竹盐酿造酱油对H2O2诱发LLC-PK1细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究竹盐酿造酱油乙醇提取物对H2O2诱发猪肾近曲上皮小管细胞（pig proximal tubular cell）LLC-PK1氧化损伤的保护作用。方法：以不同质量浓度（10～200 μg/mL）的竹盐酿造酱油乙醇提取物预培养LLC-PK1细胞24 h后,换用含500 μmol/L H2O2的DMEM细胞培养液继续培养4 h建立细胞氧化损伤模型。四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测细胞生存率,硫代巴比妥酸比色法测定细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,比色法测定细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性和谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量。结果：经不同质量浓度竹盐酿造酱油乙醇提取物预处理24 h后,受损细胞的生存率上升,细胞内MDA生成量减少,ROS水平显著降低。同时,细胞内抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-Px）的活性及其mRNA转录水平,GSH含量也较未经竹盐酿造酱油乙醇提取物处理的受损细胞增加。结论：竹盐酿造酱油乙醇提取物可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH的含量而有效地对抗H2O2诱发的LLC-PK1细胞氧化损伤。     

羽衣甘蓝对小肠上皮Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

探讨羽衣甘蓝乙醇提取物对过氧化氢(H_2O_2)诱发小肠上皮Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。MTT法测定干预后细胞的生存率,比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)水平。硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)测定细胞内氧化损伤标志物丙二醛(Malondiadehycle,MDA)含量。活性氧(ROS)用2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定。酶联法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定细胞内白介素(Interlukin,IL)-8的分泌量。羽衣甘蓝乙醇提取物能明显提升受损细胞的生存率及细胞内源性抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)的活性。降低受损细胞内ROS与MDA水平,并抑制IL-8分泌。研究结果提示羽衣甘蓝乙醇提取物能显著改善H_2O_2诱发Caco-2细胞所发生的氧化应激损伤。     

荔枝果壳原花青素对中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

为评价荔枝果壳原花青素对中波紫外线（ultraviolet B,UVB）（波长280～320 nm）诱导人永生化角质形成细胞（HaCaT）氧化损伤的保护作用。构建UVB辐射HaCaT细胞氧化损伤模型,研究荔枝果壳低聚原花青素（litchi pericarp oligomolymeric procyanidins,LPOPC）及从中分离鉴定的6 种单体化合物对HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。实验分为对照组、UVB照射组、实验组（阳性对照对氨基苯甲酸（para-aminobenzoic acid,PABA）、LPOPC及6 种单体化合物）,以CCK-8法测定各组细胞活力,采用试剂盒检测各组细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）相对含量,超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力,还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果表明：LPOPC及6 种单体化合物的干预处理均可明显提高UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞活力,减少细胞内ROS和MDA的生成,增加SOD、CAT、GSH-Px的活力和GSH水平。6 种单体化合物中,原花青素A2的保护作用最明显,与阳性药物PABA的效果相当。结论：LPOPC及6 种单体化合物均可通过增强细胞内抗氧化能力、抑制脂质过氧化来明显改善受损细胞氧化应激损伤,对UVB诱导氧化损伤的HaCaT细胞具有良好的保护作用,提示原花青素A2是荔枝果壳原花青素中对氧化应激损伤防护作用最强的活性组分。     

γ-萜品烯的体内外抗氧化性研究

本文通过细胞荧光强度、3种抗氧化酶活性(超氧化物岐化酶,SOD;谷胱甘肽过氧化物酶,GSH-Px;过氧化氢酶,CAT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量的测定,在细胞模型和动物实验中研究γ-萜品烯的体内外抗氧化能力。结果表明,Hep-G2细胞内的荧光强度随着γ-萜品烯质量浓度的增加而下降,二者呈现良好的剂量-作用关系,说明γ-萜品烯可以有效结合细胞膜内外的自由基或活性氧,从而减少细胞内带有荧光的氧化产物的积累;过氧化氢诱导建立的氧化应激细胞模型和动物实验结果表明,γ-萜品烯可以显著提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性及谷胱甘肽的含量(p<0.05),并显著降低丙二醛的含量(p<0.05)。以上研究结果表明,γ-萜品烯在体内外均表现出一定的抗氧化作用。     

采用HepG2细胞模型评价酒醅中短肽VPD和KGP的抗氧化活性

本研究针对前期实验从白酒酒醅中分离、提取和鉴定出的两种短肽Val-Pro-Asp (VPD)和Lys-Gly-Pro (KGP)的细胞水平抗氧化活性进行研究。以AAPH诱导氧化损伤的人体肝癌细胞(Human hepatoma cell,HepG2 cell)为模型,测定短肽对细胞内活性氧(ROS)含量、抗氧化酶的活性等指标。结果表明,VPD和KGP具有细胞内抗氧化活性,其作用机制体现在可以显著降低细胞内ROS含量,提高过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)三种酶的活力以及还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,同时也能够通过降低细胞内脂质过氧化水平,如丙二醛(MDA)的含量来保护细胞免受氧化损伤,并且两种多肽的抗氧化能力随着浓度的上升基本呈现一定的增强趋势。综上所述,两种短肽在细胞水平具有一定的抗氧化能力,这为后续通过调整白酒蒸馏工艺条件,从而提高酒醅中功能性多肽进入白酒中的含量提供了可能。     

短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)对酒精性肝损伤保护作用的研究

该研究采用一种短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)分别处理人源肝细胞LO2和酒精性肝损伤小鼠，从体内和体外分别进行验证，研究AKRA是否能够缓解由偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2′-azobis-2-methyl-propanimidamide, AAPH)在肝细胞内引起的氧化应激和食用酒精在实验动物体内造成的酒精性肝损伤。取处于对数生长期的LO2细胞，分为正常组和AKRA处理组，采用细胞增殖-毒性检测法(cell counting kit-8,CCK8)测定并计算细胞活力。采用AAPH诱导LO2细胞氧化损伤；然后以不同浓度AKRA处理细胞，检测LO2细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽还原型(glutathione, GSH)活力和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量；通过蛋白免疫印迹(Western blotting, WB)评价氧化、自噬和炎症相关标志性蛋白表达情况；利用食用酒精灌胃小鼠制备酒精性肝损伤病理模型同时，通过腹腔注射高、中、低剂量AKRA注射液，连续30 d...     

番茄红素对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用研究

目的:探讨番茄红素(Lycopene)对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素预处理后,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态,测定细胞培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC);DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平。结果:番茄红素能明显提高鱼藤酮损伤PC12细胞存活率(p<0.05),恢复细胞增殖;明显减轻了细胞损伤的形态的改变,降低LDH的释放、MDA和ROS含量(p<0.05),提高PC12细胞内SOD活性、GSH含量、T-AOC能力(p<0.05)。结论:番茄红素拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与抗氧化,清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关。     

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。     

牦牛乳酪蛋白酶解物对H_2O_2诱导的氧化损伤HepG2细胞蛋白羰基含量及抗氧化酶活性的影响

为探究牦牛乳酪蛋白酶解物缓解氧化应激损伤的作用,利用过氧化氢(H_2O_2)建立氧化损伤细胞模型,以细胞蛋白质羰基含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性为指标评价牦牛乳酪蛋白酶解物的活性。结果表明,利用酶解物处理H_2O_2损伤的HepG2细胞,能够缓解H_2O_2诱导的蛋白质羰基含量升高,并增加细胞内SOD、CAT、GSHPx的活性,从而提高机体抗氧化能力,缓解H_2O_2引发的氧化应激状态。研究证明,牦牛乳酪蛋白酶解物具有缓解氧化应激损伤的作用,为牦牛乳资源的进一步开发利用及乳源活性肽应用于抗氧化功能食品提供了依据。     

大青叶提取物对HepG2细胞酒精性损伤的保护作用

以大青(Clerodendrum cyrtophyllum Turcz)叶乙醇提取物和石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相分级萃取物为研究对象,探讨其对肝细胞酒精性损伤的保护作用。采用酒精诱导人肝癌细胞(HepG2)氧化应激建立酒精性肝细胞损伤模型,通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度大青叶醇提物和五相萃取物预处理对HepG2细胞酒精性损伤后存活率的影响,以2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(2,7-dichlorofuorescin diacetate,DCFH-DA)探针法测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,二硫代二硝基苯甲酸[5,5'-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),DTNB]法检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,水溶性四唑盐(water-soluble tetrazolium,WST)法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果显示,大青叶醇提物和乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物可以明显提高HepG2细胞酒精性损伤后的存活率,通过抵御细胞内ROS生成,降低MDA浓度的方式对细胞进行保护,通过提高细胞内抗氧化物GSH含量和抗氧化酶SOD活力来恢复细胞抗氧化能力,石油醚相和二氯甲烷相无明显作用效果。综上,大青叶醇提物能够抵御HepG2细胞的酒精性损伤,具有护肝功能性食品应用研究价值;乙酸乙酯相、正丁醇相、水相是其有效部位,尤其是乙酸乙酯相,可以作为大青叶中天然抗氧化剂的主要研究对象。     

硒对镉胁迫下酿酒酵母抗氧化活性的影响

利用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作为模式生物,主要通过测定硒对镉胁迫下酿酒酵母细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,及重要抗氧化酶包括超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）和过氧化物酶（peroxidase,POD）抗氧化活性的变化,研究硒对镉胁迫下酿酒酵母的抗氧化活性的影响。结果表明：镉处理能极显著提高酿酒酵母细胞内ROS和MDA含量（P＜0.01）,进而对酿酒酵母细胞产生氧化胁迫,在培养体系内加入一定量的外源硒可极显著（P＜0.01）增加酿酒酵母细胞内抗氧化酶SOD、POD、CAT和GSH-Px活性,提高抗氧化物谷胱甘肽含量,加强酿酒酵母细胞对ROS和MDA的清除能力,这些结果表明外源硒的添加在酿酒酵母体内亦可对镉的影响产生拮抗作用,且与在动植物体内表现出一致的趋势,后续可以利用酿酒酵母作为模式生物进一步研究硒对镉毒性拮抗作用的一些机制。     

南昆山毛叶茶对tBHP诱导损伤NIH3T3细胞的保护效果

本研究以南昆山毛叶茶为材料,探讨其水提物对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导小鼠成纤维细胞NIH3T3氧化损伤的保护作用.以tBHP诱导NIH3T3细胞建立氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,...     

姜黄素提高PC12细胞的抗氧化能力

目的:以低分化和高分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PC 12)细胞为研究对象,探究姜黄素抗氧化能力及其可能的作用机理.方法:通过噻唑蓝法测定PC12细胞的相对增殖率,然后确定姜黄素的作用浓度及作用时间;采用2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐法及铁离子还原/抗氧化能力法测定...     

巫山神茶对H2O2诱导293T细胞氧化损伤的改善作用

以巫山神茶为研究对象,通过DPPH、ABTS、OH及O₂-自由基清除实验考察其体外抗氧化活性。采用MTT法测定巫山神茶对293T细胞氧化损伤的细胞存活率,并使用试剂盒比色法和实时荧光定量PCR法测定MDA、SOD、CAT、GSH、GSH-Px含量及相关基因的表达。另外,以HPLC法分析了巫山神茶的主要活性成分。结果表明,巫山神茶对DPPH、ABTS、羟基及超氧阴离子自由基有显著的清除效果,且呈现浓度-效应依赖性。不同浓度巫山神茶(40、100、160 μg/mL)处理后的293T细胞存活率均超过93%,说明无明显的毒性作用。对比正常组,过氧化氢(0.3 mmol/L)可显著(P<0.05)导致293T细胞氧化应激损伤,经巫山神茶处理后受损细胞的存活率提高,其中高浓度(160 μg/mL)处理下的细胞的存活率达75.6%。同时,巫山神茶处理还能显著(P<0.05)降低MDA含量,提高CAT、SOD、GSH及GSH-Px含量。实时荧光定量PCR检测相关抗氧化基因也提示巫山神茶能上调CAT、SOD、GSH及GSH-Px的mRNA表达量。此外,通过HPLC分析,从巫山神茶中检测到以下9种生物活性成分:绿原酸、表儿茶素没食子酸酯、对香豆酸、异槲皮苷、二氢槲皮素、槲皮苷、黄芩苷、槲皮素、根皮素。总之,巫山神茶具有较好的体外抗氧化能力,能够改善由H₂O₂诱导的293T细胞氧化损伤且效果显著,其药理价值可考虑进一步深入研究。     

牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

目的：研究牡丹花蕊黄酮对H2O2诱导损伤的RAW264.7巨噬细胞的保护作用。方法：实验分为空白组、H2O2损伤组、VC对照组和牡丹花蕊黄酮低、中、高剂量组。应用H2O2建立RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,噻唑蓝法测定细胞存活率,试剂盒法测定细胞和细胞培养液中谷胱甘肽和丙二醛含量及过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶活力。结果：牡丹花蕊黄酮的质量浓度在10～30 μg/mL范围内时,可显著促进RAW264.7巨噬细胞的增殖（P＜0.05）。与H2O2损伤组相比,牡丹花蕊黄酮各剂量组能够提高细胞及细胞培养液中总抗氧化能力,谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物酶、过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽含量,降低细胞及细胞培养液中丙二醛含量,提高细胞内乳酸脱氢酶的水平。结论：牡丹花蕊黄酮可以促进RAW264.7巨噬细胞的增殖,提高H2O2损伤的RAW264.7巨噬细胞的抗氧化能力,且存在剂量依赖效应。     

金银花叶黄酮对衰老模型小鼠的体内抗氧化作用

目的:研究金银花叶黄酮对衰老小鼠体内抗氧化系统的调节作用。方法:采用颈背部皮下注射D-半乳糖法构建衰老小鼠模型,用不同剂量(低、中、高剂量分别为50、100、200 mg/(kg·d))的金银花叶黄酮灌胃小鼠,观察小鼠体质量变化,并计算肝脏、脑、肾脏、脾脏及心脏指数,测定小鼠血清及肝脏、脑、肾脏及心脏组织中总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力及丙二醛(malondialdehyde,MAD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量。结果:与空白组相比,模型组小鼠体质量和脏器指数显著下降,血清和各脏器组织中的T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活力及GSH含量均有所降低,MDA含量升高,且大部分差异显著(P0.05),说明衰老小鼠模型构建成功。与模型组相比,金银花叶黄酮各剂量组小鼠体质量和脏器指数均有所升高,血清和脏器中的T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活力及GSH含量均有不同程度的回升,MDA含量降低,高剂量组效果最显著。结论:金银花叶黄酮能有效提高衰老小鼠的抗氧化能力,其抗氧化机制可能与提高机体抗氧化酶活性和还原性保护物质含量、降低脂质过氧化物含量有关。