食品中鱼源性成分PCR的检测方法

研究建立了食品中鱼源性成分的普通PCR检测方法,该方法特异、灵敏。应用鱼源性引物对35种鱼类、24种非鱼类动物和10种植物样品进行PCR检测,只在35种鱼类中出现224bp特异扩增条带,在其他的非鱼类动植物DNA中未出现扩增条带,实验表明,该PCR检测方法具有特异性。该检测方法的检测限为0.1ngDNA和0.1%(W/W)。运用建立的方法对市场上的80个不同类别的食品样品进行检测,其中有13个样品错误标识了鱼源性成分。该检测方法能够用于食品中鱼源性成分的鉴别。     

Taqman探针荧光聚合酶链式反应实时同步鉴定动物源性食品中猪肉、鸡肉源性成分

目的:建立一种能实时同步检测动物源性食品中猪肉源性和鸡肉源性成分的Taqman探针双重荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,应用于动物源性食品的成分掺假快速检验。方法:分别依据猪和鸡的种间保守基因(Cytb)序列设计、合成特异性引物及不同荧光标记(FAM、HEX)的Taqman探针,建立可同步检测动物源性食品中的猪源性和鸡源性成分的Taqman探针双重荧光PCR方法。结果:所建立的Taqman探针双重荧光PCR检测方法特异性强,仅对猪、鸡成分有扩增;灵敏度高,最低检测到猪源、鸡源DNA的含量分别为0.02、0.10 ng;抗干扰性强,当DNA混样中猪源、鸡源性成分含量在2%以上水平时,所建立的混合检测体系均能对DNA混样给出正确判断。结论:所建立的混合检测体系具有高特异性、高灵敏度,能够适用于动物源性食品中猪肉、鸡肉成分的同时快速检测。     

食品中动物源性成分的多重PCR快速检测

目的利用多重PCR技术对市售的多种食品进行检测,确定动物源性成分的种类,进行掺假及真伪鉴别。方法对鸡、猪、牛、兔、绵羊、山羊、马、鹿8种动物源性产品进行DNA提取,根据不同动物线粒体DNA设计特异性引物,根据脊椎动物细胞色素b基因mt DNA序列设计通用引物作为内源参照,对8种动物源性产品的DNA进行多重PCR扩增,同时对多种成分进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳表明,此方法能同时扩增出8种动物的特异性条带,检测灵敏度达到0.01%。结论所建立的鉴定多种动物源性成分的新方法,操作简便、快速准确,可为各检验机构对食品进行检测提供方法指导。     

鱼肉制品中龙利鱼和巴沙鱼的鱼源性成分的双重实时荧光PCR快速检测法

目的 建立龙利鱼和巴沙鱼源性成分的双重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)快速检测方法。方法 根据13种龙利鱼的线粒体16S rRNA序列,设计通用引物和探针,根据巴沙鱼的线粒体cytb基因序列设计引物和探针,通过优化扩增反应体系进行双重实时荧光PCR扩增,达到快速检测产物的目的。结果 本方法特异性良好,龙利鱼基因组DNA灵敏度可达到10^-3ng,在与鲤鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%。巴沙鱼基因组DNA灵敏度可达到10^-4ng,在与龙利鱼粉、大西洋鳕鱼粉混合的鱼肉制品中均可检测,质量分数灵敏度达到0.1%,在与米粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到0.001%。结论 本方法检测特异性高、所需时间短、灵敏度高,可满足鱼肉制品中龙利鱼真伪鉴别和巴沙鱼掺假的检测要求。     

实时荧光PCR技术快速检测莲蓉制品中芸豆成分

目的:建立基于实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测莲蓉制品中芸豆成分的方法。方法:以芸豆pvsbe2基因高度保守区域设计特异性引物和探针,通过对莲子及其他富含淀粉类植物DNA进行扩增,以验证方法的特异性;以1 ng/μL的芸豆DNA进行系列稀释,确定此法检测灵敏度;对含有1%芸豆与莲子的混合样品的DNA模板进行10倍梯度稀释,确定重量检测灵敏度;并应用此方法和PCR方法对市场样品进行了检测,对建立的荧光PCR方法进行验证。结果:该检测方法具有高度特异性,与莲子及其他高淀粉植物无交叉反应;DNA质量浓度的检测灵敏度达到1 pg/μL,重量检测灵敏度可达0.01%。含芸豆成分的莲蓉月饼扩增阳性,检测结果与食品标签相符。结论:本研究建立的实时荧光PCR方法具有特异性强、灵敏度高、快速简便的特点,更适合莲蓉制品中芸豆成分的快速检测。     

食品中马源性成分的实时荧光PCR检测

针对马线粒体DNA细胞色素b基因设计特异性引物和探针,建立食品中马源性成分实时荧光PCR检测方法,并经特异性和灵敏度试验验证其可行性。结果表明:该体系可扩增马DNA片段,长度为127 bp,其他常见畜、禽肉成分均无法正常扩增。该体系的检测灵敏度为1.25 pg马DNA和质量分数0.001%马肉粉。经市售食品的检测验证,表明所建立的马引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速、高效等优点,可用于对食品中马源性成分的掺假鉴别检测。     

鱼肉制品中巴沙鱼源性成分的实时荧光聚合酶链式反应快速检测法

目的 建立巴沙鱼源性成分的实时荧光聚合酶链式反应(PCR)快速检测手段.方法 根据巴沙鱼的线粒体cytb基因序列设计引物,使用实时荧光PCR进行扩增,从而达到快速检测产物的目的.结果 此方法特异性良好,巴沙鱼基因组DNA灵敏度可达到10-4 ng,在与婴幼儿米粉、儿童副食芝麻粉、鸡肉粉和大西洋鳕鱼粉混合的鱼肉制品中均可...     

微滴数字PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的利用微滴数字PCR技术,建立鸭源性成分的快速、特异、灵敏检测方法。方法根据鸭线粒体基因全序列设计的引物及探针,利用微滴数字PCR进行扩增,建立鸭源性成分检测方法;以市场中常见畜禽肉为参考物种作微滴数字PCR特异性检测;以羊肉为干扰物观察微滴数字PCR的抗干扰性;将鸭肉DNA进行梯度稀释,对方法灵敏度进行检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行检测,特异性强,灵敏度高,并且其他物种成分的存在对方法灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以实现畜肉食品中的鸭源性成分检测。     

肉制品中牛源性成分多重实时荧光PCR检测 方法的建立及初步应用

目的建立肉制品中牛源性成分的荧光PCR检测方法。方法根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成两对引物,以生、熟牛肉及超市牛肉加工品为材料,建立肉制品中牛源性成分的多重实时荧光PCR检测方法,并用该法与国标法同时对市售的25份肉制品同时进行检测,通过对其他种类的肉源DNA进行扩增验证方法的特异性;对含有不同比例牛肉成分的DNA样本进行检测确定检出限。结果该方法可成功检测出肉制品中的牛源性成分。在25份肉制品检测中,与国标法检测结果一致。该法的特异性为100%,灵敏度检测线为1%。结论本研究成功建立牛源性肉制品的检测方法,该方法快速简便,且具有较高的特异性和灵敏度,可用于市售肉制品中牛源性成分的鉴定。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

Detection of Fish-Derived Ingredients in Animal Feeds by a TaqMan Real-Time PCR Assay

Animal species identification in food and feed has gained increasing interest in recent years due to public health, economic and legal concerns. In the present work, a TaqMan real-time PCR assay targeting the mitochondrial 12S rRNA gene was developed for detection of a specific DNA fragment (87 bp) common to the most economically important fish families in fish-derived ingredients used in feed formulations. Performance of the assay was evaluated against stringent acceptance criteria in terms of specificity and sensitivity. The TaqMan real-time fish-specific system proved to be highly sensitive, allowing the detection of 0.1 pg of fish DNA. The assay was successfully applied to the authentication of two types of real-world compound feeds: industrial farm animal feeds and commercial pet foods, allowing detection of small fish percentages in the samples. The quantitative potential of the real-time PCR assay was further performed, concluding that, although results were well reproducible under the experimental conditions tested, an accurate estimation of the target content in feeds is not feasible in practice. The reported methodology may be useful as a molecular analytical tool to support fisheries control and enforcement, as well as the verification of authenticity of fish and fish-derived products in the food and feed sectors.     

食品中鸡源性成分实时荧光PCR检测方法的建立

目的：建立基于实时荧光聚合酶链式反应技术的食品中鸡源性成分快速检测方法。方法：以鸡线粒体细胞 色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体 系进行验证。结果：该鸡源荧光聚合酶链式反应检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测3.5 pg/μL鸡源DNA 的存在;经含鸡源成分的模拟混合肉样检测,证实体系抗干扰能力强;并且通过市售食品检测表明体系可用于定性 加工食品中的鸡源成分。结论：所建立的鸡源引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速高效等优点,可用于对 食品中鸡源性成分的掺假鉴别。     

一种基于荧光PCR法检测虹鳟鱼源性成分方法的建立

目的:建立一种基于荧光聚合酶链式反应技术鉴别虹鳟鱼的检测方法.方法:以细胞色素C氧化酶I为目的基因,设计特异性引物和探针,通过测试引物特异性和模拟检测虹鳟鱼与三文鱼鱼肉混合物验证该体系的检测效果.结果:该虹鳟鱼荧光聚合酶链式反应检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可特异性地检测出含1％(w/w)虹鳟鱼的DNA存在.说明该...     

PCR法检测肉制品中鹅源性成分

目的 建立一种PCR法检测肉制品中鹅源性成分的方法。方法 根据鹅的线粒体DNA(mtDNA)序列设计引物, 以9种动物的DNA为模板, 利用新设计的鹅的特异性引物进行PCR反应, 并用琼脂糖凝胶电泳检测引物的特异性和敏感性。结果 通过PCR反应, 仅鹅的DNA扩增得到了194 bp的目的片段, 其余物种DNA和空白对照均无目的片段。扩增产物的核苷酸序列与GENBANK中检索到的相应序列基本相符合。 结论 该方法特异性强、灵敏度高, 适合检测肉制品中的鹅源性成分。     

PCR方法快速鉴别食品中肉的种类

本文针对食品中肉成分种类鉴别开发了一种快速灵敏的PCR检测方法,可检测食品中是否存在猪肉、牛肉、羊肉以及鸡肉等成分。采用微波助提法提取样品中DNA,简化了前处理步骤,可在短时间内完成从多种不同类型肉与肉制品中提取肉成分DNA。为了评价方法的可靠性与灵敏度,猪肉以及掺入了不同比例浓度猪肉成分的食品样品采用本方法进行了核酸提取与PCR分析。检测结果表明,方法可检测出低至含有0.5%浓度的猪肉成分的混合样品。随机抽取50份不同类型的市面食品样品,检测出5份食品含有猪肉成分,7份食品中含有牛肉成分,5份食品中含有羊肉成分。该样品前处理方法、DNA提取方法以及PCR检测方法可广泛应用于食品中肉成分种类的检测鉴别。     

基于TaqMan实时荧光PCR检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分

根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第4部分：驴 成分检测 实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用TaqMan实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）技术检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分。首先对13 种不同动物鲜肉组织的DNA进行驴源性成分特异 性检测,然后对驴源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工肉制品中检测方法的适用性。 结果表明：本研究建立的方法特异性强,除驴肉外,牛、羊、猪、马、骆驼、鹿、狗、兔、鸡、鸭、鸽子、鹌鹑 12 种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,驴组分DNA的检出限可达100 fg/μL,灵敏度可达0.01%; 方法的适用性较广,可以用于加工肉制品中驴源性成分的检测。     

A novel common single primer multiplex polymerase chain reaction (CSP‐M‐PCR) method for the identification of animal species in minced meat

BACKGROUND: Minced meat species adulteration is a severe problem. In this study a common single primer multiplex polymerase chain reaction (CSP‐M‐PCR) method was applied to the identification of five species (chicken, cattle, sheep, pig and horse) in minced meat products. CSP was designed as a common adapter at the 5′‐end of species‐specific reverse primers and employed in giving different length fragments from the respective meat species. RESULTS: Species‐specific DNA fragments could be identified in a single PCR reaction by mixing CSP, Chicken‐R, Cattle‐R, Sheep‐R, Pig‐R and Horse‐R primers in the ratio 1:0.01:0.01:0.01:0.01:0.10 (where ‘1’ represents 0.5 mmol L^?1). The specific DNA fragments could be efficiently amplified by CSP‐M‐PCR with > 5 µmol L^?1 species‐specific primers, except for 50 µmol L^?1 Horse‐R. A detection limit of 0.5 g kg^?1 was determined for both single species of minced meat and all species of five kinds of minced meat. CONCLUSION: The CSP‐M‐PCR method simplified the PCR reaction system and removed the inconsistent amplification efficiency from different primers. This highly sensitive, reproducible and rapid method could potentially be used as a screening or identifying assay to test for the presence of species or ingredients in minced meat and other meat products. Copyright © 2008 Society of Chemical Industry     

肉中单核细胞增生李斯特菌PCR快速检测方法建立

目的:建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)快速、敏感、特异的PCR诊断方法。方法:采用聚合酶链式反应技术(PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特菌内化素基因(ivlA),并评价该方法的特异性与敏感性。结果:在445bp处出现inlA基因的目的片断,只有单增李斯特菌的目的片段获得扩增,其他菌种扩增均呈阴性;该方法可以检测到DNA的检测限。结论:PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便;为肉中单增李斯特菌的快速检测提供了新的手段。