杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性及抗肿瘤作用

为研究杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性及抗肿瘤作用,以杏鲍菇菌丝体多肽为原料,通过对小鼠巨噬细胞Ana-1细胞存活率、细胞因子TNF-α和IL-6分泌量、膜表面蛋白TLR2和TLR4表达量、吞噬中性红活性以及刺激巨噬细胞产生NO和H_2O_2的能力测定来研究杏鲍菇菌丝体多肽的免疫活性;通过对人体乳腺癌细胞BT-549细胞、宫颈癌细胞Hela-229和胃癌细胞HGC-27细胞增殖的抑制来研究杏鲍菇菌丝体多肽的抗肿瘤作用。实验显示,多肽浓度在0.05~2 mg/mL范围时,在一定程度上能够促进巨噬细胞的增殖,提高膜表面蛋白TLR2、TLR4表达量,提高细胞因子TNF-α和IL-6分泌量,增强巨噬细胞吞噬中性红活性能力,并且促进巨噬细胞分泌NO和H_2O_2;对人体乳腺癌细胞、宫颈癌细胞和胃癌细胞这三种癌细胞具有较强的抑制作用,表明杏鲍菇菌丝体多肽具有较好的免疫活性和抗肿瘤活性,且活性与浓度呈现量效关系。     

杏鲍菇提取物对小鼠巨噬细胞免疫活性的研究

本文中以杏鲍菇子实体为原料,将杏鲍菇不同极性的提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1进行了免疫活性研究。将PEs作用于小鼠巨噬细胞Ana-1,通过MTT法测定其对Ana-1细胞增殖活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)在不同提取物浓度和不同作用时间的分泌量变化情况,中性红法检测对细胞吞噬活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞表面膜蛋白Toll样受体(TLR2、TLR4)的表达量的变化情况。结果显示:杏鲍菇4种提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1有不同程度上的免疫刺激作用,甲醇提取物(PEM)表现出了最强的促进细胞增殖和促进细胞因子分泌的活性,在PEM质量浓度为12.5μg/m L的条件下,能够促进Ana-1细胞增殖作用最强,细胞因子TNF-α和IL-6均出现分泌高峰;但PEM对细胞因子分泌的作用时间不同,PEM作用于Ana-1细胞后,在12 h时出现TNF-α分泌高峰,而IL-6在24 h时出现分泌高峰。此外,PEM可以激活Ana-1,提高细胞吞噬活性,促进细胞表面膜蛋白受体TLR2、TLR4的表达。本研究结果表明了PEM能够通过促进巨噬细胞增殖、诱导细胞因子分泌和提高吞噬活性的方式实现免疫增强功能。     

基于巨噬细胞模型的竹荪多糖的免疫功能

为探索竹荪多糖(DI)对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响,分别采用四唑氮蓝(MTT)法、中性红法、Griess法、ELISA法,检测DI对巨噬细胞增殖、吞噬活性、一氧化氮(NO)和白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌量的影响;运用反转录PCR(RT-PCR)检测i NOS和IL-1、IL-6、TNF-α的m RNA表达量的变化。结果表明,在25~200μg/m L质量浓度范围内,DI能够明显促进巨噬细胞增殖,增强其吞噬活性。同时,DI能够增强巨噬细胞分泌NO、IL-1、IL-6、TNF-α的能力,且明显提高i NOS、IL-1、IL-6、TNF-αm RNA的表达水平。因此,竹荪多糖对巨噬细胞RAW264.7具有免疫刺激作用。     

阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用

利用巨噬细胞体外培养体系,研究阿魏侧耳胞外多糖对小鼠巨噬细胞的激活作用。无菌获得小鼠腹腔巨噬细胞,中性红吞噬实验检测细胞吞噬活性;荧光探针标记和Griess反应分别检测细胞内外NO的含量,酶联免疫吸附法检测细胞内一氧化氮合成酶(NOS)、培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素12(IL-12)的含量。结果表明,与空白组相比,25~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著增强巨噬细胞的吞噬活性(p0.05),增加细胞因子IL-1(p0.05)和IL-12(p0.05)的分泌量;50~200 mg/L阿魏侧耳胞外多糖可显著提高细胞NOS(p0.05)和NO(p0.05)的含量以及TNF-α的分泌量(p0.05)。因此,一定浓度阿魏侧耳胞外多糖对体外培养的小鼠巨噬细胞具有激活作用。     

硒化低聚氨基多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

本实验旨在研究硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能的影响。用噻唑蓝比色法分别考 察硒化低聚氨基多糖、Na2SeO3对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并观察巨噬细胞形态的变化。通过中性红 法、酶联免疫吸附测定法及实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法分别检测巨噬细胞的吞噬能力、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6及IL-10细胞因子的分泌量及其mRNA表达水平。 结果表明：硒质量浓度为100～1 000 μg/L时,硒化低聚氨基多糖对细胞的相对增殖率无显著影响;而Na2SeO3的硒 质量浓度超过200 μg/L即对巨噬细胞RAW264.7产生细胞毒性作用。硒化低聚氨基多糖能增强巨噬细胞吞噬活性, 显著提高RAW264.7细胞TNF-α、IL-6及IL-10分泌量及其mRNA表达水平,且效果比Na2SeO3处理组、低聚氨基多糖 处理组及Na2SeO3＋低聚氨基多糖复合添加组好。实验结果提示硒化低聚氨基多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有一 定的免疫调节作用。     

西洋参花多糖的提取和体外免疫调节作用的研究

提取西洋参花多糖,测定西洋参花多糖含量和蛋白含量。以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型研究西洋参花多糖对细胞吞噬能力的影响,刺激产生NO含量,释放IL-6、TNF-α来考察其对巨噬细胞免疫活性的影响。结果表明,西洋参花多糖可通过增强巨噬细胞吞噬能力,释放免疫因子等方面增强巨噬细胞免疫活性。     

阿里红多糖组分对RAW264.7巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及其组分FOPS-a、FOPS-b对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。方法以小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究对象,不同浓度(50~1600μg/m L)FOPS、FOPS-a、FOPS-b干预后,用cck-8试剂盒测定细胞活力,中性红法测定其吞噬活性,NO试剂盒测定NO的含量,ELISA试剂盒测定TNF-α和IL-1β释放能力。结果 FOPS、FOPS-a、FOPS-b在一定的浓度范围内可以提高RAW264.7巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、一氧化氮以及TNF-α、IL-1β的释放量。结论 FOPS、FOPS-a、FOPS-b一定浓度范围内具有良好的增强RAW264.7巨噬细胞免疫功能的作用。     

马齿苋多糖体外免疫调节活性研究

以小鼠巨噬细胞RAW264.7为模型研究马齿苋多糖对细胞吞噬能力的影响,刺激产生NO含量,释放IL-6、TNF-α来考察其对巨噬细胞免疫活性的影响。结果表明马齿苋多糖可通过增强巨噬细胞吞噬能力,释放免疫因子等方面增强巨噬细胞免疫活性。     

槐花多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响研究

研究槐花多糖对免疫低下小鼠的免疫功能的调节作用。采用腹腔注射环磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型,考察槐花多糖对免疫抑制小鼠脏器指数、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞增殖活性、血清IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、TNF-γ水平、溶血素水平和溶血空斑形成数量的影响。结果表明槐花多糖能明显提高免疫抑制小鼠的胸腺指数、脾脏指数、巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞的增殖能力、溶血素含量和溶血空斑形成数量,促进细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、TNF-γ分泌。槐花多糖具有免疫增强活性,具有良好的开发应用潜力。     

杏鲍菇副产物免疫活性物质追踪与结构鉴定

以杏鲍菇副产物为试验材料,采用不同极性部位分段萃取、硅胶柱层析2个步骤对甲醇提取物中的活性物质进行分离纯化,并对每步中得到的提取物进行免疫活性研究,观察其对小鼠巨噬细胞的免疫刺激作用,以此对其中的免疫活性物质进行筛选、活性追踪。利用液相串联四级杆飞行时间质谱对主要活性成分进行结构表征。结论显示:对杏鲍菇甲醇提取物进行系统溶剂法分段萃取,其中正丁醇部位表现出最强的促进细胞增殖活性、吞噬活性和细胞因子分泌活性。当正丁醇部位提取物质量浓度为25μg/m L时,促进Ana-1细胞的增殖和吞噬活性作用最强,细胞因子TNF-α和IL-6均出现分泌量高峰。通过硅胶柱层析对正丁醇部位萃取物进行分离,得到7个洗脱组分,其中Fr.2表现出最强的促进细胞增殖活性、吞噬活性和细胞因子分泌活性。当Fr.2质量浓度为12.5μg/m L时,促进Ana-1细胞增殖作用,吞噬活性最强,细胞因子TNF-α和IL-6出现分泌量高峰。通过液相质谱对Fr.2中主要成分进行结构表征,确定Fr.2中主要成分为腺苷,化学分子式为C10H13N5O4。     

蛹虫草多糖调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的分子机制

多种真菌多糖近年来因其免疫调节活性成为保健食品领域研究的热点。本实验以食药用真菌蛹虫草提取物蛹虫草多糖（Cordyceps militaris polysaccharides,CMP）为研究材料,初步探究CMP对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的调节机制。噻唑蓝实验结果显示CMP无细胞毒性,且100、200 μg/mL CMP可以明显增强RAW264.7细胞活性;中性红法、Griess法和酶联免疫吸附检测结果表明25～200 μg/mL的CMP以剂量依赖方式增强RAW264.7细胞吞噬活性并增加一氧化氮（nitric oxide,NO）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）分泌,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌呈先升高后降低的趋势,在100 μg/mL时达到最高值;抑制剂中和实验结果显示当Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）和甘露糖受体（mannose receptor,MR）受到抑制时,CMP诱导的RAW264.7免疫反应显著降低,这表明TLR4和MR均为CMP激活巨噬细胞的受体;此外,Western blot结果显示丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）信号通路也参与CMP诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β。表明TLR4和MR/MAPK信号传导途径在CMP诱导巨噬细胞RAW264.7产生免疫应答时发挥了重要作用。     

北五味子多糖对RAW264.7细胞的免疫调节作用

北五味子是我国传统中药材,近年来因其具有的护肝、安神等多种功效而得到了广泛地关注和研究。本实验提取北五味子多糖并超滤处理获得不同分子质量的多糖组分Sp1(100 ku)和Sp2(10~100 ku),分别按不同质量浓度对小鼠巨噬细胞系RAW264.7孵育处理,通过检测细胞增殖活性、吞噬能力、NO分泌水平及培养基中细胞因子(细胞白介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α))的含量,并与脂多糖实验组进行对比,评价北五味子多糖在免疫调节方面的作用。结果显示,较低分子质量的Sp2组分活性较强,在500.00μg/m L以上时,可以对小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力、NO分泌水平、IL-1β和TNF-α含量有普遍的促进作用,显现出良好的免疫提高潜力,而较高分子质量的Sp1组分活性较弱。     

黑木耳多糖的结构组成及其免疫活性研究

目的:对高温蒸汽浸提法提取得到的黑木耳多糖进行结构解析,并探究其在免疫功能方面的活性。方法:通过气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)、刚果红实验等对其结构进行分析,建立RAW264.7巨噬细胞的免疫模型以探究其免疫刺激活性。结果:黑木耳多糖主要由鼠李糖、甘露糖和葡萄糖组成,其具有和免疫活性相关的β-构型糖苷键和三股螺旋构象。黑木耳多糖可以促进巨噬细胞的增殖,增强巨噬细胞的吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮的分泌及细胞因子IL-6、TNF-α的释放。结论:黑木耳多糖具有与免疫相关的多种结构,对巨噬细胞具有强烈的刺激作用,在用作潜在的免疫刺激剂方面具有广阔的前景,黑木耳也可作为调节人类免疫力的功能性食品发挥巨大的应用价值。     

茉莉花渣中果胶型多糖的结构特征与免疫调节作用

为探究茉莉花渣中果胶型多糖的结构特征与免疫调节作用，本研究通过水提醇沉、蛋白脱除、阴离子交换柱层析和凝胶柱层析分离得到两种多糖JSP-3和JSP-4。通过相对重均分子量测定、单糖组成测定、部分酸水解液-质联用测定以及核磁共振波谱分析了两种多糖结构特征，最后以小鼠巨噬细胞RAW 264.7为模型，通过探究其对小鼠巨噬细胞的增殖率、吞噬率、ROS产生量以及NO、TNF-α、IL-6分泌量的影响来研究免疫调节作用。结果表明，JSP-3和JSP-4为两种均一多糖，相对重均分子量分别为15.48 kDa和 44.75 kDa，主要由半乳糖醛酸、鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖构成，存在不同比例的半乳糖醛酸聚糖结构域（JSP-3:32.87%±3.53%；JSP-4:68.64%±0.67%）与鼠李糖半乳糖醛酸聚糖结构域（JSP-3:61.12%±3.37%；JSP-4:28.28%±0.46%），说明两者均为果胶型多糖。与对照组相比，JSP-3和JSP-4在12.5~100 μg/mL的浓度范围内无细胞毒性，在一定浓度下能够通过促进小鼠巨噬细胞的吞噬作用，显著增加ROS产生量以及NO、TNF-α和IL-6的分泌量（P<0.05）。在相同浓度下，JSP-4比JSP-3能够刺激细胞分泌更多的NO、TNF-α和IL-6，说明JSP-4具有更强的免疫调节作用，这可能与其更高的半乳糖醛酸结构域比例和相对重均分子量有关。上述研究成果初步证明了茉莉花渣果胶型多糖的免疫调节作用，为其在免疫调节剂方面的应用提供了初步依据。     

蓝莓花色苷对小鼠淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用

为探讨蓝莓花色苷对淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。无菌分离淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和腹腔巨噬细胞悬液,以终浓度为4、8、16、32、64 mg/mL的蓝莓花色苷作用于体外培养的淋巴细胞(48 h)和腹腔巨噬细胞(24 h),采用MTT法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞增殖率及中性红吞噬实验检测腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,ELISA法检测蓝莓花色苷对淋巴细胞(IL-6白细胞介素-6)、(TNF-α肿瘤坏死因子-α)和腹腔巨噬细胞(IL-4白细胞介素-4)、(IL-12白细胞介素-12)分泌的影响。结果显示,蓝莓花色苷各浓度组淋巴细胞增殖率、腹腔巨噬细胞的吞噬活性、培养上清中淋巴细胞IL-6、TNF-α及腹腔巨噬细胞IL-12的分泌高于空白组(p<0.05),各浓度组与阳性组腹腔巨噬细胞IL-4分泌量均低于空白对照组(p<0.05)。蓝莓花色苷可能通过促进淋巴细胞增殖和提高腹腔巨噬细胞吞噬及分泌功能,提高机体免疫功能。     

冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响

为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用（LC-MS）技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝（MTT）比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500 μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。     

Immunomodulatory effect of Ganoderma atrum polysaccharide on CT26 tumor-bearing mice

Ganoderma atrum has attracted great attention for its antitumor activity. However, the mechanism remains unclear. A G. atrum polysaccharide (PSG-1) showed pronounced antitumor activity in this study. PSG-1 did not kill CT26 cells directly, but inhibited the proliferation of CT26 cells via the activation of peritoneal macrophages (MΦ). In vivo, PSG-1 significantly suppressed the tumor growth in CT26 tumor-bearing mice. The treatment caused a significant increase in the immune organ index and the phagocytosis of macrophages. The production of TNF-α, IL-1β and nitric oxide also increased. Furthermore, we found that PSG-1 acted on Toll-like receptor (TLR) 4, signaled through p38 MAPK pathway, then activated NF-κB and stimulated TNF-α production. We further found that PSG-1 increased the expression of TLR4 and NF-κB, the degradation of IκBα and the phosphorylation of p38 MAPK. In summary, we have demonstrated that PSG-1 could activate macrophages via TLR4-dependent signaling pathways, improve immunity and inhibit tumor growth.     

芋头水溶性多糖的分离纯化及其对巨噬细胞免疫活性功能的影响

为探究芋头水溶性多糖的免疫活性功能,本文用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析对由水提醇沉的方法得到芋头水溶性粗多糖进行分离纯化,并利用Sephadex G-200凝胶柱层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和傅里叶红外光谱分析其组成结构。再通过CCK-8试剂法、中性红吞噬实验、Griess法和酶联免疫吸附法测定其对巨噬细胞RAW264.7的增殖活性、吞噬能力以及分泌NO和细胞因子能力的影响。结果表明,得到的两种芋头水溶性多糖TPS₁和TPS₂纯度分别为87.4%和81.5%。TPS₁主要成分为含有甘露糖的α型中性多糖,TPS₂主要成分为含有硫酸基团的β型吡喃酸性多糖。细胞实验表明TPS₁和TPS₂在25~400 μg/mL浓度范围内对RAW264.7无毒害作用。其中,TPS₁能够显著提高该细胞的中性红吞噬能力(P<0.05),吞噬指数最大可达到空白对照组的2.07倍;TPS₂则具有更强的促进NO、细胞因子分泌的作用。TPS₁和TPS₂作用下的NO分泌量分别为空白对照组的3.07倍和4.57倍,TNF-α的分泌量为空白对照组的3.04倍和3.76倍,IL-1β的分泌量为空白对照组的1.37和1.54倍。以上结果表明,TPS₁和TPS₂均具有免疫调节的功能,有望进一步开发作为免疫调节剂添加到食品中。     

轮叶党参粗多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞及RAW 264.7细胞的免疫活性

目的:研究轮叶党参多糖对小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞(RAW 264.7)作用以探究其免疫增强的功效。方法:浓度为1000,500,250,125 μg/mL多糖体外分别与脾脏细胞、RAW 264.7共培养,采用ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6和TNF-α浓度的变化。采用MTT法,研究轮叶党参粗多糖对RAW 264.7增殖的影响。Griess法测定细胞上清液中NO的含量变化。通过RT-PCR法检测iNOS mRNA的生成情况。结果:与正常组相比,轮叶党参粗多糖组IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α和NO的分泌量极显著增加(p<0.01),显著促进RAW 264.7增殖(p<0.05)。与正常组比较,iNOS mRNA明显增加。结论:轮叶党参粗多糖可与ConA协同增强T细胞活性,也可参与活化单核-巨噬细胞对特异性免疫与非特异性免疫活性起到正向调节的作用。