免疫学检测羊乳中掺入牛乳成分

由于营养、价格和原料等原因，市场上在羊乳中掺入牛乳的现象常有发生。针对这种乳源性掺假陆续产生了多种检测方法，本文主要综述了以ELISA为主的免疫学快速检测方法。     

羊乳及其奶酪中掺入牛乳检测的研究

羊乳及由其制作的传统奶酪,越来越受到国内人们的青睐。而在国内外,羊乳及其奶酪中掺入牛乳的掺假行为,却常有发生。所以,迫切需要一种准确的检测方法,来避免这种掺假行为对我国的进出口贸易造成损失。文中主要综述了电泳,色谱,免疫化学,DNA技术等方法检测羊乳及其奶酪中掺入牛乳的研究状况。     

掺假羊乳及其制品中牛乳的检测技术研究进展

羊乳具有营养价值高、蛋白质组成更接近人乳、脂肪球直径小及致敏性低等优点,更利于人体消化吸收,受到消费者和乳品企业的青睐.近年来我国羊乳产业发展迅速且潜力巨大,但由于受羊乳产量和养殖规模的限制,羊乳价格昂贵,市场中存在羊乳及其制品掺假牛乳的现象,且掺假手段多样,难以辨别.为了保证消费者的健康和权益,保障羊乳市场良性发展,...     

百菌清酶联免疫吸附检测方法的影响因素

以方阵滴定法筛选适合百菌清酶联免疫吸附检测的包被抗原和抗体浓度,同时研究反应缓冲体系和pH值等因素对酶联免疫吸附方法的影响以及百菌清多克隆抗体的亲和性和特异性,建立蔬菜中百菌清残留检测的间接竞争酶联免疫吸附法。结果表明:方法最低检测限(IC20)为0.0123ng/mL,回收率为84.0%～89.8%,变异系数为3.0%～7.6%,与百菌清结构类似化合物交叉反应率均小于0.01%,可在试剂样品检测中应用。     

两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量检测研究

分别以兔血清IgG与鸡卵黄抗体(IgY)为检测抗体,建立了两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量方法。牛乳κ-酪蛋白分别免疫新西兰大白兔和临产母鸡,经亲和层析分离纯化后得到anti-κ-CN-IgG与anti-κ-CN-IgY两种抗体。两种抗体均与β-酪蛋白、α-乳白蛋白和乳清粉存在一定交叉反应,抗体与相应抗原进行免疫吸收后得到高特异性IgG与IgY。用吸收后的anti-κ-CN-IgG建立的间接ELISA法,当标准κ-CN质量浓度在0.098~3.125 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度具有线性关系,变异系数小于1%,回收率在99.10%~101.1%之间;用吸收后的anti-κ-CN-IgY检测κ-CN,在0.098~6.25 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度成良好的线性关系,变异系数小于2%,回收率在98%~100.8%之间。当三聚氰胺掺假量在0~20%时,两种抗体均能通过κ-CN的定量检测而实现乳品的掺假检验。     

CP4-EPSPS蛋白抗体的制备及其夹心ELISA定量检测方法的建立

为了快速高效地检测转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆,本研究利用已制备的CP4-EPSPS蛋白免疫实验动物,获得5株CP4-EPSPS蛋白鼠单克隆抗体及3份羊抗血清,建立了CP4-EPSPS蛋白双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,同时利用该方法对结荚期的Cp4 epsps转基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体1D12,工作浓度1.25 μg/mL,包被酶标板,4 ℃静置过夜,检测样品20 ℃孵育45 min,检测抗体8092,工作浓度2.5 μg/mL,20 ℃孵育30 min;CP4-EPSPS蛋白在模拟大豆环境中最低检测限为3.6 ng/mL,检测范围为7.5~125 ng/mL;重复性变异系数小于15%。利用上述检测条件,在转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子中均检测到CP4-EPSPS蛋白的表达,且各组织部位表达量差异显著,其中CP4-EPSPS蛋白在叶片中表达量最高,茎、种子、根中CP4-EPSPS蛋白表达量逐渐降低。     

花粉中土霉素残留的ELISA检测

研究了花粉中土霉素的提取方法，得出最佳提取方案。以自制抗土霉素抗体建立的间接竞争ELISA法对花粉中土霉素的残留量进行了检测，所建立的间接竞争酶联免疫吸附分析法（ELISA）对土霉素的检测范围为50ng／mL～200ng／mL，在此范围内对人工污染样品的平均回收率为92．61％～104．36％。     

间接竞争ELISA检测食品中的邻苯二甲酸二丁酯

以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原。通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二丁酯抗血清,利用纯化获得的抗体和包被抗原建立邻苯二甲酸二丁酯间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA)。该方法的IC50为40.68μg/L,最低检测限IC_(15)为1.98μg/L,方法对邻苯二甲酸二丁酯具有较好的特异性。经对白酒、牛奶、食用油样品进行检测,添加回收率为84.57%～102.40%,用气相色谱—质谱法(GC-MS)进行验证,两种方法均呈现良好的线性相关性(R~2=0.990 8)。研究建立的方法可以被应用于食品中塑化剂邻苯二甲酸二丁酯的快速检测。     

牛乳铁蛋白的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

用牛乳铁蛋白(Bovine Laetoferrin，BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体，琼扩效价最高为l：64。经ELlSA方法检测，该抗体与牛乳中的主要蛋白质：α—乳清蛋白、β—乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性，说明抗体特异性良好。以BLf纯品为包被抗原，自制抗体为一抗，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG为二抗，邻苯二胺(OPD)为底物，建立了BLf的竞争抑制性ELISA方法。包被抗原及抗体的浓度均由方阵稀释实验确定。所建立的ELlSA方法孔间误差1．6％，板间误差4．3％，灵敏度25μg／L，检测范围25～800μg／L。标缝曲线线性方程（Logit）Y=-1.488IgC 3.8116，相关系数R=0.990。     

牛乳β-酪蛋白检测的间接ELISA方法

将从干酪素中提取的牛β-酪蛋白对新西兰白兔进行多次皮下免疫注射.采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体纯化,以制备兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体.最后将纯化的抗体用于间接ELISA法检测牛乳β-酪蛋白的含量.     

牛、羊乳粉的DSC热学性质比较及掺假分析

为明确羊乳粉、牛乳粉的热学特征,采用差示扫描量热法（differential scanning calorimetry,DSC）对真空冷冻干燥制备的全脂羊、牛乳粉样品以及高比例掺假（75%、50%、25%）和低比例掺假（10%、5%、3%、1%）牛乳粉的混合羊乳粉样品进行热力学分析。结果表明,全脂羊乳粉和全脂牛乳粉在DSC热学指标上存在差异,全脂牛乳粉相比全脂羊乳粉缺失一个脂肪特征熔融吸热峰b,蛋白质熔融吸热峰c峰值温度和热焓值较低,而乳糖熔化分解峰e热焓值较高。对于掺入不同比例牛乳粉的羊乳粉,通过检测是否存在吸热峰b及其热焓值,可判断样品掺假牛乳粉比例是否在25%以下及判断掺入牛乳粉的量;在不同比例掺假样品中检测乳糖熔化分解峰e的焓值可判断羊乳粉掺入牛乳粉的掺假量。因此,DSC技术可以实现对羊乳粉、牛乳粉热学性质的分析和评价,也可作为乳制品行业质量保证和真实性鉴别的潜在分析工具。     

响应曲面法优化羊乳牛乳混合干酪出品率

采用响应曲面法建立了半硬质羊乳牛乳混合干酪出品率的二次多项数学模型,验证了模型的有效性,并考察凝乳酶添加量、酸化值和CaCl2添加量对混合干酪出品率的影响,优化出混合干酪出品率的工艺参数为凝乳酶添加量3747.25SU,酸化值5.99,CaCl2添加量0.04%,并且干酪的品质较好。     

母乳、牛乳及山羊乳脂肪酸组成的差异分析

采用气质联用法(GC-MS)测定东北区域不同泌乳期的母乳及牛乳和山羊乳常乳脂肪酸组成,并对其组成和含量进行差异分析,旨在为母乳脂质组学及以牛羊乳为基质的婴儿配方食品提供一定的理论基础。结果表明:母乳中主要脂肪酸为棕榈酸、油酸、亚油酸等,其中油酸含量最为丰富。饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量在不同泌乳期存在差异,其中SFA差异显著(p<0.05),初乳、过渡乳和成熟乳SFA含量分别为36.16%、37.89%、38.10%。牛乳和山羊乳主要以SFA为主,山羊乳SFA含量最高(69.07%),SFA中辛酸和癸酸是羊乳的特征脂肪酸,其含量显著高于母乳和牛乳(p<0.05)。山羊乳中中链脂肪酸(MCFA)含量最高(21.03%),是牛乳的1.5倍。其中,母乳SFA:MUFA:PUFA的比例为1.41:1.29:1,牛乳为19.12:9.98:1,山羊乳为11.14:3.98:1,山羊乳脂肪酸组成在比例上更加接近母乳。山羊乳在婴儿配方食品开发方面有更高的优势和开发空间。     

羊乳乳清蛋白组成和功能及其与人乳、牛乳的对比分析

本研究将羊乳、牛乳、人乳中乳清蛋白进行分离并结合液质联用技术鉴定,在羊乳、牛乳、人乳乳清蛋白中分别鉴定出156、278、454种蛋白质。与牛乳与人乳乳清蛋白对比显示,羊乳含有99种特异性表达蛋白质,与牛乳和人乳分别有31种和15种相同表达蛋白质。通过分析基因本体(gene ontology,GO)功能注释发现,羊乳乳清蛋白在生物过程中主要发挥生物调节作用;在分子功能上,主要体现在结合作用方面;在细胞组成上,参与的细胞组成主要为细胞器区和胞外区。羊乳乳清蛋白在以上三种功能上与人乳有较大差距,但与牛乳相近。通过分析京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路可知,羊乳主要参与补体和凝血级联反应以及吞噬作用,对人体免疫能力有积极影响。对羊乳与人乳、牛乳乳清蛋白组成及功能区别的研究,为羊乳的进一步研究和开发提供一定的理论参考。     

山羊乳与牛乳配方乳粉的致敏性比较

山羊乳是一类营养丰富且易于消化的乳品,因其营养成分与牛乳相近而受到广泛关注。本研究通过蛋白质潜在致敏性树状评估策略（生物信息学、消化稳定性、血清学研究、动物模型）对山羊乳配方乳粉的致敏性进行评价,并研究山羊乳配方乳粉与牛乳过敏患者血清中免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）E之间存在的交叉反应性。结果表明,山羊乳配方乳粉的167 种蛋白质中,β-乳球蛋白和α-乳清蛋白含量显著低于牛乳配方乳粉（P＜0.05）,山羊乳配方乳粉在模拟胃液中更易消化,且与过敏患者血清的结合能力弱于牛乳配方乳粉,动物模型结果表明山羊乳配方乳粉致敏小鼠体温下降幅度、临床过敏症状评分、血清中特异性IgE和IgG1抗体水平、血浆中组胺水平、血管渗透性及组织炎症程度等均显著低于牛乳配方乳粉组致敏小鼠（P＜0.05）,交叉反应性结果表明山羊乳配方乳粉能与牛乳过敏患者血清结合,但结合能力明显低于牛乳配方乳粉。结论：与牛乳配方乳粉相比,山羊乳配方乳粉的致敏性较弱,可作为牛乳的替代品,降低牛乳过敏性疾病的发病风险。     

羊奶牛奶混合干酪加工工艺研究

为改进羊奶牛奶混合干酪加工工艺,本实验以羊奶粉和鲜牛奶为原料,研究了牛奶添加比例、不同凝乳酶、杀菌条件、酸化条件和氯化钙添加量对混合干酪凝乳效果、出品率和感官品质的影响。结果表明,添加35% 的鲜牛奶,选用羔羊皱胃酶为凝乳酶,巴氏杀菌(63℃,30min),酸化pH6.20,氯化钙添加量为0.02% 时混
合干酪的品质较好。     

酶联免疫法检测呕吐毒素的方法研究

目的:利用抗呕吐毒素的特异性单克隆抗体和包被抗原,建立间接竞争酶联免疫法(ELISA)来检测谷物及其制品中呕吐毒素含量。方法:通过方阵滴定实验确定呕吐毒素最佳抗体浓度和最佳包被抗原浓度,应用酶联免疫测试盒对谷物及其制品中的呕吐毒素进行定量检测的方法学评价,来确立该方法的各项技术指标。结果:方法的最低检测浓度10μg/L;平均RSD为5.8%;回收率平均值为104%;用该方法研制的测试盒在4℃环境下可稳定6个月以上;检测时间小于2h;结论:该方法简便、安全、灵敏度高、重复性好、特异性强、能定性和定量检测谷物及其制品中的呕吐毒素含量。     

牛羊乳混掺检测鉴别技术研究进展

近年来,羊乳以其较好的营养特性渐成流行趋势,由于季节波动的影响,其价格远高于牛乳。在经济利益的驱动下,羊乳中掺入牛乳的现象时有发生,且呈现日趋严重的趋势,制约了羊奶产业的良性发展,迫切需要建立快速准确的牛羊乳混掺定性定量检测技术体系。本文对牛羊乳的差异及据此建立的、业已报道的相关检测技术进行了比较分析。常用检测技术主要包括色谱技术(气相色谱、气相色谱-质谱联用、高效液相色谱-质谱联用、高效液相色谱)、电泳技术(聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电点聚焦电泳、毛细管电泳)、酶联免疫技术、聚合酶链式反应技术等,介绍了各种检测技术的原理及特点,并分析其可行性,为探索新的高效检测方法提供了思路,为牛羊乳混掺检测分析提供文献参考。     

ELISA法快速检测水产品中副溶血性弧菌

以副熔血性弧菌抗原免疫新西兰大白兔获得特异性抗体,利用此抗体,进行间接竞争ELISA法实验,确定了抗原抗体最佳反应浓度和一抗稀释度分别为107cfu/mL和1:4000,酶标二抗IgG-HRP最佳工作稀释度为1:1000.以此方法分别对人工染菌水产品及实际水产品进行检测,检测下限为104cfu/mL,检测时间为8h;而经8h增菌后,其检测下限为103cfu/mL.此法与常规方法检测结果完全一致,具有很高的实际应用价值.