋白酶酶解产物,但木瓜蛋白酶酶解产物具有较强的清除DPPH自由基能力.综上表明,碱性蛋白酶水解作用的鳄鱼皮水解度较高,其酶解产物乳化活性和热稳定性优于木瓜蛋白酶酶解产物;鳄鱼皮酶解产物抗氧化能力较强,有较高的开发利用价值.     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

鲶鱼骨酶解物抗氧化活性及其稳定性研究

探讨鲶鱼骨酶解物体外抗氧化活性及其抗氧化稳定性。测定不同浓度酶解物对羟自由基(.OH)、H2O2和超氧阴离子自由基(O2-)的清除效果,观察其抗氧化活性及其剂量效应关系;将酶解物溶液进行不同pH、温度、微波以及紫外光照射处理,观察其抗氧化活性的变化。结果表明:在试验浓度下,酶解物对.OH、H2O2和O2-均有较强的清除能力,其清除作用随着酶解物浓度的增加而增强,清除作用的IC50分别为6.47、15.96、12.50 mg/mL;在pH2~9范围内、80℃~121℃加热条件下,以及20 min~120 min紫外线照射和0 min~5 min微波处理时,酶解物的总体抗氧化活性变化不大。鲶鱼骨酶解物具有较强的抗氧化作用且抗氧化活性基本稳定。     

鸡肉酶解物对HepG2细胞抗氧化活性及小鼠血清抗氧化酶活性的影响

为了研究鸡肉酶解物SSPH(Salt Soluble Protein Hydrolysate,SSPH)及MFH(Muscle Fibrin Hydrolysate,MFH)的抗氧化作用,实验测定了鸡肉酶解物的HepG2细胞内活性氧的清除能力,以及小鼠胃饲28 d实验后的体内抗氧化酶活性。SSPH和MFH是特定工艺条件下提取鸡胸肉的盐溶蛋白及肌纤蛋白,经酶解制备的、95%以上分子量小于1000 u的酶解物。研究结果显示,在HepG2细胞培养中,鸡肉酶解物SSPH和MFH的添加浓度为500 μg/mL时,HepG2细胞的成活率为84.50%和89.87%,鸡肉酶解物对HepG2细胞均不存在毒性。细胞抗氧化实验中,实验组的HepG2细胞内荧光强度均显著降低于(P<0.05)空白对照组,并随鸡肉酶解物浓度增加而荧光强度降低;当SSPH及MFH的浓度为150 μg/mL时,细胞活性氧清除率,即抗氧化活性(Cellular Antioxidant Activity,CAA)值分别达到43.17%和46.64%,表明二者均具有良好的HepG2细胞活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)清除能力,且呈良好的剂量-效应关系。小鼠实验以生理盐水及鸡肉匀浆为对照组,经28 d胃饲,30 min游泳后取血清分析血清SOD、CAT及GSH-Px抗氧化酶活性,结果显示,除胃饲鸡肉酶解物SSPH剂量为40 mg/kg·bw·d组的CAT酶活性与实验对照组间差异不显著外,胃饲SSPH及MFH剂量为40 mg/kg·bw·d 和200 mg/kg·bw·d的实验组小鼠,血清SOD、CAT及GSH-Px等抗氧化酶活性均极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)高于实验对照组,表明鸡肉酶解物SSPH及MFH能够有效提高实验小鼠体内抗氧化酶活性。     

海参酶解液的体外抗氧化活性研究

分别选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶水解海参体壁,以DPPH·清除能力、O2-·清除能力、Fe2+螯合力和还原力为抗氧化指标,研究不同海参酶解液体外抗氧化活性的差异。结果表明,随着水解时间的增加,5种酶解液基本上均表现出酶解液的抗氧化能力先增加后下降的趋势。菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶酶解液的DPPH·清除能力和O2-·清除能力较强;胰蛋白酶酶解液的Fe2+螯合能力最强;而木瓜蛋白酶酶解液的还原力最大。从清除自由基角度上,菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶可作为开发海参抗氧化肽的优选工具酶。      

黄海海燕体壁酶解物抗氧化活性研究

分别用胃蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶在各自最适条件下酶解黄海海燕体壁制得酶解物,并应用电子自旋共振波谱技术检测酶解物对DPPH和羟基自由基的抗氧化活性。结果表明,黄海海燕体壁酶解物对DPPH和羟基自由基的清除能力随浓度升高而增强;酶解物浓度在20 mg/mL时,胃蛋白酶组、中性蛋白酶组和胰蛋白酶组对DPPH自由基的清除率分别为(52.25±0.14)%,(68.30±0.37)%,(46.27±0.47)%,对羟基自由基的清除率分别为(72.61±0.17)%,(81.82±0.79)%,(56.77±0.28)%;酶解物具有较明显的抗氧化能力。     

贻贝蛋白的酶解及其酶解物的抗氧化活性研究

比较了6种不同的蛋白酶(胰蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶)对贻贝粗蛋白的酶解效果,确定碱性蛋白酶为最适用酶。用此酶制备不同水解度(DH 6%、DH 11.5%、DH16%、DH 20%、DH 25%)的贻贝蛋白酶解物,考察不同DH酶解产物的抗氧化活性。试验结果表明:贻贝酶解产物具有较强的抗氧化活性,并呈一定的量效关系;当DH为25%时,贻贝酶解物对DPPH自由基、超氧自由基、羟基自由基的清除率最高,分别为77.4%、75.2%、43.4%,同时具有最强的金属螯合率(64.7%);而DH为16%时,酶解物对亚油酸的过氧化抑制作用较还原型谷胱甘肽强,达65.6%。DH对酶解产物的抗氧化活性有一定的影响,但在不同的抗氧化体系中,影响趋势不一致。     

林蛙油及其酶解液抗氧化活性的研究

通过小鼠林蛙油喂养实验可以发现,林蛙油具有明显的提高超氧化物岐化酶、过氧化氢酶、谷光甘肽酶的活性,且1%酶解液可明显减少鼠体内的MDA、NO水平。所以,林蛙油有抗氧化作用。     

罗非鱼皮明胶酶解物及其模拟消化产物的抗氧化活性

以罗非鱼皮为原料提取罗非鱼皮明胶,选用风味蛋白酶和胰蛋白酶制备罗非鱼皮明胶酶解物,采用ABTS自由基、DPPH自由基、羟基自由基及亚油酸过氧化体系,初步评价罗非鱼皮明胶酶解物的抗氧化活性,再通过模拟体外胃肠道消化实验,结合分子质量分布测定,进一步考察罗非鱼皮明胶酶解物的抗氧化活性。结果显示,在酶解过程中,风味蛋白酶及胰蛋白酶酶解的水解度逐渐升高,在3 h时达到最高,分别达到5.8%和25.36%。在酶解60 min时其TCA可溶性肽得率最高,风味蛋白酶、胰蛋白酶酶解物分别达56.82%和54.44%。通过比较半抑制浓度（IC₅0）,确定了酶解60 min时风味蛋白酶酶解物的清除DPPH自由基及抑制亚油酸过氧化能力较胰蛋白酶酶解物强。模拟体外胃肠道消化后,酶解物羟基自由基清除活性均显著提高（p<0.05）,亚油酸脂质过氧化活性明显降低,消化前后样品分子量分布范围均主要集中于3000⁵000 Da,消化后风味蛋白酶及胰蛋白酶酶解物3000⁵000 Da组分的含量分别提高了45%及13%。以上研究结果表明,罗非鱼皮明胶酶解后制备的明胶水解物具有一定的抗氧化能力,具有潜在的开发价值。      

酶解麦麸产品抗氧化活性研究

采用黑曲霉发酵制备阿魏酸酯酶和阿拉伯木聚糖酶混合酶制剂，利用该酶制剂降解麦麸获得麦麸酶解产物（E—HWB）；通过测定它的DPPH清除能力、还原能力和对亚油酸过氧化的抑制作用，探讨了其抗氧化能力。结果表明，EHWB的抗氧化活性强于Vc及阿魏酸，是一种天然、无毒、高效的天然抗氧化剂。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

2种鸡肉蛋白源酶解产物抗氧化活性研究

以鸡肉盐溶蛋白和肌纤蛋白为原料分别制备的酶解物EP1和EP2,对其分子量分布、游离氨基酸,以及还原力、·OH自由基、O_2~-·自由基和DPPH·自由基清除力等抗氧化活性进行分析。研究结果显示EP1和EP2分子量均在5000以下,其分子量介于180～1000u的组分分别为66.32%和54.74%,寡肽含量达57.79%和47.70%。游离氨基酸分析结果显示除20种常规氨基酸,EP1和EP2还含有多种非常规氨基酸,如γ-氨基丁酸、牛磺酸、肌肽、磷酸丝氨酸等;另外,碱性氨基酸(26.01%和29.43%)和疏水氨基酸(38.00%和32.88%)含量均较高。EP1和EP2均具有较强的总还原力、·OH自由基清除能力、O_2~-·自由基清除力和DPPH·自由基清除能力,也就是同时具有供电子体和供氢体清除自由基的能力。EP1和EP2的高抗氧化活性是由寡肽及氨基酸共同作用的结果。     

罗非鱼肉蛋白酶解液的抗氧化活性

采用胰蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、罗非鱼胃蛋白酶和罗非鱼肠蛋白酶分别酶解罗非鱼肉蛋白,研究并比较不同酶对罗非鱼肉蛋白的酶解效果及产物的抗氧化特性。结果表明:7种酶的酶解液都显示了一定的抗氧化性,其中木瓜蛋白酶酶解液水解度(DH)最高,为20.85%,对DPPH自由基、O2-.清除率均最佳,分别为75.74%、34.35%;罗非鱼胃蛋白酶酶解液的DH为17.03%,对.OH清除率和还原力均最高,分别为60.51%、0.653。整体的抗氧化性能显示:罗非鱼胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解罗非鱼肉蛋白得到的酶解液的抗氧化活性优于其他酶。