食品中微生物检测能力验证结果与分析

目的提高实验室检验人员微生物检测能力和水平,增强实验室竞争力。方法实验室参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌2项检验能力验证。按照盲样作业指导书的要求对样品进行前处理后,依据GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》和GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行定性检测。结果样品17-P842鉴定出单核细胞增生李斯特氏菌,样品18-E886鉴定出副溶血性弧菌。结论本次能力验证结果满意,为今后实验室检测实际样品提供参考经验。     

食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品的研制及其应用

目的研制食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品,并应用于副溶血性弧菌能力验证试验中。方法能力验证样品包括0～3瓶阳性样品和0～3瓶阴性样品。阴性样品仅含有背景细菌,阳性样本在背景菌的基础上添加有副溶血性弧菌。为防止数据串通,编制1～180的随机数字表,其中90个随机数字作为阳性样品编码,另外90个随机数字则用为阴性样品编码。随机抽取冻干质控阳性样品、阴性样品各20瓶,参照本次能力验证推荐的GB4789.7-2013对样品进行均匀性检验,阳性样品均需要检出副溶血性弧菌,而阴性对照样品应不得检出副溶血性弧菌。将副溶血性弧菌能力验证样品分别在?30、4℃储藏30d监测其储藏稳定性,同时在25和37℃下储藏7 d监测其运输稳定性。结果副溶血性弧菌的质控样在均匀性、储藏稳定性和运输稳定性均能满足质控样使用的要求。在39家实验室反馈结果中,36家结果评定为满意,满意率为92.3%。结论食品中副溶血性弧菌能力验证样品可以满足此次能力验证的需求,国内实验室大部分能满足考核要求,仍有部分实验室需要提高检验检测能力。     

两种副溶血性弧菌检测方法的比对

目的比较国家标准中的定性检测法与快速检测法中的普通PCR法在检测食源性副溶血性弧菌上的区别与优劣,为今后针对副溶血性弧菌的检测方法的改进依据及应对突发食品安全事件时快速检测提供参考。方法采用GB4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》与SN/T1869-2007《食品中多种致病菌快速检测方法 PCR法》对经阳性菌株污染的市售墨鱼干样品进行副溶血性弧菌的检测,并对2种方法进行对比。结果 2种方法在针对食源性副溶血性弧菌的检验上的比对结果均为检出。在实验耗时方面,国家标准法确认检出阳性需耗时4 d,快速检测法仅需耗时26 h。结论国家标准中的定性检测法与快速检测方法均能检出副溶血性弧菌,国标法在应对日常检验上标准且能够广泛应用,快速检测方法在快速、准确地应对食品安全突发事件方面具有优势。     

海产品中副溶血性弧菌检测能力验证分析报告

目的通过参加英国FAPAS分析实验室组织的海产品中副溶血性弧菌检测能力验证,对其实验结果出现的异常现象进行分析,找出导致本次能力验证组织失效的原因。方法按照GB 4789.7-2013、SN/T1870-2016及相关作业指导书等进行实验,通过采用本实验室经常采用的检测方法进行检验,对实验出现的异常结果进行分析。结果发现M224d21A和M224d21B这2个冷藏运输箱包装的冻干样品由于储藏和运输等问题,导致未检出副溶血性弧菌。结论此次能力验证分析对于我院在海产品中副溶血性弧菌检测方面技术水平的提高和品牌形象的确立起到了积极作用,同时也为检验工作者对于能力验证出现异常现象提供一种解决问题的新思路、新方法。     

沙门氏菌的分离与鉴定能力验证

目的 参加安徽省质量技术监督局举办的食品中沙门氏菌检出能力验证实验, 提高实验室的检测水平和综合能力。方法 依据能力验证作业指导书和GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》的检验要求, 对6份样品进行检验, 并对分离的疑似菌进行鉴定。结果 CODE5检出肠炎沙门氏菌、CODE6检出甲型副伤寒沙门氏菌, 而CODE、CODE2、CODE3、CODE4未检出沙门氏菌。检验结果与能力验证组织单位结果一致, 结果满意, 顺利完成能力验证实验。结论 本次能力验证活动提高了实验室检测能力和检测技术水平。     

关于发布《食品微生物检验副溶血性弧菌检验》(GB4789.7-2013)等75项食品安全国家标准等的公告(2013年第7号)

<正>根据《中华人民共和国食品安全法》和《食品安全国家标准管理办法》规定,经食品安全国家标准审评委员会审查通过,现发布《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》(GB 4789.7-2013)等75项食品安全国家标准和《食品添加剂二丁基羧基甲苯(BHT)》(GB 1900-2010)第1号修改单。其编号和名称如下:GB 4789.7-2013食品微生物学检验副溶血性弧菌检验(代替GB/T 4789.7-2008)GB 4789.26-2013食品微生物学检验商业无菌检验(代替GB/T 4789.26-2003)GB 4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求(代替GB/T 4789.28-2003)GB 4789.31-2013食品微生物学检验沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验(代替GB/T 4789.31-2003)     

云南淡水鱼中副溶血性弧菌的污染情况及耐药性分析

目的了解云南省淡水鱼中副溶血性弧菌的污染和耐药情况。方法采集昆明、曲靖、大理、红河的淡水鱼110件,参照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》,分离副溶血性弧菌的疑似菌株,通过生化试验和飞行时间质谱仪进行鉴定;采用革兰阴性需氧菌药敏检测板对分离鉴定到的副溶血性弧菌进行药物敏感试验。结果 110件淡水鱼中有15件样品检出副溶血性弧菌,总检出率为13.6%,说明云南淡水鱼中存在一定程度的副溶血性弧菌污染。所有的副溶血性弧菌分离株具有耐药性,对头孢唑林(cefazolin,CFZ)的耐药率最高为100.0%,存在多重耐药菌株。结论本研究可为淡水鱼类养殖和消费提供科学依据,建议相关部门加强对水产养殖业抗生素使用及流通过程的监督管理,适度增加淡水鱼的安全性检测。     

乳粉中阪崎肠杆菌检测能力验证结果与分析

目的提升实验室检测乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的速度和准确性。方法依据GB4789.40-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》和经优化的SN/T1632.3-2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法第3部分:荧光PCR方法》以及能力验证作业指导书对乳粉中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)进行检测和结果判断。结果通过实时荧光PCR法的快速初筛,初步判断样品CODE29为阴性,样品CODE95为阳性;再经显色平板分离和VITEK2生化鉴定,结果显示:样品CODE29检出肺炎克雷伯杆菌、弗氏柠檬酸杆菌和大肠埃希氏菌;样品CODE95检出阪崎肠杆菌和大肠埃希氏菌。结论本次乳粉样品中克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检测能力验证结果合格,为提高相关微生物实验室的检测能力提供参考。     

顺义区市售双壳贝类中副溶血性弧菌和诺如病毒的耐药性及分型研究

目的了解北京市顺义区部分市售双壳贝类中副溶血性弧菌及诺如病毒的污染情况,为相关感染性腹泻的防治提供依据。方法 2017年7～10月采集顺义区市场的双壳贝类,取适量样品分离其消化腺,进行样品前处理,提取病毒RNA后采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测诺如病毒。剩余样品按照GB4789.7—2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌的分离鉴定。对检出的副溶血性弧菌进行毒力基因(tlh,tdh,trh)检测、耐药性分析和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 50份双壳贝类样品中有18份检出副溶血性弧菌(18株),检出率为36.0%;有8份样品携带诺如病毒。分离的副溶血性弧菌17株为tlh+tdh-trh-型,1株为tlh-tdh-trh-型;所有副溶血性弧菌均对氨苄西林耐药,对其他抗生素均敏感;PFGE图谱聚类后呈现多态性,存在多个克隆群。诺如病毒只在10月份检出,分布于牡蛎、蛏子和扇贝中,均为GⅡ型核酸阳性。结论顺义区市售双壳贝类中存在副溶血性弧菌和GⅡ型诺如病毒,需警惕感染风险。分离的副溶血性弧菌呈现多态性,但毒力基因携带率较低,对大多数抗生素敏感。     

H-NS基因作为靶基因的荧光定量PCR快速检测海产品中的副溶血性弧菌

目的:建立一种利用SYBR Green I荧光PCR反应快速、准确、便捷检测副溶血性弧菌的方法。方法:根据副溶血性弧菌的H-NS基因的保守区域设计引物,利用副溶血性弧菌的标准菌株以及12株其他种属的常见致病菌对引物的特异性和灵敏度进行评价。基于该基因利用SYBR Green I荧光PCR检测方法建立标准曲线,确定该检测方法的灵敏度。对用不同浓度的菌液污染的灭菌过的蚬子样品进行检测,确定该方法的的可行性。最后用该方法检测30份蚬子样品,并与国标GB4789.7-2013检测结果进行比较。结果:用H-NS基因作为靶基因检测副溶血性弧菌的SYBR Green I荧光PCR检测方法,建立的标准曲线的相关系数为0.998,检测灵敏度为7.3×10 CFU/m L。人工污染蚬子的检出限为6.7×102CFU/m L。对蚬子样品的检测结果为30份样品中有4份含有副溶血性弧菌,与国家标准方法 (GB4789.7-2013)的检测结果具有一致性。结论:表明该方法可以用于副溶血性弧菌的快速检测。     

传统培养法与荧光PCR法检测弧菌的方法评价

目的比较标准检测方法与杜邦BAX System Q7快速检测方法检测副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌。方法采用GB 4789.7—2013《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》、SN/T 1022—2010《进出口食品中弧菌霍乱弧菌检验方法》、DBS 13/004—2016《食品安全地方标准创伤弧菌检验》标准和杜邦BAX System Q7系统操作方法对1份同时污染副溶血性弧菌、霍乱弧菌和创伤弧菌的样品进行检测。结果BAX System Q7操作方法与标准操作方法检测结果一致,其中BAX System Q7可同时检测3种弧菌,用时20 h,而标准操作方法至少需要6 d。结论BAX System Q7检测方法与标准方法均具备高准确性,但相较于标准检测方法,BAX System Q7检测方法鉴定更快速、操作更简便,且3种弧菌可以同时鉴定。     

能力验证中沙门氏菌的分离鉴定与血清分型

目的通过参加NIFDC-PT-098乳粉中沙门氏菌检验的能力验证,提高本实验室的检测能力,增强实验室竞争力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对2份样品中的沙门氏菌进行分离和血清学鉴定。并以全自动荧光免疫分析系统(MINI VIDAS)进行快速初筛,利用全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号CODE423检出鼠伤寒沙门氏菌,其血清分型为O:4,5,12,H:I;1,2。编号CODE484未检出。结论本次能力验证获得满意结果,发现以国标法为基准,优先选用沙门氏菌属显色培养基平板和XLD平板为参照,同时使用VITEK2和MINI VIDAS作为辅助进行检测,综合这几种方法可确保实验结果的准确性,这为以后检验使用辅助方法检测提供了参考依据。同时本次能力验证也促进了实验室保持较高的检验水平。     

食品能力验证中沙门氏菌的分离和鉴定

目的为了提升实验室食品中沙门氏菌检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的沙门氏菌检测能力验证活动。方法依据中华人民共和国国家标准GB 4789.4-2010,采用传统分离方法和血清学鉴定,联合全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2-compact)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号为CODE1样品+CODE1奶粉混合样检出纽波特沙门氏菌和科林德尔沙门氏菌,CODE3样品+CODE3奶粉混合样检出维普拉沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和埃科沙门氏菌,其余8个样品未检出。结论顺利完成本次能力验证活动。     

实时荧光跨越式滚环等温扩增结合PMA检测虾产品中的活副溶血性弧菌

目的：为快速检测虾产品中的活副溶血性弧菌,建立一种实时荧光跨越式滚环等温扩增（real-time fluorescent saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA）与叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）染料相结合的检测方法。方法：依据副溶血性弧菌的特异性基因toxR设计并筛选引物,对PMA-RF-SRCA检测方法进行特异性、灵敏度及检出限分析,并与PMA-实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）方法进行对比。对76 份样品进行检测,以GB 4789.7—2013方法为标准,对PMA-RF-SRCA方法的相对敏感性、相对特异性、相对符合率进行计算,以对本方法的实用性进行评估。结果：此方法的引物特异性良好,12?株副溶血性弧菌结果均呈阳性,18?株非副溶血性弧菌结果均呈阴性;PMA-RF-SRCA法灵敏度为3.2×100?CFU/mL,检出限为2.08×101?CFU/g,此方法的灵敏度是PMA-real-time PCR的100?倍。经过实际样品检测,PMA-RF-SRCA方法的敏感性、特异性、符合率分别为100.00%、96.00%和98.68%。结论：PMA-RF-SRCA方法特异性强、灵敏度高,可用于虾产品中的活副溶血性弧菌的检测与筛查。     

RPA等温扩增技术检测副溶血性弧菌

目的:建立副溶血性弧菌的RPA-exo荧光探针快速检测方法。方法:采用重组酶聚合酶扩增技术,以irgB为靶基因设计副溶血性弧菌的RPA-exo引物探针,对引物探针进行组合筛选,建立RPA-exo荧光探针快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、模拟污染实验及实际应用效果进行测试。结果:建立的方法15 min可获得结果,具有高特异性,无交叉反应;灵敏度为1.0×103 CFU/mL,DNA检测限为0.35 pg/μL,质粒检测限为1×103 copies/μL;模拟污染实验中加入终浓度为1.36×103 CFU/mL时,无需增菌即可被检出;实际样品检测中,10份水产品,有3份样品被检出,检测结果与国标GB 4789.7-2013结果一致。结论:本研究成功建立了副溶血性弧菌的RPA-exo快速检测方法。     

食品中沙门氏菌检出能力验证结果与分析

目的为了提升实验室的食品中沙门氏菌检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-010食品中沙门氏菌检出能力验证。方法利用全自动免疫检测系统(VIDAS)对能力验证中的5个样品进行快速筛查,依据GB4789.4-2010沙门氏菌检验进行血清学试验,采用16S r DNA全序列分析、全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对分离出的疑似菌进行鉴定。结果编号为CODE 1的样品检出阿贡纳沙门氏菌和婴儿沙门氏菌,CODE 3检出蒙得维的亚沙门氏菌,CODE 5检出鼠伤寒沙门氏菌,CODE 2和CODE 4未检出。结论 5个样品测试均取得优秀的结果。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证

目的通过能力验证提升食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力和实验室质量管理水平。方法依据GB 4789.30-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》进行检测,利用BAX system Q7全自动病原微生物检测系统对能力验证中的3个样品进行快速筛查,采用VITEK2COMPACT全自动细菌鉴定系统、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和溶血素O基因(hlyA)序列比对分析鉴定可疑菌株。结果编号CODE1和CODE3的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,编号CODE2的样品未检出。结论本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测能力验证测试,取得了满意的实验结果。